Test de locomotion larvaire : Méthode à haut débit pour étudier la toxicité neurocomportementale d’un composé chez les larves de poisson zèbre

Overview

Cet article décrit la réponse comportementale du poisson zèbre aux composés toxiques en surveillant la locomotion larvaire. Le protocole examine en outre un exemple de la réponse des larves de poisson zèbre aux polluants environnementaux.

Protocol

1. Préparation pour le test de comportement

1. Transférez 800 μL de solution d’exposition dans chaque puits de la microplaque de puits 48.
   REMARQUE: Utilisez 16 puits pour chaque groupe (c.-à-d. la solution de contrôle, 5 μg/L et 50 μg/L).
2. Utilisez une pointe de pipette de 1 mL pour transférer 200 μL de solution d’exposition avec une larve de la boîte de Pétri en verre dans un puits de la microplaque de puits 48.
3. Transférer 4 mL de solution d’exposition dans chaque puits de la microplaque de 6 puits.
   REMARQUE: Utilisez une microplaque de 6 puits pour chaque groupe.
4. Utilisez une pointe pipette de 1 mL pour transférer 200 μL de solution d’exposition avec deux larves dans chaque puits de la microplaque de 6 puits.
   REMARQUE: Chaque groupe compte six groupes qui se répètent.
5. Assurez-vous que la température de la salle d’essai est de 28 °C 2 h avant l’essai.
   REMARQUE: Les tests comportementaux sont généralement effectués dans l’après-midi.

2. Test de locomotion et d’angle de trajectoire

1. Enregistrez le protocole et baissez la lumière de la salle d’essai.
2. Acclimatez les larves du système pendant 10 minet cliquez tour à tour sur le bouton "Expérience" Exécuter « , puis choisissez le dossier où les fichiers d’expérience sont enregistrés et entrez le nom du résultat.
3. Cliquez sur lebouton " Fond" "Démarrer" à son tour pour commencer le test.
4. Cliquez sur le bouton" Expérience"Stop" à son tour pour arrêter l’expérience lorsque le test se termine.
   REMARQUE: Le système affiche les données testées lorsque le système s’arrête. Les données incluent la distance suivie à trois classes de vitesse et les numéros d’angle de trajectoire à huit classes d’angle de chaque minute. Pour le test de locomotion dans l’exemple présenté, la distance totale dans chaque période de lumière (10 min) est calculée et la différence entre le groupe témoin et les groupes de traitement comparés.
5. Transférez la microplaque du puits 48 à l’incubateur de lumière pour d’autres expériences.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
48-well-microplate	Corning	3548	Embyros housing
6-well-microplate	Corning	3471	Embyros housing
Zebrabox	Viewpoint	ZebraBox	Behavior instrument
ZebraLab	Viewpoint	ZebraLab	Behavior software
Pipette	Eppendorf	3120000267	Transfer solution