Summary
Stemgent индуцибельной Dox Мышь TF лентивирус Установить можно перепрограммировать мышиных эмбриональных фибробластов (MEFs) для индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (IPS) клеток. Здесь показано, протокол для DOX-индуцибельной экспрессии мыши перепрограммирования транскрипционных факторов Oct4, Sox2, Klf4 и с-Myc для получения плюрипотентных колоний, которые выражают общие МЧС плюрипотентности маркеров.
Abstract
Использование определенного набора транскрипционных факторов и условий, культуры клеток, Яманака и его коллеги показали, что ретровирус-опосредованного доставки и экспрессии Oct4, Sox2, с-Myc, и Klf4 способен вызывать плюрипотентности в мышиных фибробластов. 1 В последующих докладах показал полезность от доксициклина (DOX) индуцибельной лентивирусов системы доставки для генерации первичных и вторичных плюрипотентных клеток из множества других взрослых мышей типов соматических клеток. 2,3
Индуцированных плюрипотентных стволовых (IPS) клетки похожи на эмбриональные стволовые (ЭС) клеток в морфологии, распространения и способность вызывать образование тератомы. Оба типа ячейки может быть использован в качестве плюрипотентных исходным материалом для поколения дифференцированных клеток или тканей, в регенеративной медицине. 4-6 плюрипотентных клеток, также имеют явное преимущество перед ЭС клетки, как они проявляют основные свойства ЭС клеток без этической дилеммой зародыш разрушения.
Здесь показано, протокол для перепрограммирования мышиных эмбриональных фибробластов (MEF) клетки с индуцибельной Stemgent DOX мыши Установить TF лентивирусов. Мы также показали, что Stemgent индуцибельной DOX Мышь TF лентивирус Установить способен выразить каждому из четырех факторов транскрипции на трансдукции в MEFs тем самым вызывая состояние плюрипотентных стволовых клеток, который отображает характерные маркеры плюрипотентности ЭС клеток.
Protocol
Discussion
Эти результаты показывают, что Stemgent DOX индуцибельной Мышь TF лентивирус Установить может использоваться для эффективной генерации плюрипотентных колонии, вызывая внематочной выражение трансдуцированных факторов транскрипции в мышиных эмбриональных фибробластов. При проектировании перепрограммирования экспериментов, несколько переменных следует рассматривать оптимизировать эффективность перепрограммирования. Во-первых, можно изменить активный вирус к клетке-мишени отношение (т.е. МВД) во время первичной инфекции шаг для увеличения или уменьшения эффективности трансдукции, влияя тем самым ряд комплексных вирусов в популяции клеток-мишеней. Во-вторых, регулируя длину времени клетки подвергаются воздействию DOX может повлиять на эффективность работы ОЭС поколения колонии клеток. В-третьих, способность к пролиферации клеток-мишеней может повлиять перепрограммирования, так как клетки, которые активно растут и деления более поддаются перепрограммированию. И наконец, при изменении протокола для разных номеров клетки или различные блюда ткани размером культуры, рекомендуется, что числа клеток-мишеней быть скорректирована пропорционально площади поверхности культуры блюдо.
Disclosures
Автор, Брэд Гамильтон, работает на Stemgent, который производит реактивы и инструменты, используемые в этой статье.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| DOX Inducible Mouse TF Concentrated Lentifirus Set | Stemgent | 00-0003 |
References
- Takahashi, K., Yamanaka, S. Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors. Cell. 126, 663-676 (2006).
- Aoi, T., Yae, K., Nakagawa, M., Ichisaka, T., Okita, K., Takahashi, K., Chiba, T., Yamanaka, S. Generation of pluripotent stem cells from adult mouse liver and stomach cells. Science. 321, 699-702 (2008).
- Yu, J., Vodyanik, M. A., Smuga-Otto, K., Antosiewicz-Bourget, J., Frane, J. L., Tian, S., Nie, J., Jonsdottir, G. A., Ruotti, V., Stewart, R., Slukvin, I. I., Thomson, J. A. Induced pluripotent stem cell lines derived from human somatic cells. Science. 318, 1917-1920 (2007).
- Murry, C. E., Keller, G. Differentiation of embryonic stem cells to clinically relevant populations: lessons from embryonic development. Cell. 132, 661-680 (2008).
- Lerou, P. H., Daley, G. Q. Therapeutic potential of embryonic stem cells. Blood Rev. 19, 321-331 (2005).
- Wernig, M., Meissner, A., Foreman, R., Brambrink, T., Ku, M., Hochedlinger, K., Bernstein, B. E., Jaenisch, R. In vitro reprogramming of fibroblasts into a pluripotent ES-cell-like state. Nature. 448, 318-324 (2007).
