Larval Locomotion Assay: Метод высокой пропускной способности для изучения нейробехавиоальной токсичности соединения в личинках зебры

Overview

В этой статье описывается поведенческая реакция зебры на токсичные соединения путем мониторинга личинок передвижения. В протоколе также рассматривается пример реакции личинок зебры на загрязнитель окружающей среды.

Protocol

1. Подготовка к тесту поведения

1. Перенесите 800 МКЛ раствора экспозиции в каждую колодец микроплюона из 48 хорошо.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Используйте 16 скважин для каждой группы (т.е. контрольное решение, 5 мкг/л и 50 мкг/л группы).
2. Используйте наконечник пипетки 1 мл для передачи 200 МКЛ раствора экспозиции с одной личинкой из стеклянной чашки Петри в один колодец из 48 микроплюсов.
3. Перенесите 4 мл раствора экспозиции в каждую колодец микроплюона из 6 хорошо.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Используйте одну микроплюжь 6 хорошо для каждой группы.
4. Используйте наконечник пипетки 1 мл для передачи 200 МКЛ раствора экспозиции с двумя личинками в каждую колодец из 6 хорошо микроплю.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Каждая группа состоит из шести повторяющихся групп.
5. Убедитесь, что температура в испытательном зале составляет 28 градусов по Цельсию за 2 часа до начала теста.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Поведенческие тесты обычно проводятся во второй половине дня.

2. Локомотив и тест угла пути

1. Сохраните протокол и выключите свет испытательного зала.
2. Акклиматизируют личинки в системе в течение 10 минутинажмите кнопку «Эксперимент»Выполнить», а затем выберите папку, где сохраняются файлы эксперимента, и введите имя результата.
3. Нажмитекнопку«Начало»в свою очередь, чтобы начать тест.
4. Нажмитекнопку«Эксперимент» Остановитьв свою очередь, чтобы остановить эксперимент, когда тест заканчивается.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Система показывает данные, проверенные при остановке системы. Данные включают отслеживаемое расстояние в трех классах скорости и номера угла пути под восемью угловых классами каждую минуту. Для теста на передвижение в представленном примере рассчитывается общее расстояние в каждом световом периоде (10 мин) и сравнивается разница между контрольной группой и группами лечения.
5. Перенесите микроплюжь 48 хорошо обратно в световой инкубатор для других экспериментов.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
48-well-microplate	Corning	3548	Embyros housing
6-well-microplate	Corning	3471	Embyros housing
Zebrabox	Viewpoint	ZebraBox	Behavior instrument
ZebraLab	Viewpoint	ZebraLab	Behavior software
Pipette	Eppendorf	3120000267	Transfer solution