Un protocolo simple, rápido y parcialmente automatizado para el aislamiento de núcleos individuales de tejidos de mamíferos congelados para la secuenciación de núcleos únicos
A Simple, Quick, and Partially Automated Protocol for the Isolation of Single Nuclei from Frozen Mammalian Tissues for Single Nucleus Sequencing
Un protocolo simple, rápido y parcialmente automatizado para el aislamiento de núcleos individuales de tejidos de mamíferos congelados para la secuenciación de núcleos únicos
Esta investigación se centra en apoyar los estudios de descubrimiento de fármacos que utilizan la secuenciación de ARN de un solo núcleo para investigar la eficacia y la seguridad de posibles tratamientos. Por lo tanto, estamos desarrollando protocolos estandarizados de extracción de núcleos para muestras frescas de tejido congelado de varios órganos. Nuestro objetivo era automatizar y estandarizar la extracción de núcleos para lograr resultados consistentes y confiables mediante la reducción de la variabilidad no biológica.
La ventaja es la automatización parcial mediante el uso de un disociador robótico y el flujo de trabajo simple y corto que se puede aplicar en varias muestras de tejido de diferentes especies. Tener protocolos estandarizados puede ayudarnos a responder preguntas sobre la biodistribución de medicamentos, así como a explorar los mecanismos subyacentes a cualquier señal de seguridad que podamos observar. En el futuro, probaremos la aplicabilidad de nuestro protocolo para otras aplicaciones posteriores, como ATAC-seq o multiómica.
También trataremos de establecer protocolos para detectar transgenes virales expresados en núcleos individuales.
Summary
Automatically generated
El estudio describe un protocolo simple, rápido y parcialmente automatizado para aislar núcleos de alta calidad de tejidos de mamíferos congelados para la secuenciación posterior de ARN de núcleos individuales.
Stalder, L., Koechl, F., Hahn, K., Sultan, M., Prasad, M. K. A Simple, Quick, and Partially Automated Protocol for the Isolation of Single Nuclei from Frozen Mammalian Tissues for Single Nucleus Sequencing. J. Vis. Exp. (197), e65611, doi:10.3791/65611 (2023).