Generation of Monocyte-Derived Dendritic Cells with Differing Sialylated Phenotypes

Vanessa C. C. Luz; Z&#233;lia Silva; Patr&#237;cia Sobral; Ankit Tanwar; Rachel L. Paterson; Paula A. Videira

doi:10.3791/65525

Journal

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Immunology and Infection

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シアル化表現型の異なる単球由来樹状細胞の作製

Generation of Monocyte-Derived Dendritic Cells with Differing Sialylated Phenotypes

JoVE Journal
Immunology and Infection

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JoVE Journal Immunology and Infection

Generation of Monocyte-Derived Dendritic Cells with Differing Sialylated Phenotypes

シアル化表現型の異なる単球由来樹状細胞の作製

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13:36 min

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October 20, 2023

DOI:

10.3791/65525-v

DOI:

10.3791/65525-v

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13:36 min

October 20, 2023

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Vanessa C. C. Luz^1,2, Zélia Silva^1,2, Patrícia Sobral^1,2,3, Ankit Tanwar^4,5, Rachel L. Paterson⁶, Paula A. Videira^1,2,7

¹Associate Laboratory i4HB – Institute for Health and Bioeconomy, NOVA School of Science and Technology,Universidade NOVA de Lisboa, ²UCIBIO – Applied Molecular Biosciences Unit, Department of Life Sciences, NOVA School of Science and Technology,Universidade NOVA de Lisboa, ³LAQV and REQUIMTE, Departamento de Química, Faculdade de Ciências e Tecnologia,Universidade NOVA de Lisboa, ⁴Department of Microbiology and Immunology,Albert Einstein College of Medicine, ⁵Department of Oncology,Albert Einstein College of Medicine, ⁶Stemmatters, Biotecnologia e Medicina Regenerativa SA, Parque de Ciência e Tecnologia Avepark,Zona Industrial da Gandra, ⁷CDG & Allies – Professionals and Patient Associations International Network (CDG & Allies – PPAIN), Department of Life Sciences, NOVA School of Science and Technology,Universidade NOVA de Lisboa

Transcript

糖鎖免疫学グループの研究範囲は、ヒトの健康と疾患における糖鎖免疫学の役割を研究することです。本研究は、糖鎖修飾によって調節される生体機構を解明し、糖鎖修飾によるがんや先天性疾患に対する糖鎖を用いた新規治療法の発見を目指しています。私たちは、特に応答時に関連分子の機能に影響を与えるシアル化糖鎖に着目してきました。

シアル酸含量を変化させる技術や、糖鎖結合タンパク質をハイスループットに溶解するためのマルチモーダルプラットフォームを開発し、臨床応用の可能性を秘めています。この分野の研究を進めるために、糖鎖プロファイリング、選択または抗体染色、質量分析、免疫組織化学、細胞株を疾患モデルとするin vitroアッセイ、酵素および代謝工学によるシアル酸含量操作などのいくつかの技術を使用しています。現在の実験上の課題は、シアル化糖鎖とレクチンの複雑な相互作用を理解することです。

いくつかの免疫応答には、メカニズムと機能的影響があります。シアル酸は、樹状細胞の効力とMHC1の代謝回転を調節します。この発見により、新しい生物学的および病理学的メカニズムが特定され、革新的な治療法が開発されました。

また、新しい免疫経路と治療調節のアプローチも特定しました。治療用ヒト単球由来樹状細胞のex vivo産生における問題の1つは、完全に成熟できないことです。このプロトコルはDCsの成熟が細胞生存率を維持している間シアリダーゼが付いている細胞表面を酵素的に扱うことによって達成することができることを示す。

この方法は費用対効果が高く、時間を節約できます。シアル酸代謝阻害剤と比較して、シアリダーゼ処理は、細胞の生存率を維持しながら、細胞表面のシアル酸を迅速に除去する方法を提供します。糖鎖におけるシアル酸含量の役割を理解することは、がんにおけるシアル酸糖鎖の重要性に関するいくつかの先行認識を生み出し、新しい疾患メカニズムとニューロパス戦略の同定を促進します。

Summary

シアリダーゼ処理を使用して、単離された末梢血単核細胞(PBMC)から脱シアル化ヒト単球由来樹状細胞(mo-DC)を生成するための独自の包括的なプロトコルが提示されます。さらに、mo-DCの表現型および機能特性を評価し、シアリダーゼ処理がmo-DCの成熟レベルをどのように改善するかを評価する方法が記載されている。