في هذه الدراسة، كان يعمل في غرفة تدفق نانو ميكروفلويديك لتصور وظيفيا تميز الحركة ارتعاش Xylella fastidiosa، وهي البكتيريا التي تسبب مرض بيرس في الكرمة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
Xylella fastidiosa هو نوع من البكتيريا سالبة الجرام غير سوطي التي تسبب عددا من الأمراض الهامة اقتصاديا من النباتات. تقدم الحركة الوخز اكس. fastidiosa وسيلة للحركة لمسافات طويلة داخل المصنع والاستعمار، إذ تسهم نحو المرضية في اكس. fastidiosa. إن الحركة ارتعاش اكس. يتم تشغيل fastidiosa من النوع الرابع الشعرة. وينظم النوع الرابع الشعرة من Xylella fastidiosa التي كتبها pilG، منظم الكيميائي في بيل-حزب الشعب الجمهوري البروتينات ترميز الاوبرون التي تشارك مع مسارات نقل الإشارة. لتوضيح أدوار pilG في الحركة ارتعاش اكس. وقد وضعت fastidiosa، وpilG -deficient متحولة XF ΔpilG وسلالة مكملة لها XfΔpilG- C التي تحتوي على pilG مواطن. واستخدمت غرف ميكروفلويديك متكاملة مع نظام تسجيل صورة مرور الزمن لمراقبة الوخز الحركة في XfΔpILG، XfΔpilG- C ونوع السلالة في البرية. باستخدام هذا النظام تسجيل، فإنه يسمح الملاحظات على المدى الطويل المكانية والزمانية لتجميع والهجرة من الخلايا الفردية والسكان من البكتيريا عبر حركية الوخز. اكس. أظهر fastidiosa النوع البري ومكملة XfΔpilG- C سلالة خصائص الوخز حركية نموذجية الملاحظة المباشرة في غرف تدفق الموائع الدقيقة، في حين عرضت متحولة XfΔpliG النمط الظاهري نقص الوخز. وتوضح هذه الدراسة أن pilG يساهم في الحركة ارتعاش اكس. fastidiosa. ويستخدم غرفة تدفق الموائع الدقيقة كوسيلة لمراقبة الوخز حركية.
المقدمة
Xylella fastidiosa هو غير سوطي، البكتيريا المسببة للأمراض سلبية الغرام التي تسبب عددا من الأمراض المحاصيل ذات الأهمية الاقتصادية، بما في ذلك مرض بيرس في الكرمة (كرمة العنب الاوروبي L.) 1،2، 3. هذه البكتيريا يقتصر على الخشب التي تضطلع المياه أوعية. إصابة الكرمة يتسبب في انسداد الأوعية الخشب والنتائج في الإجهاد المائي ونقص التغذية 3. الاستعمار الناجح يعتمد على قدرة بكتيريا للانتقال من موقع الأولي العدوى إلى بقية النبات 3. الوخز حركية وسيلة لحركة البكتيرية مستقلة سوطي من خلال الإرشاد، والمرفق، وتراجع من نوع القطبي الرابع البيلي 4 التي اتسمت في اكس. fastidiosa <....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. الطرفية هامش البكتيرية مستعمرة
- تنمو اكس. fastidiosa (XF) تيميكولا النوع البري 22، pilG حذف متحولة XF ΔpliG (باستخدام سبق وصفها استراتيجية حذف 23)، ولها مكملة XfΔpliG -C (باستخدام سبق وصفها القائم على كروموسوم استراتيجية تكامل الجيني 24) على PD2 لوحات المتوسطة أجار 25 عند 28 درجة مئوية لمدة 5-7 أيام.
