Introduction
superfícies nanoestruturados têm atraído recentemente a atenção substancial devido às suas várias aplicações potenciais, incluindo padronização, cultura de células, limpeza, e comutação de superfície. Por exemplo, as superfícies hidrofóbicas inspirados na nanoestrutura da folha de lótus e outras superfícies sensíveis são capazes de reagir a estímulos externos 1-4.
O filme de Langmuir é um dos revestimentos de polímero mais amplamente estudados. Um filme de Langmuir é formada por moléculas anfifílicas deixando cair sobre uma interface ar-água 08/05. A película pode então ser transferida para uma superfície sólida por adsorção física ou química, e a conformação molecular sobre uma superfície sólida pode ser controlada usando métodos de transferência verticais e horizontais 9-12. A densidade do filme de Langmuir podem ser regulados com precisão por compressão da interface ar-água. Recentemente, este método também tem se mostrado eficaz para a fabricação nanométricos structur-ilha do marES, utilizando copolímeros de bloco anfifílicos. As nanoestruturas são considerados para consistir de um núcleo de segmentos hidrófobos e uma concha de segmentos hidrofílicos 13-17. Além disso, o número de nanoestruturas sobre uma superfície é regulada, controlando a área por molécula de (A m) do copolímero de bloco na interface.
Nós nos concentramos em um original, abordagem de engenharia de tecido sem andaime única, engenharia camada de células, usando uma superfície de cultura termicamente reativo. A tecnologia desenvolvida foi aplicada a terapias de regeneração para vários órgãos 18. Uma superfície de cultura de temperatura-sensível foi fabricado por enxerto de poli (N -isopropylacrylamide) (PIPAAm), uma molécula de temperatura-sensível, para uma superfície de 19-27. PIPAAm e seus copolímeros exibem uma temperatura crítica inferior de solução (TCIS), em meio aquoso, a temperaturas próximas de 32 ° C. A superfície da cultura também exibiu uma temperatura alternati-responsivo em entre hidrofobicidade e hidrofilicidade. A 37 ° C, a superfície tornou-se PIPAAm-enxertado hidrofóbico, e as células proliferaram rapidamente ligados e sobre a superfície, bem como sobre poliestireno de cultura de tecidos convencional. Quando a temperatura foi baixada para 20 ° C, a superfície tornou-se hidrófila, e células espontaneamente isolada a partir da superfície. Portanto, células confluentes cultivadas na superfície poderia ser colhida como uma folha intacta, alterando a temperatura. Estas propriedades de adesão celular e descolamento também foram exibidos por uma superfície fabricada por revestimento de película Langmuir para o laboratório de demonstração 26, 27. Um filme de Langmuir de copolímeros em bloco composto por poliestireno (P (St)) e PIPAAm (St-IPAAM) foi fabricada. O filme de Langmuir com uma específica Um m poderia ser horizontalmente transferidos para um substrato de vidro hidrofobicamente modificado. Além disso, foram avaliadas a adesão celular ligado e desprendimento da superfície preparada em resposta à temperatura.
_content "> Aqui, nós descrevemos protocolos para a fabricação de uma película de Langmuir nanoestruturada composto de copolímeros em bloco anfifílicos termo-sensível sobre um substrato de vidro. O método pode fornecer uma técnica de fabricação eficaz para nanofilmes orgânicos em vários campos da ciência superfície e podem facilitar mais controlo eficaz da adesão celular e descolamento em espontânea a partir de uma superfície.Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Síntese de poli bloco Polystyrene- (N -isopropylacrylamide) por duas etapas reversível adição-fragmentação cadeia de transferência (RAFT) polimerização por radicais
- Dissolve-se estireno (153,6 mmol), 4-ciano-4- (ethylsulfanylthiocarbonyl) ácido sulfanylpentanoic (ECT; 0,2 mmol), e 4,4'-azobis (ácido 4-cianovalérico) (ACVA; 0,04 mmol) em 40 ml de 1, 4-dioxano. Congelar a solução em azoto líquido sob vácuo durante 15-20 min para remover as espécies reactivas e gradualmente descongelar à temperatura ambiente. Certifique-se de que a solução é completamente descongelado e repetir este freeze-bomba de degelo ciclo de desgaseificação três vezes.
