Biology

重新用四个转录因子的小鼠胚胎成纤维细胞诱导多能干细胞的产生，强力霉素诱导慢病毒转导系统

Published: November 13, 2009 doi: 10.3791/1447

Brad Hamilton¹, Qiang Feng¹, Mike Ye¹, G Grant Welstead²

¹Stemgent, ²Whitehead Institute for Biomedical Research, MIT - Massachusetts Institute of Technology

Summary

Stemgent阿霉素诱导小鼠TF慢病毒设置可以重新编程诱导多能干细胞（iPS细胞）的小鼠胚胎成纤维细胞（MEFs）。在这里，我们展示了鼠标重新编程转录因素Oct4的DOX诱导表达的协议，SOX2，KLF4和c - Myc基因产生的iPS殖民地，表达共同的MES多能性标志物。

Abstract

Yamanaka和他的同事使用的转录因子和细胞培养条件的定义设置，表明逆转录病毒介导的传递和表达Oct4的，SOX2，c - Myc基因和Klf4是能够诱导小鼠成纤维细胞^的全能性。1随后的报告已经证实的效用强力霉素（DOX）诱导慢病毒传送系统从各种其他成年鼠的体细胞类型的小学和中学的iPS细胞^的生成。2,3

诱导多能干细胞（iPS）细胞类似胚胎干（ES）细胞形态，增殖和诱导形成畸胎瘤的能力。两种类型的细胞可作为多能干开始产生分化的细胞或组织再生医学材料^。4-6 iPS细胞也有一个明显的优势超过ES细胞，他们表现出ES细胞的关键特性，没有道德的两难破坏胚胎。

在这里，我们展示了重新Stemgent阿霉素诱导小鼠TF慢病毒设置的小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）的协议。我们也证明Stemgent阿霉素诱导小鼠TF慢病毒设置能够表达到MEFs后转四个转录因子，从而诱导多能干细胞状态，显示的ES细胞的特性全能性标志物。

Protocol

Discussion

这些结果表明，Stemgent阿霉素诱导小鼠TF慢病毒设置，可以用来有效地生成的iPS诱导异位表达的殖民地转导的转录因子在小鼠胚胎成纤维细胞。设计重新编程实验时，应考虑几个变量，重新编程，以优化效率。首先，它是可以修改的活跃病毒对靶细胞的比例（即MOI），在原发感染的步骤来增加或减少转染效率，进而影响到综合病毒的靶细胞人口数量。二，调整的时间长短可以影响细胞暴露在DOX的IPS细胞集落生成效率。第三，靶细胞的增殖能力的影响重新编程，作为正在积极生长和分裂的细胞更适合重新编程。最后，修改为不同的手机号码或不同大小的组织培养皿的协议时，建议按比例调整到培养皿的表面区域，目标手机号码。