זחל תנועה Assay: שיטת תפוקה גבוהה ללמוד רעילות Neurobehavioral של תרכובת בזחלים זברה

מאמר זה מתאר את התגובה ההתנהגותית של זברה-פיש לתרכובות רעילות על ידי ניטור תנועה זחל. הפרוטוקול בוחן גם דוגמה לתגובת זחלי הזברה למזהמים סביבתיים.

1. הכנה למבחן ההתנהגות

העבר 800 μL של פתרון חשיפה לכל באר של 48 גם microplate.
שים לב: השתמש 16 בארות עבור כל קבוצה (כלומר, פתרון הבקרה, 5 מיקרוגרם / L, ו 50 μg / L הקבוצה).
השתמש טיפ פיפטה 1 מ"ל להעביר 200 μL של פתרון חשיפה עם זחל אחד מצלחת פטרי זכוכית לתוך באר אחת של 48 גם microplate.
העבר 4 מ"ל של פתרון חשיפה לכל באר של 6 גם microplate.
שים לב: השתמש אחד 6 גם microplate עבור כל קבוצה.
השתמש טיפ פיפטה 1 מ"ל להעביר 200 μL של פתרון חשיפה עם שני זחלים לתוך כל באר של 6 גם microplate.
שים לב: לכל קבוצה יש שש קבוצות חוזרות.
ודא את הטמפרטורה של חדר הבדיקה הוא 28 °C (60 °F 2 שעות) לפני הבדיקה.
שים לב: בדיקות התנהגותיות מבוצעות בדרך כלל אחר הצהריים.

2. מבחן תנועה וזווית נתיב

שמור את הפרוטוקול וכבה את האור של חדר הבדיקה.
התאקלמו בזחלים במערכת במשך 10 דקות ולחצו על הלחצן "Experiment" "Execute" בתורו, ולאחר מכן בחרו את התיקיה שבה נשמרים קבצי הניסוי והזינו את שם התוצאה.
לחץ על לחצן "רקע" "" התחל" בתורו כדי להתחיל את הבדיקה.
לחץ על לחצן "ניסוי" "" עצור" בתורו כדי להפסיק את הניסוי כאשר הבדיקה מסתיימת.
שים לב: המערכת מציגה את הנתונים שנבדקו כאשר המערכת נעצרת. הנתונים כוללים את המרחק במעקב בשלוש מחלקות מהירות ומספרי זווית נתיב בשמונה מחלקות זווית בכל דקה. עבור מבחן התנועה בדוגמה המוצגת, מחושב המרחק הכולל בכל תקופת אור (10 דקות) וההבדל בין קבוצת הביקורת לקבוצות הטיפול בהשוואה.
להעביר את 48 היטב microplate בחזרה לאינקובטור האור לניסויים אחרים.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.