- Obter o poliestireno (PSt) (PM: 13.500) como um agente RAFT macro de polimerização a 70 ° C durante 15 h num banho de óleo.
- Precipitado PSt agente macro balsa com 800 ml de éter e seco em vácuo.
- Dissolver IPAAM monómero (4,32 mmol), PSt agente RAFT macro (0,022 mmol), e ACVA (0,004 mmol) em 4 ml de 1,4-dioxano.
- Removero oxigénio na solução pelos ciclos de desgaseificação congelamento-descongelamento-bomba tal como mencionado no passo 1.1.
- Executar uma polimerização a 70 ° C durante 15 h num banho de óleo depois de desgaseificação. Obter molécula sintetizada St-IPAAM (PM: 32.800), da mesma maneira como o agente de macro RAFT PST.
2. Preparação de substratos de vidro silanada hidrofóbica Modificados
- Lavar substratos de vidro (24 mm x 50 mm) com um excesso de acetona e etanol e sonicado durante 5 min para remover os contaminantes da superfície.
- Secam-se os substratos num forno a 65 ° C durante 30 min. Em seguida, usar plasma de oxigénio (400 W, 3 minutos) para activar as superfícies dos substratos à TA.
- Mergulhar os substratos em tolueno contendo 1% hexyltrimethoxysilane durante a noite a RT para silanizar o substrato.
- Lavar os substratos silanizadas em tolueno e mergulhe em acetona durante 30 min para remover os agentes que não reagiram.
- substratos recozimento durante 2 horas a 110 ° C para imobilizar completamente o Sseu rosto.
- Corte os substratos silanizadas por um cortador de vidro de 25 mm x 24 mm para caber os pratos de cultura de células (tamanho prato: φ35 mm).
3. Preparação de Langmuir Films ea superfície transferida-Film
- Colocar o aparelho de Langmuir película num gabinete para evitar a acumulação de poeiras.
- Lava-se a calha de Langmuir (tamanho: 580 milímetros x 145 mm) e as barreiras com água destilada e etanol, para remover contaminantes.
- Seque o cocho e barreiras, limpando com uma toalha sem fiapos. Em seguida, preencher a calha com aproximadamente 110 ml de água destilada, e ajustar as barreiras de ambos os lados da calha. Note-se que a água destilada devem ser adicionados sem que se prolonga nos seguintes passos 3,5-3,13.
- Aquece-se uma placa de Wilhelmy platina (perímetro: 39,24 milímetros) para a monitorização da tensão de superfície com um queimador de gás até que a placa torna-se vermelha e, em seguida, lava-se com água destilada para remover os contaminantes. Suspender a placa de Wilhelmy em um fio ligado ao instrumento da superfície à pressão medida.
- Zerar o instrumento-surface-medição de pressão de acordo com o protocolo do fabricante. Comprimir a interface ar-água na calha por as barreiras em ambos os lados da calha até que a interface atinge cerca de 50 cm 2, sem quaisquer gotas de polímero.
- Aspirar pequenos contaminantes até que a pressão de superfície é cerca de 0 mN / m.
- Reposicionar as barreiras de ambos os lados, e adicionar água destilada para compensar a diminuição de água destilada a partir do passo 3.6.
- Dissolve-se 5 mg de a molécula de St-IPAAM sintetizado em 5 ml de uma solução de desenvolvimento de clorofórmio.
Nota: diclorometano ou tolueno, também podem ser usados como o solvente. - Gentilmente queda de 27 ul de St-IPAAM dissolvidos em clorofórmio para a calha utilizando uma micro ou micropipeta.
