の分離キイロショウジョウバエ精巣

この手順の全体的な目標は、生後0〜3日の雄のショウジョウバエメランガスターから精巣を分離することです。これは、オスのハエに麻酔をかけ、一滴の氷で精巣を解剖することによって達成されます。2本の解剖針を使用して顕微鏡下でPBSを冷やし、ハエの腹部を胸部から引き離します。

最後に、組織の他の部分から精巣を採取し、免疫蛍光法、染色法、全RNAおよびタンパク質の単離など、さまざまな分析技術で使用するために採取します。解剖された精巣の識別は、腸と区別するのが難しいため、習得が難しい場合があるため、この方法を視覚的にデモンストレーションすることが重要です。その手順を実演するのは、私の研究室の技術者であるshemei maさんです。

まず、氷の入ったバケツを組み立て、針を解剖し、約100ミリリットルのリン酸緩衝生理食塩水を組み立てます。PBSを氷のバケツに入れて冷やします。スライドに合うように白い20ポンドの紙をカットして、背景が黒い顕微鏡スライドを作成します。

そして、片面を黒く着色します。油性マーカーを使用して、紙をスライドの所定の位置に接着し、スライドをCO2パッドに固定します。解剖顕微鏡で、生後0〜3日のハエのボトルにCO2の流れで麻酔をかけ、パッドに空にします。

取り付けられた顕微鏡スライドの近くで、特徴的な暗い色の交配フックでオスのハエを識別し、顕微鏡の中央に約50マイクロリットルの氷冷PBSを50〜100ピペットで選別します。液滴を形成するスライド。PBSの滴に解剖針を浸し、ハエの腹側にそっと触れて、針にくっつくようにしてオスのハエを拾います。

PBSのドロップにフライを置き、胸部とフライの腹部の間に1本の針をしっかりと押し込みます。もう一方の針を6番目と7番目の腹部セグメントの間に押し込み、腹部を胸部から引き離します。精巣を他の臓器、特に腸から切り離してからかいますが、腸内の精巣を区別するために似ている場合があります。

精巣は常に入ってきて、ペアは特徴的ならせん状をしており、腸組織よりも白いことを忘れないでください。氷冷PBSが入ったマイクロ遠心チューブに精巣を採取し、氷の上に保管して数時間保存します。マスタードが1つになると、この手順に従って1匹のフライを1分以内に解剖できます。

また、低分子サイレンシングRNAやマイクロRNAのディープシーケンシングなど、特定の変異型ハエのRNAレパートリーがどのように変化するかなどの疑問に答えるために、他の方法も実施することができます。