Saggio di locomozione larvale: metodo ad alto contenuto di produttività per studiare la tossicità neurocomportamentale di un composto nelle larve di zebrafish

Overview

Questo articolo descrive la risposta comportamentale del pesce zebra ai composti tossici monitorando la locomozione larvale. Il protocollo esamina inoltre un esempio della risposta delle larve di zebrafish all'inquinante ambientale.

Protocol

1. Preparazione per il test di comportamento

1. Trasferire 800 μL di soluzione di esposizione in ogni pozzo della micropiatta 48 pozzi.
   NOTA: Utilizzare 16 pozzi per ogni gruppo (cioè la soluzione di controllo, 5 μg/L e 50 μg/L gruppo).
2. Utilizzare una punta di pipetta da 1 mL per trasferire 200 μL di soluzione di esposizione con una larva dalla piastra di Petri di vetro in un pozzo della micropiatta da 48 porri.
3. Trasferire 4 mL di soluzione di esposizione in ogni pozzo della micropiatta a 6 pozza.
   NOTA: Utilizzare una micropiatta da 6 pozzi per ogni gruppo.
4. Utilizzare una punta di pipetta da 1 mL per trasferire 200 μL di soluzione di esposizione con due larve in ogni pozzo della micropiatta da 6 porri.
   NOTA: Ogni gruppo ha sei gruppi ripetuti.
5. Assicurarsi che la temperatura della sala prove sia di 28 °C 2 ore prima della prova.
   NOTA: I test comportamentali vengono solitamente eseguiti nel pomeriggio.

2. Locomozione e prova dell'angolo del percorso

1. Salvare il protocollo e abbassare la luce della sala prove.
2. Acclimate le larve nel sistema per 10 minuti e fate clic sul pulsante "Esperimento" "Esegui" a turno, quindi scegliete la cartella in cui vengono salvati i file dell'esperimento e immettete il nome del risultato.
3. Fare clic sul pulsante "Background" "Start" a turno per iniziare il test.
4. Fare clic sul pulsante "Esperimento" "Stop" a sua volta per interrompere l'esperimento al termine del test.
   NOTA: Il sistema mostra i dati testati all' arresti del sistema. I dati includono la distanza tracciata a tre classi di velocità e i numeri di angolo del percorso a otto classi angolari di ogni minuto. Per il test di locomozione nell'esempio presentato, viene calcolata la distanza totale in ogni periodo di luce (10 min) e la differenza tra il gruppo di controllo e i gruppi di trattamento confrontati.
5. Trasferire la micropiatta da 48 pozzi all'incubatore di luce per altri esperimenti.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
48-well-microplate	Corning	3548	Embyros housing
6-well-microplate	Corning	3471	Embyros housing
Zebrabox	Viewpoint	ZebraBox	Behavior instrument
ZebraLab	Viewpoint	ZebraLab	Behavior software
Pipette	Eppendorf	3120000267	Transfer solution