- Após uma espera de 5 minutos para permitir a evaporação completa de clorofórmio, mover as duas barreiras horizontalmente para comprimir o molecu St-IPAAMle na interface. Manter a taxa de compressão das barreiras a 0,5 mm / seg, até a área de alvo de 50 cm 2 é alcançado.
Nota: A taxa de compressão rápida provoca defeitos no filme de Langmuir. - Medir a pressão de superfície (π) -A m isotérmicas com a platina placa de Wilhelmy anexada ao instrumento-surface-medição de pressão durante a compressão de acordo com o protocolo do fabricante.
- Depois de atingir o tamanho da área de alvo, manter a superfície durante 5 min para permitir que as moléculas de St-IPAAM para relaxar; as moléculas não atingem o equilíbrio imediatamente após a compressão.
- Transferir o filme de Langmuir para um substrato de vidro hidrofobicamente modificado usando um aparelho de transferência durante 5 minutos para adsorver robustamente o filme. Fixar o substrato de vidro hidrofóbicas em paralelo no dispositivo. Conecte o dispositivo a uma fase de alinhamento e mover-se perpendicularmente.
- Levantar o substrato horizontalmente com o aparelho de transferência e seco durante 1 dia num desiccator.
4. a cultura de células e Otimização de adesão celular e destacamento na superfície Transferido Langmuir Film
- Para preparar as suspensões de células, células endoteliais de cultura bovina da artéria carótida (BAECs) a um terço confluência a 37 ° C em 5% de CO 2 e 95% de ar em polistireno para cultura de tecidos (TCPS), com Dulbecco Modified Eagle Médium (DMEM) contendo 10% de fetal de soro de bovino (FBS) e 100 U / ml de penicilina.
- Após confluência é atingido, tratar BAECs com 3 ml de 0,25% de tripsina-EDTA durante 3 min a 37 ° C em 5% de CO 2 e 95% de ar.
- Desactivar a tripsina-EDTA, adicionando 10 ml de DMEM contendo FBS a 10%, e recolher a suspensão de células para um tubo de 50 ml.
- Centrifugar a 120 xg durante 5 min, e o sobrenadante aspirado. Re-suspender as células com 10 ml de DMEM.
- Coloque as superfícies St-IPAAM sob luz ultravioleta sobre uma bancada limpa para esterilizar por 5 min.
- Semear o ce recuperadolls sobre o St-IPAAM superfícies a uma concentração de 1,0 x 10 4 células / cm2 contados por um hemocitómetro descartável e observar as células sobre as superfícies de um microscópio equipado com uma incubadora a 37 ° C com 5% de CO 2 e 95% ar.
Nota: Esterilizar as superfícies St-IPAAM por luz ultravioleta equipado para uma bancada limpa. - Gravação de imagens de lapso de tempo de BAECs aderentes para cerca de 24,5 horas a 37 ° C por um microscópio de contraste de fase com aumento de 10x. Após BAEC adesão, ficha descolamento das BAECs da superfície de St-IPAAM a 20 ° C durante cerca de 3,5 h.
Fabricação de chapas 5. celular nas superfícies Langmuir Film-transferidos
- BAECs cultura utilizados da mesma maneira descrita na Secção 4.
- Semente um total de 1,0 x 10 5 células / cm2 em superfícies St-IPAAM e incubar durante 3 dias a 37 ° C em 5% de CO 2. Confluente BAECs espontaneamente isolada a 20 ° C.
