Summary
Stemgent Dox Đndüklenebilir Fare TF lentivirüs Set bağlı pluripotent kök (IPS) hücreleri fare embriyonik fibroblastlar (MEFS) yeniden programlamak. Burada fare reprogramming transkripsiyon faktörleri Oct4 DOX indüklenebilir ifade için protokol göstermek, Sox2, Klf4 ve c-Myc ifade ortak MES pluripotency belirteçlerinin iPS koloniler oluşturmak için.
Abstract
Yamanaka ve arkadaşları, transkripsiyon faktörleri ve hücre kültürü koşulları belirlenmiş kullanarak, retrovirüs aracılı teslim ve ifade Oct4, Sox2, c-Myc ve Klf4 fare fibroblastlarında pluripotency inducing yeteneğine sahip olduğunu göstermiştir. Yardımcı programı 1 Daha sonraki raporlar göstermiştir doksisiklin (DOX) diğer yetişkin fare somatik hücre tipleri çok çeşitli birincil ve ikincil iPS hücreleri üretimi için lentiviral dağıtım sistemi uyarılabilir. 2,3
İndüklenmiş pluripotent kök (iPS) hücreleri embriyonik kök morfolojisi, proliferasyon ve teratom oluşumu ikna yeteneği (ES) hücreleri benzer. Her iki tip hücre, farklılaşmış hücrelerin rejeneratif tıp ya da doku üretimi için pluripotent başlangıç materyali olarak kullanılabilir etik ikilem olmadan ES hücrelerinin temel özellikleri sergilerler 4-6 iPS hücreleri ES hücreleri üzerinde de ayrı bir avantajı var . embriyo imha.
Burada Stemgent DOX Đndüklenebilir Fare TF lentivirüs Set fare embriyonik fibroblast hücreleri yeniden programlama (MEF) için protokol göstermektedir. Ayrıca Stemgent DOX Đndüklenebilir Fare TF lentivirüs ayarlayın, böylece, ES hücrelerinin karakteristik pluripotency işaretleri gösteren bir pluripotent kök hücre devlet inducing MEFS her transdüksiyon üzerine dört transkripsiyon faktörleri ifade yeteneğine sahip olduğunu göstermektedir.
Protocol
Discussion
Bu sonuçlar, fare embriyonik fibroblastlar transkripsiyon faktörleri transduced Stemgent DOX Đndüklenebilir Fare TF lentivirüs Set verimli ektopik ifade uyararak iPS koloniler oluşturmak için kullanılabilir olduğunu göstermektedir. Reprogramming deneyler tasarlarken, çok değişkenli reprogramming verimliliği optimize etmek için düşünülmelidir. İlk olarak, entegre virüs sayısı böylece hedef hücre popülasyonu etkileyen transdüksiyon etkinliğini artırmak veya azaltmak için birincil enfeksiyon adımı sırasında aktif virüs hedef hücre oranı (yani İçişleri Bakanlığı) değiştirmek mümkün. İkincisi, hücrelerin DOX maruz kalan süresini ayarlayarak iPS hücre koloni nesil verimliliği etkileyebilir. Üçüncü olarak, aktif olarak büyüyen ve bölme hücrelere yeniden programlama için daha uygun olduğu gibi hedef hücrelerin proliferatif kapasitesi, yeniden programlama etkileyebilir. Son olarak, farklı hücre sayıları ya da farklı bir boyut doku kültürü yemekleri için protokol değiştirirken, hedef hücre numaraları kültür çanak yüzey alanı ile orantılı ayarlanabilir olması tavsiye edilir.
Disclosures
Yazar, Brad Hamilton, bu yazıda kullanılan reaktifler ve aletleri üreten Stemgent tarafından istihdam edilmektedir.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| DOX Inducible Mouse TF Concentrated Lentifirus Set | Stemgent | 00-0003 |
References
- Takahashi, K., Yamanaka, S. Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors. Cell. 126, 663-676 (2006).
- Aoi, T., Yae, K., Nakagawa, M., Ichisaka, T., Okita, K., Takahashi, K., Chiba, T., Yamanaka, S. Generation of pluripotent stem cells from adult mouse liver and stomach cells. Science. 321, 699-702 (2008).
- Yu, J., Vodyanik, M. A., Smuga-Otto, K., Antosiewicz-Bourget, J., Frane, J. L., Tian, S., Nie, J., Jonsdottir, G. A., Ruotti, V., Stewart, R., Slukvin, I. I., Thomson, J. A. Induced pluripotent stem cell lines derived from human somatic cells. Science. 318, 1917-1920 (2007).
- Murry, C. E., Keller, G. Differentiation of embryonic stem cells to clinically relevant populations: lessons from embryonic development. Cell. 132, 661-680 (2008).
- Lerou, P. H., Daley, G. Q. Therapeutic potential of embryonic stem cells. Blood Rev. 19, 321-331 (2005).
- Wernig, M., Meissner, A., Foreman, R., Brambrink, T., Ku, M., Hochedlinger, K., Bernstein, B. E., Jaenisch, R. In vitro reprogramming of fibroblasts into a pluripotent ES-cell-like state. Nature. 448, 318-324 (2007).
