Larve Locomotion Assay: High-Throughput Metode til undersøgelse Neurobehavioral Toksicitet af en forbindelse i Zebrafish Larver

Overview

Denne artikel beskriver zebrafisk adfærdsmæssige reaktion på giftige forbindelser ved at overvåge larve bevægelse. Protokollen ser yderligere på et eksempel på zebrafisk larvers reaktion på miljøforurenende stoffer.

Protocol

1. Forberedelse til adfærdstesten

1. 800 μL eksponeringsopløsning overføres til hver brønd af 48 brøndmikropladen.
   BEMÆRK: Brug 16 brønde til hver gruppe (dvs. kontrolopløsningen, 5 μg/L og 50 μg/L-gruppen).
2. Brug en 1 ml pipettespids til at overføre 200 μL eksponeringsopløsning med en larve fra glasset Petri parabol til en brønd af de 48 brønd mikroplade.
3. 4 ml eksponeringsopløsning overføres til hver brønd af 6-mikropladen.
   BEMÆRK: Brug en 6 godt mikroplade til hver gruppe.
4. Brug en 1 ml pipettespids til at overføre 200 μL eksponeringsopløsning med to larver til hver brønd af 6-brøndsmikropladen.
   BEMÆRK: Hver gruppe har seks gentagne grupper.
5. Kontroller, at prøvelokalets temperatur er 28 °C 2 timer før prøven.
   BEMÆRK: Adfærdstest udføres normalt om eftermiddagen.

2. Bevægelses- og stivinkeltest

1. Gem protokollen, og skru ned for prøvelokalets lys.
2. Akklimatisere larverne i systemet i 10 minutter og klikke på knappen "Eksperiment" "Udfør" igen, vælg derefter den mappe, hvor eksperimentfilerne gemmes, og indtast resultatnavnet.
3. Klik på knappen "Baggrund" "Start" igen for at starte testen.
4. Klik på knappen "Eksperiment" "Stop" igen for at stoppe eksperimentet, når testen slutter.
   BEMÆRK: Systemet viser de testede data, når systemet stopper. Dataene omfatter den sporede afstand ved tre hastighedsklasser og kurvevinkelnumre ved otte vinkelklasser i hvert minut. For bevægelsestesten i det præsenterede eksempel beregnes den samlede afstand i hver lysperiode (10 min), og forskellen mellem kontrolgruppen og behandlingsgrupperne sammenlignes.
5. Overfør 48-brøndmikropladen tilbage til lysinkubatoren til andre eksperimenter.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
48-well-microplate	Corning	3548	Embyros housing
6-well-microplate	Corning	3471	Embyros housing
Zebrabox	Viewpoint	ZebraBox	Behavior instrument
ZebraLab	Viewpoint	ZebraLab	Behavior software
Pipette	Eppendorf	3120000267	Transfer solution