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Representative Results
Os copolímeros em bloco compostos por poliestireno e poli (-isopropylacrylamide N) (St-IPAAms) com pesos moleculares específicos foram sintetizados por polimerização de radicais TRAF. ECT foi preparado como um agente de transferência de cadeia como descrito no Moad et ai. 28. Duas moléculas de St-IPAAM de diferentes comprimentos de cadeia PIPAAm foram sintetizados, e os polímeros em bloco obtidos foram caracterizados por 1H ressonância magnética nuclear (RMN) e cromatografia de permeação em gel (GPC). Os pesos moleculares de St-IPAAms eram 32800 e 67900, com uma distribuição de peso molecular estreita (1,31 e 1,50). As conversões de monômero de poliestireno agente RAFT macro e PIPAAm foram encontrados para ser 17,4% e mais de 85,0%. O sintetizado St-IPAAms foram nomeados St-IPAAm170 e St-IPAAm480, respectivamente.
Filmes de Langmuir com várias áreas por molécula (A m) foram fabricados numainterface ar-água, largando moléculas St-IPAAM dissolvidos em solução de clorofórmio (Figura 1A). Depois de cair moléculas St-IPAAM, a pressão da superfície da interface ar-água foi fixada em 0 mN / m, e aumentou continuamente através do fecho da interface durante a compressão com as barreiras (Figura 1B). Quaisquer defeitos de filmes de Langmuir formados em uma interface ar-água pode ser inferida a partir do π-A m isotérmica. O filme St-IPAAM Langmuir preparada foi transferido para um substrato de vidro modificada hidrofobicamente (superfície St-IPAAM) (Figura 1C). A superfície transferiu-filme foi avaliada por microscopia de força atômica (AFM). A Figura 2 mostra AFM imagens topográficas (1 x 1 um) das superfícies St-IPAAm170 e St-IPAAm480. Nanoestruturas foram observadas nas superfícies St-IPAAM, enquanto tais estruturas foram apenas raramente observada no substrato hidrofóbico nua. O tamanho ea forma das nanoestruturas foram fortemente dependent em m e a composição do St-IPAAM. AFM imagens topográficas confirmou que os filmes de Langmuir poderia ser homogeneamente transferida sobre o substrato de vidro modificado hidrofóbico e que as morfologias das superfícies pode ser controlada pela composição molecular e um m.
A estabilidade da película St-IPAAM Langmuir foi avaliada por uma reflexão total atenuada transformada de Fourier espectroscópio de infravermelhos (ATR / FT-IR). A quantidade de PIPAAms sobre o substrato de vidro hidrofóbico pode ser estimado através de uma linha de calibração obtida a partir da intensidade de pico proporção de 1.000 cm-1 derivado do vidro (Si-O) e 1650 cm-1 derivadas de PIPAAm (C = O). A curva de calibração foi calculada a partir de uma série de quantidades conhecidas de PIPAAm fundido sobre o vidro hidrofóbico. As quantidades de PIPAAm de St-IPAAm170 (10 nm 2 / molécula) e St-IPAAm480 (40 nm 2 / molécula) sobre o substrato foram encontrados para ser 0,87 mg/ cm2 e 0,63 g / cm2, respectivamente. A quantidade de PIPAAm na superfície após a lavagem com água destilada, foi quase o mesmo que aqueles nas superfícies sem lavagem. Estes resultados indicaram que as superfícies St-IPAAM fabricadas eram estáveis em condições de água.
