低聚淀粉样蛋白-β的立体灌注到小鼠海马

该程序的总体目标是将 Liga meric a beta 1 42 立体定位注射到海马体的齿状回中。这是通过首先准备 liga meric（beta 1 42 解决方案）来实现的。第二步是确定注射坐标。

接下来，通过手术暴露动物的头骨并在其上引入两个孔以进行针头插入。最后一步是将注射器针头移动到最终位置并注入 beta 1 42。最终，立体定向 Abeta 1 42 注射法用于检查 Abeta 1 42 在活体动物中的毒性作用。

与现有的转基因 Abeta 42 小鼠模型相比，该技术的主要优点是寡聚体 ALA 42 可以以特殊和时间的方式升高，并可靠地再现转基因小鼠模型中缺乏的细胞死亡病理学。这种方法可以帮助回答阿尔茨海默病领域的关键问题，例如病理过程如何在阿尔茨海默病中传播。要开始此过程，请剃掉麻醉小鼠的头部以露出皮肤。

接下来，将鼠标放在立体定位框架中的加热垫上。然后将其门牙固定在护牙器中，并将鼻托固定在鼠标的脸上。之后，将耳杆放入听觉孔中，以固定头部进行检查。

如果头部已固定，请轻轻按压它并确保它不会移动。然后在双眼上涂抹软膏以保持湿润。之后，将 Betadine 涂抹在颅骨上方的皮肤上，然后用无菌棉签涂抹 70% 乙醇，对手术部位进行消毒。

交替进行 Betadine 和乙醇清洁 2 次。现在用手术刀在头皮中线做一个 2 到 3 毫米的切口。使用直的细剪刀将切口线延长至约 1.0 厘米，以露出颅骨的矢状缝合线 bgma 和 lambda。

之后，用镊子将皮肤拉开。用浸泡有无菌生理盐水的无菌棉签清洁颅骨。然后用干净、干燥的棉签擦干颅骨。

接下来，标记一个点。在 Bre 马上，使用微型纵器定位汉密尔顿注射器，使针尖刚好接触 bgma 上的点。然后记录 DV 坐标，在 Lambda 点上标记一个点，通过将注射器向后移动到 Lambda 点，确保颅骨的 AP 轴水平。

针尖应像接触 bgma 点一样接触 Lambda 点。之后，记录 DV 位置。Bre、MA 和 Lambda 的 DV 坐标应在 0.5 毫米以内。

现在将针尖返回到 BMA 点。记录起始 AP 位置。然后，通过从起始 ap 中减去 2 毫米来计算结束 AP 位置。

将注射器针头协调并重新定位到最终的 AP 坐标。接下来，记录当前的 ML 坐标。通过从起始 ml 中增加或减去 1.3 毫米来计算左右结束 ml 坐标。

协调注射器针头并将其移动到结束 ML 坐标。将针尖接触两个末端 ML 坐标上的颅骨表面，并确保 DV 坐标在 0.5 毫米以内。在结束 ml 坐标处，将针头向上拉，在颅骨上方 0.5 到 1 厘米处。

用深色超细点标记在头骨上标记一个点。对颅骨的对侧重复此步骤。然后将注射器移开。

在左侧或右侧 ml 上钻一个孔。使用 0.8 毫米钻头在头骨上协调。对对侧重复此步骤。

然后，将注射器移动到新引入的孔之一。将针头降低到刚好越过颅骨，小心不要刺穿大脑，以确保针头已经穿过颅骨。轻轻地将针头推向颅骨，以确保针头不会从孔中出来。

接下来，记录起始 DV 坐标。计算结束 dv。通过从起始 DV.Coordinate 中减去 2.2 毫米进行坐标，然后将指针降低到结束 db。

然后，Coordinate 设置立体定向注射器泵，以每分钟 0.5 微升的速度将 4 微升 β 1 42 注入齿状回。输注后，让针头再留在原位一分钟，以尽量减少溶液从注射部位回流。之后，将针头移动到大脑的另一侧并重复该过程。

现在，拧下耳杆。使用学生标准型镊子将头皮拉合并用缝合线密封伤口。取下前罩并取下鼠标。

1 毫升无菌盐水注入小鼠体内以补水，并以每公斤 0.1 毫克/公斤的剂量皮下注射丁丙诺啡以缓解疼痛。然后，将鼠标转移到 42 摄氏度热板顶部的干净空笼中，直到它醒来。然后将老鼠放回笼子里，放满充足的食物和水。

该图显示了 beta 1 42 和载体在 9 个月大小鼠的左右齿状回中的注入。虚线表示牵引的注射，箭头表示塌陷的齿状回。在注射 Abeta 1 42 后 1 周内，齿状回在 7 天和 14 天附近分子层和多态性细胞层表现出 Abeta 1 42 水平升高。

Abeta 1 42 引起隧道阳性染色的增加和齿状回厚度的减少，证实了 Abeta 1 42 的神经退行性作用。在这里，逆行示踪剂氟金与 Abeta 1 42 一起注射到齿状回中。注射后 7 天，在基底前脑中检测到氟金，表明标记物通过胆碱能神经元逆行转运。

选择基底前脑中的 Fluorgold 阳性神经元进行定量。注射后 7 天，Abeta 1 42 引起隧道增加和聊天减少。基底四脑中的阳性神经元 一旦掌握了这项技术，如果作得当，可以在大约 30 分钟内完成。

遵循此程序，可以使用其他方法回答其他问题，例如研究分子机制以解决淀粉样蛋白输注对大脑的机制影响。感谢您观看我们的视频，希望该方法对您的实验有用。