幼虫ロコモーションアッセイ:ゼブラフィッシュ・ラーヴェにおける化合物の神経行動毒性を研究するハイスループット法

Overview

この記事では、幼虫の移動を監視することによって有毒化合物に対するゼブラフィッシュの行動応答について説明します。このプロトコルは、環境汚染物質に対するゼブラフィッシュの幼虫の反応の例をさらに調べます。

Protocol

1. 行動テストの準備

1. 48ウェルマイクロプレートのウェルに800 μLの露出液を移します。
   注: 各グループ(制御溶液、5 μg/L、50 μg/Lグループ)に16個のウェルを使用します。
2. 1 mL ピペットチップを使用して、ガラスペトリ皿から 1 本の幼虫で 200 μL の露出液を 48 ウェルマイクロプレートの 1 つのウェルに転送します。
3. 6ウェルマイクロプレートのすべてのウェルに4 mLの露出溶液を移します。
   注: すべてのグループに1つの6ウェルマイクロプレートを使用してください。
4. 1 mL ピペットチップを使用して、2 つの幼虫を含む 200 μL の露出液を 6 ウェルマイクロプレートの各ウェルに移します。
   注: すべてのグループには6つの繰り返しグループがあります。
5. 試験室の温度は試験前に28°C2時間であることを確認してください。
   注: 行動テストは通常午後に行われます。

2. 運動とパス角試験

1. プロトコルを保存し、テストルームのライトを下げる。
2. システム内の幼虫を10分間順応させ、「実験」「実行」ボタンを順にクリックし、実験ファイルが保存されているフォルダを選択して結果名を入力します。
3. [バックグラウンド]ボタンをクリックし、テストを開始します。
4. テストが終了したときに実験を停止するには、[実験の中止] ボタンをクリックします。
   注: システムが停止したときにテストされたデータが表示されます。データには、3 つの速度クラスでの追跡距離と、毎分の 8 つの角度クラスのパス角度番号が含まれます。提示された例の移動性試験では、すべての光周期(10分)における全距離と対照群と治療群の差を比較した。
5. 48ウェルマイクロプレートを光インキュベーターに戻し、他の実験を行います。

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
48-well-microplate	Corning	3548	Embyros housing
6-well-microplate	Corning	3471	Embyros housing
Zebrabox	Viewpoint	ZebraBox	Behavior instrument
ZebraLab	Viewpoint	ZebraLab	Behavior software
Pipette	Eppendorf	3120000267	Transfer solution