A seguir, examinou a adesão e desprendimento de células endoteliais da artéria carótida bovina (BAECs) nas superfícies St-IPAAM. Lapso de tempo fotografia de BAECs aderentes e destacando na superfície do St-IPAAm480 a 40 nm 2 / molécula é mostrado no Animated Figura 1. Aderente BAECs a 37 ° C foram rapidamente individual de ambos St-IPAAm170 e St-IPAAm480 depois diminuindo a temperatura a 20 ° C. O número de células aderentes em St-IPAAm170 e St-IPAAm480 a 37 ° C foi de 0,6 x 10 4 células / cm 2 e 0,9 x 10 4 células / cm2, respectivamente, indicando que o número de células aderentess foi modulado por a composição da superfície de St-IPAAM. folhas de células também pode ser recuperado por separar BAECs confluentes cultivadas a partir destas superfícies St-IPAAM. A camada de células recuperado foi visualizada como uma estrutura de célula bidimensional (Figura 3). As células atingiram a confluência, depois de três dias em cultura em St-IPAAm170 e St-IPAAm480 superfícies a 37 ° C, e a camada de células foi rapidamente recuperado após a redução da temperatura de 37 ° C a 20 ° C. O efeito do peso molecular e um m de St-IPAAms na recuperação camada de células está resumido na Tabela 1. A viabilidade das folhas de células foi avaliada por coloração com azul de tripano após o desprendimento da folha BAECs. As células tratadas com tripsina-EDTA sobre o substrato de vidro a 37 ° C foram usadas como controlo. rácios de células mortas na ST-IPAAm170, St-IPAAm480 e o substrato de vidro hidrofóbico como um controlo foi calculada para ser de aproximadamente 11,0%, 7,7% e 11,7%, respectivamente. Estes resultados indicaram que ceviabilidade ll quase não foi afetada pela redução da temperatura.
Figura 1:. Preparação de uma superfície de transferência de película thermoresponsive de Langmuir (A) O bloco polystyrene- -poli (N -isopropylacrylamide) (St-IPAAM) solução de clorofórmio foi suavemente solto sobre uma interface ar-água. A pressão superficial foi medida durante a compressão para detectar eventuais defeitos no filme de Langmuir. (B) dois obstáculos foram usadas para comprimir as moléculas St-IPAAM na interface até uma área de alvo de 50 cm 2 foi alcançado. (C) Após a compressão, um substrato de vidro de cobertura hidrofobicamente modificada foi colocada horizontalmente sobre a interface com uma fase de alinhamento durante 5 min. O substrato foi levantada horizontalmente e secou-se durante 1 dia. Este número foi ligeiramente modificado a partir da publicação pela SakUma et al. 27
Figura 2:. Microscopia de força atômica (AFM) imagens topográficas (1 x 1 PM) de Langmuir superfícies transferido de película (superfície St-IPAAM) Painel esquerdo: superfícies nanoestruturadas de St-IPAAm170 com um A m de 10 nm 2 / molécula. Painel direito: superfícies nanoestruturadas de St-IPAAm480 com um A m de 40 nm 2 / molécula. As imagens de AFM foram obtidos em modo de batimento com um braço de suporte de silício dopado com fosfato com uma constante de mola de 3 N / m e a frequência ressonante de 70-90 kHz.
Tabela 1:. Recuperação de Bovinos de células endoteliais da artéria carótida (BAEC) folha de uma superfície transferiu-film Langmuir com várias densidades e comprimentos de cadeia PIPAAm "Good" representa ce intactorecuperação folha ll. "Praticamente recuperado" significa que as células poderiam ser confluently cultivadas e as células em cultura mostrou pouco ou nenhum descolamento da superfície, mesmo após uma redução na temperatura. "Adesão fraca" significa que as células não foram cultivadas até à confluência a 37 ° C durante 3 dias. 
Figura 3: imagem macroscópica de uma camada de células recuperado em uma superfície transferiu-film Langmuir com St-IPAAm480 e um A m de 40 nm 
Animated Figura 1: . (Clique direito a download) fotografias de lapso de tempo de BAECs aderência e descolamento em uma superfície de transferência de filme de Langmuir com St-IPAAm480 e um Am de 40 nm 2 / molécula. As imagens foram coletadas em intervalos de 2 minutos e as imagens recolhidas foram fornecidos como um filme em 960x velocidade. obarra de escala no filme é de 50 mm. St-IPAAm170 St-IPAAm480 3 [2 nm / molécula] 10 [2 nm / molécula] 40 [2 nm / molécula] 3 [2 nm / molécula] 10 [2 nm / molécula] 40 [2 nm / molécula] fraca adesão Boa dificilmente recuperado fraca adesão fraca adesão Boa
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Discussion
Uma superfície termicamente reativo foi fabricado pelo método de Langmuir-Schaefer, e as propriedades de superfície para adesão celular / descolamento e a folha de célula de recuperação foram optimizados. Ao utilizar este método para a fabricação de superfícies, vários passos são críticos. A composição molecular das moléculas de St-IPAAM tem um grande efeito sobre a estrutura da superfície e a estabilidade da superfície, e, por extensão, a adesão celular e descolamento. Em particular, as moléculas de St-IPAAM deve ter uma distribuição de peso molecular estreita. No nosso método, duas moléculas de St-IPAAM com diferentes comprimentos de cadeia PIPAAm foram sintetizados por polimerização RAFT, permitindo o controlo do peso molecular e distribuição de peso molecular.
