라발 운동 분석: 제브라피시 애벌레에 있는 화합물의 신경 행동 독성을 연구하는 고처리량 방법

Overview

이 문서에서는 애벌레 운동을 모니터링하여 독성 화합물에 대한 제브라피시의 행동 반응을 설명합니다. 이 프로토콜은 환경 오염 물질에 대한 제브라피시 애벌레의 반응의 예를 더 살펴봅니다.

Protocol

1. 동작 테스트 준비

1. 48개의 웰 마이크로플레이트의 모든 웰에 800 μL의 노출 용액을 전달합니다.
   참고: 모든 그룹에 대해 16개의 우물(예: 제어 용액, 5 μg/L 및 50 μg/L 그룹)을 사용합니다.
2. 1mL 파이펫 팁을 사용하여 유리 페트리 접시에서 애벌레 1개로 200 μL의 노출 용액을 48개의 웰 마이크로플레이트 중 하나의 우물로 옮길 수 있습니다.
3. 4mL의 노출 용액을 6개의 웰 마이크로플레이트의 모든 웰에 옮기.
   참고: 모든 그룹에 대해 6개의 웰 마이크로 플레이트를 사용합니다.
4. 1mL 파이펫 팁을 사용하여 2개의 애벌레가 있는 노출 용액200 μL을 6개의 웰 마이크로플레이트의 각 웰에 전달합니다.
   참고: 모든 그룹에는 6개의 반복 그룹이 있습니다.
5. 시험실의 온도가 시험 전에 28°C 2h인지 확인하십시오.
   참고: 행동 테스트는 일반적으로 오후에 수행됩니다.

2. 운동 및 경로 각도 테스트

1. 프로토콜을 저장하고 시험장의 빛을 끕니다.
2. 시스템의 애벌레를 10분 동안 적응시키고"실험"실행"버튼을 차례로 클릭한 다음 실험 파일이 저장되는 폴더를 선택하고 결과 이름을 입력합니다.
3. "배경""시작"버튼을 차례로 클릭하여 테스트를 시작합니다.
4. "실험""중지"버튼을 차례로 클릭하여 테스트가 끝나면 실험을 중지합니다.
   참고: 시스템은 시스템이 중지될 때 테스트된 데이터를 표시합니다. 데이터에는 세 가지 속도 클래스의 추적 거리와 매 분마다 8개의 각도 클래스의 경로 각도 번호가 포함됩니다. 제시된 예에서 의 한 운동 시험의 경우, 모든 광 기간(10분)에서의 총 거리가 계산되고 대조군과 처리군 간의 차이가 비교된다.
5. 다른 실험을 위해 48 개의 잘 마이크로 플레이트를 빛 인큐베이터로 다시 옮기.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
48-well-microplate	Corning	3548	Embyros housing
6-well-microplate	Corning	3471	Embyros housing
Zebrabox	Viewpoint	ZebraBox	Behavior instrument
ZebraLab	Viewpoint	ZebraLab	Behavior software
Pipette	Eppendorf	3120000267	Transfer solution