Environment
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 20 seconds.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Undersøgelse Neurobehavioral Virkninger af miljøforurenende stoffer på Zebrafisk Larver
Summary February 5th, 2020
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
En detaljeret eksperimentel protokol præsenteres i dette papir til evaluering af neurobehavioral toksicitet af miljøforurenende stoffer ved hjælp af en zebrafisk larver model, herunder eksponeringsprocessen og test for neurobehavioral indikatorer.
Transcript
Vores protokol giver en klar proces til undersøgelse af de neurobehavioral virkninger af stoffer og forurenende stoffer af interesse på zebrafisk larver og for at afsløre den potentielle neurotoksicitet af disse stoffer. Teknikken kan udføres ved hjælp af høj gennemløbstest af neurobehaviors i zebrafiskmodellen. Denne metode kan anvendes til at evaluere allel-neurobehavioral virkninger af forurenende stoffer til at påvise potentielle neurotoksicitet på os mennesker, som zebrafisk genom har en høj homologi med mennesker, så det kan give indikationer for kemisk forvaltning og den offentlige sundhedsproblemer forårsaget af forurenende stoffer.
Som zebrafisk har den fordel, høj gennemløb screening, denne metode giver indsigt i både udvikling af psykofarmaka og miljømæssige toksikologi forskning. Lad dig ikke skræmme af at studere det første eksperiment. Hvis du følger protokollen, vil du få et vellykket resultat.
Mindst to timer før du udfører et eksperiment, indstille rumtemperaturen til 28 grader Celsius og tilføje 800 mikroliter eksponering løsning til hver brønd af en 48-brønd mikroplade. Brug derefter en en-milliliter pipette med en modificeret spids til at overføre en larve i 200 mikroliter eksponeringsopløsning til hver brønd af mikropladen som forberedelse til et bevægelses- og vinkelvinkeleksperiment. For at forberede en seks-brønd mikroplade til social adfærd eksperimenter, tilføje fire milliliter eksponering løsning til hver brønd af de seks brønd mikroplade og overføre to larver i 200 mikroliter eksponering løsning til hver brønd.
Før testen påbegyndes, skal du åbne programmet til overvågning af høj overførselshastighed og vælge modulet med sporingsrotationer af stivinkler. Overfør mikropladen med 48 brønde til optageplatformen, og træk dækslet ned. Klik på Fil og generer protokol for at begynde at generere en ny protokol og indtaste 48 i placeringen Placeringsantal.
Klik på Parametre, protokolparametre og -klokkeslæt, angiv eksperimentvarigheden til en time og 10 minutter og integrationsperioden til 60 sekunder. Brug elliptisk form værktøj, tegne en cirkel rundt øverst til venstre godt. Markér cirklen, og klik på Kopiér, Øverste højre markering, Sæt ind og Vælg.
Brug musen til at trække den kopierede cirkel til øverste højre hjørne, og klik på Kopiér, Øverst til højre,Sæt ind og Vælg igen. Træk derefter den kopierede cirkel til nederste højre hjørne, og klik på Opret og ryd mærker. Systemet vil automatisk tegne en cirkel over hver anden brønd af pladen.
Klik derefter på Tegnskala, og tegn en kalibreringslinje på skærmen. Angiv linjens længde, angiv enheden, og klik på Anvend på gruppe. Indstil dyrefarven til sort og sæt detektionstærsklen til 16 til 18 for at gøre det muligt at detektion af dyrene, indstille den inaktive til lille hastighed til 0,5 centimeter i sekundet og den lille til store hastighed til 2,5 centimeter i sekundet.
Indstil kurvevinkelklasserne fra minus 180 til plus 180 som angivet. For at indstille lysforholdene skal du klikke på Parametre, Lyskørsel, Bruger en af de 3 udløsningsmetoder nedenfor og Forbedrede stimuli til at indstille lysforholdene. Klik på Edge, og angiv en mørk periode på 10 minutter efterfulgt af tre cyklusser af skiftende 10 minutters lyse og mørke perioder.
Gem derefter protokollen. Når alle parametrene er indstillet, skal du skrue ned for belysningen i testrummet og lade larverne akklimatisere sig i systemet i 10 minutter. Klik på Eksperimentér og Udfør i slutningen af akklimatiseringsperioden, og opret den mappe, hvor de eksperimentelle filer skal gemmes.
Angiv derefter resultatnavnet, og klik på Baggrund og Start. Klik på Eksperiment og Stop i slutningen af eksperimentet. Derefter returneres den 48-brønd mikroplade tilbage til lyskubvøsen til efterfølgende eksperimenter.
Da hver gruppe kan omfatte 16 dyr, kan systemet bruges til at udføre test af bevægelse og stivinkel med højt gennemløb under forskellige behandlingsforhold i en enkelt 48-brønds mikroplade. Larvernes sociale aktivitet kan testes ved hjælp af seks brøndplader. I dette repræsentative eksperiment viste den højeste koncentrationsgruppe af BDE-47 en udtalt hypoaktivitet i den mørke periode, mens der ikke blev observeret nogen ændringer som følge af BDE-47-eksponering i lysperioderne.
Endvidere udførte den høje koncentrationsgruppe på 6-hydroxy-BDE-47 færre rutinemæssige og gennemsnitlige sving fem dage efter befrugtningen. Der blev dog induceret mere responsive sving i eksponeringsgrupperne 6-methoxy-BDE47. Zebrafiskens sociale aktivitet blev stimuleret af kloreret paraffin-70 og den kortkædede chlorerede paraffin-52b, mens den langkædede klorerede paraffin-52a forkortede varigheden af larvernes kontakt.
Det er vigtigt at sikre, at de overførte larver til testen skal have en normal svømning evne og ingen misdannelser. Andre variabler, såsom farve præference, lys-mørk præference, alle mørke, hale bevægelser af zebrafisk, kan indgå for at besvare yderligere spørgsmål om neurobehavioral toksicitet af miljøforurenende stoffer. BDE-47-eksponeringsopløsningerne er neurotoksiske og har et endokrint disruptionpotentiale, så sørg for at undgå direkte kontakt med huden.
Please enter your institutional email to check if you have access to this content
has access to
BackLogin to access JoVE
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
To receive a free trial, please fill out the form below.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You
Thank You
Thank You