Devem ser tomadas medidas para evitar a contaminação da interface ar-água durante a preparação da superfície de St-IPAAM para evitar defeitos nas nanoestruturas. Antes de deixar cair moléculas de polímero para a interface, contaminanTS deve ser aspirado até a pressão de superfície atinge aproximadamente 0 mN / m. A contaminação tende a acumular-se em volta das extremidades da calha e da placa de Wilhelmy. Uma vez que a placa de Wilhelmy teve alguma contaminação na sua superfície, por um tratamento térmico. Quando uma placa de Wilhelmy papel é utilizado, o passo de aspiração na interface deve ser repetido pelo menos duas vezes. O π-se uma curva isotérmica m também depende da presença de contaminação na interface ar-água. Recomenda-se que a curva das isotermas de ser obtida mais do que uma vez antes do fabrico do filme. Uma vez que a contaminação do substrato de vidro modificado hidrofóbico também pode ocorrer, o substrato deve ser soprado com ar fresco ou de gás de azoto para eliminar a contaminação.
Para fabricar consistentemente superfícies transferido por película de Langmuir (superfície St-IPAAM), o segmento hidrofóbico de um polímero é importante porque a interacção hidrofóbica entre o filme de Langmuir e hidrofóbico I vidro modificado é a força motriz da reação. Neste estudo, porque o copolímero em bloco era composta por poliestireno, que é fortemente hidrofóbico e hidrofílico PIPAAm à temperatura ambiente, a película foi transferida de forma estável aderida ao substrato, mesmo sob as condições da água ou de cultura de células. Isto indica que os segmentos hidrofóbicos desempenham um papel importante no fabrico de uma superfície robusta St-IPAAM.
Para controlar a adesão celular e descolamento numa superfície de temperatura-sensível, tanto a composição molecular e o controlo preciso da densidade são importantes. Neste método de Langmuir-Schaefer, a área por molécula de (A m) de polímero sintetizado por uma determinada quantidade de moléculas descartado e a área de alvo de uma interface ar-água pode ser controlada por compressão. A A m de deixar cair moléculas St-IPAAM pode, em teoria, ser calculada pela seguinte equação:
d / 53465 / 53465eq1.jpg "/>
onde A é a área da interface, M w é o peso molecular de St-IPAAms, c é a concentração da solução de clorofórmio, N é um número de Avogadro, e V é o volume da solução do polímero cair. Estruturas de ilha do mar em nanoescala são observados em superfícies St-IPAAM após a fabricação, porque polímeros anfifílicos formar estruturas de auto-organização em uma interface ar-água, conforme descrito em estudos anteriores 13-17. O tamanho e a quantidade de estruturas em nano-escala foi controlada por um m e o peso molecular de St-IPAAms.