- السيلوفان الأوتوكلاف (1 × 1 سم 2) في الماء عند 121 درجة مئوية (249 درجة فهرنهايت)....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
وجود هامش مستعمرة الطرفية يدل على النوع الرابع بوساطة شعرة الوخز حركية، لوحظ في مستعمرات اكس. النوع البري fastidiosa ومكملة سلالة XF ΔpliG -C (الشكل 1). متحولة XfΔpliG، ومع ذلك، لم تظهر هامشية حول المحيط الخارجي للمستعمرات (الشكل 1). كشفت الوقت الفاصل بين التصوير من الخلايا البكتيرية في غرف تدفق نانو ميكروفلويديك أن لوحظ الوخز الحركة في كل من النوع البري اكس. fastidi.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
في هذه الدراسة، ونحن ميزت سلوك حركة اكس. fastidiosa PilG متحولة XF ΔpilG ومتكاملة سلالات XfΔpilG- C في المصممة حديثا متعددة متوازية نانو قناة الصغرى غرف uidic فلوريدا. لا تستطيع الدوائر uidic المصممة حديثا الصغير فلوريدا قد تصل إلى أربع قاعات متوازية مع 100 ميكرومتر نانو القناة في عرض مقارنة لتصاميم سابقة مع واحد فقط 50 ميكرون قناة واسعة 18. تحسن أوسع قناة نانو تسهل إدخال الخلايا البكتيرية مع المتدفقة من وسائل الإعلام. وبالإض.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب تعلن أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.
شكر وتقدير
وأيد هذه الدراسة من قبل الولايات المتحدة وزارة الزراعة، دائرة البحوث الزراعية. وذكر الأسماء التجارية أو المنتجات التجارية في هذا المنشور فقط لغرض توفير معلومات محددة، ولا تعني توصية أو تأييد من قبل وزارة الزراعة في الولايات المتحدة. وزارة الزراعة الأميركية تساوي مزود الفرصة وصاحب العمل.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| <مواد علم الأحياء القوية > < / قوية > | |||
| < م > X. fastidiosa (Xf) < / م > تيميكولا نوع | كوستا ، إتش إس ، <م > وآخرون < / إم > ، 2004 22< / sup> | ||
| pilG< em> حذف متحولة Xf & Delta; pliG< / em> | Shi ، X. Y. ، et al.< / em> ، 2007 26< / sup> | ||
| pilG< em> سلالة تكميلية Xf & Delta; pliG-C | ديفيس ، إم جيه ، <م > وآخرون < / إم > 1998 23< / sup> | ||
| المواد والمعدات الفيزيائية < / قوي> حلقات | |||
| التلقيح التي يمكن التخلص منها | VWR الدولية ، Radnor ، PA | # 22-363-607 | الإجراءات الكمية مثل الجمع البكتيري |
| Polydimethylsiloxane (PDMS) | شركة داو كورنينج | # 0002709226 | سيلجارد 184 سيليكون أطقم المرن |
| AmScope MD2000 الكاميرا الرقمية | AmScope, إيرفين, CA | SE305R-AZ-E | صورة, تسجيل الفيديو والقياس&NBSP; |
| خط الأنابيب | Edgewood ، نيويورك | متصل بالحقنة وغرفة الموائع | |
| الدقيقة موصلات اللور البلاستيكية | Edgewood ، NY | متصلة بالحقنة وغرفة السوائل | |
| مضخات الحقنة Pico | Plus ، Harvard Apparatus ، MA | # 702209 | يمكن ضبط معدل التدفق أثناء تشغيل المضخة. |
| المحاقن | Gastight ، شركة Hemilton ، Reno ، NV | # 1005 | توفير المرق المتدفق |
| مقلوب أوليمبوس IMT-2 مجهر | أوليمبوس | IMT-2 FLuoro PHase | مراقبة الصور وتسجيل |
| الكاميرا الرقمية SPOT-RT | أدوات التشخيص ، Inc. ، MI | RT230 | الصورة وتسجيل الفيديو والقياس |
| مصراع المجهر | The UNIBLITZ ، الولايات المتحدة < م > | #LS2T2 | كاميرا التحكم s التعرض الوقت |
| المجهر مصراع نظام | التحكم في UNIBLITZ, الولايات المتحدة< / em> | VCM-D1 | VCM-D1 قناة واحدة CE / UL / CSA وافق مصراع سائق |
| MetaMorph صورة البرمجيات | Universal Imaging Corp., PA | في الوقت الحقيقي معالجة الصور فائقة الدقة |
المراجع
- Purcell, A. H., Hopkins, D. L. Fastidious xylem-limited bacterial plant pathogens. Annu. Rev. Phytopathol. 34, 131-151 (1996).
- Purcell, A. H. Xylella fastidiosa, a regional problem or global threat. J. Plant Pathology. 79, 99-105 (1997).
- Hopkins, D. L.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