A adesão celular e descolamento foram avaliados em superfícies PIPAAm-revestidos fabricados por vários métodos, incluindo a irradiação de feixe de electrões, a polimerização iniciada TRAF da superfície e o revestimento de rotação 19-27. Uma vez que a densidade, peso molecular, e a estrutura PIPAAm afectar CELl adesão e desprendimento, técnicas precisas para a fabricação de superfície PIPAAm revestido são importantes. Neste método de Langmuir-Schaefer, densidade, peso molecular e nanoestruturas de superfície pode ser controlada como acima descrito. A adesão celular e descolamento nas superfícies St-IPAAM foram drasticamente afetados por vários A m e composição molecular St-IPAAM, e algumas condições de St-IPAAM superfícies de adesão celular e descolamento poderiam ser optimizadas. Estes resultados indicam que este método pode controlar a interacção entre a superfície e as células do St-IPAAM.
Para recuperar reprodutivelmente camada de células intactas, a concepção de um polímero anfifílico é mais importante. Quando apenas os polímeros hidrófilos são fabricados sobre uma superfície por um método de Langmuir-Schaefer, polímeros revestidos são facilmente lavadas por água destilada ou meio de cultura. Este resultado indicou que o polímero hidrofóbico fraca não devem ser utilizados de forma reprodutível para a recuperação de folha de célula nesta metod porque polímero de superfície modificada da era instável em condições de água. No nosso método, o segmento hidrófilo num polímero anfifílico permite a fabricação robusta sobre uma superfície sem lavar a cabo por uma solução aquosa. Além disso, uma vez que o filme de Langmuir foi paralelamente transferido para um substrato de vidro neste estudo, foram observadas estruturas de ilha mar em escala nano sobre a superfície. Embora a estrutura de película de Langmuir no lado basal é bem conhecido por ser diferente do que no lado apical, a estrutura foi fixado por uma transferência paralela.
A terapia celular e medicina regenerativa tem sido focado na possibilidade de pacientes que não respondem a outros tratamentos de cura. Nosso laboratório desenvolveu uma abordagem de engenharia original, livre de andaime de tecido utilizando engenharia camada de células fabricadas em uma superfície de cultura termicamente reativo com potenciais aplicações em engenharia de tecidos. Vários ensaios clínicos com folhas celulares são already em curso e têm demonstrado resultados bem sucedidos para vários tipos de tecidos 29-31. Embora BAECs foram usadas como a fonte de células para fabricar folhas de célula, de outras fontes de células, incluindo células estaminais, pode ser usado para fabricar folhas sobre uma superfície St-IPAAM, optimizando as combinações de um m e a composição molecular de moléculas de St-IPAAM. Esta tecnologia convencional não irá contribuir não só para a produção fácil de superfícies nanoestruturadas mas também estratégias de cultura de células fundamentais para utilização em medicina regenerativa.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| N-isopropylacrylamide | Kohjin | No catalog number | |
| Azobis(4-cyanovaleric acid) | Wako Pure Chemicals | 016-19332 | |
| Styrene | Sigma-Aldrich | S4972 | |
| 1,3,5-trioxane | Sigma-Aldrich | T81108 | |
| 1,4-Dioxane | Wako Pure Chemicals | 045-24491 | |
| DMEM | Sigma | D6429 | |
| PBS | Nakarai | 11482-15 | |
| Streptomycin | GIBCO BRL | 15140-163 | |
| Penicillin | GIBCO BRL | 15140-122 | |
| Trypsin-EDTA | Sigma | T4174 | |
| FBS | Japan Bioserum | JBS-11501 | |
| BAECs | Health Science Reserch Resources Bank | JCRB0099 | |
| Cover Glasses | Matsunami Glass Industry | C024501 | |
| AFM NanoScope V | Veeco | ||
| 1H NMR INOVA 400 | Varian, Palo Alto | ||
| ATR/FT-IR NICOLET 6700 | Thermo Scientific | ||
| GPC HLC-8320GPC | Tosoh | ||
| TSKgel Super AW2500, AW3000, AW4000 | Tosoh | ||
| Langmuir-Blodgett Deposition Troughs | KSV Instruments | KN 2002 | KSV NIWA Midium trough |
| Nikon ECLIPSE TE2000-U | Nikon |
References
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