Introduction
アルツハイマー病（AD）は、認知症の最も一般的な形態であり、全世界で約35万人1に影響を与えます 。広くADの病因の中心に位置するように考えられて疾患の神経病理学的特徴は、過リン酸化タウ蛋白質2の細胞内神経原線維変化および凝集したアミロイドβ（Aβ）ペプチド3からなる細胞外斑です。これに伴い、バイオマーカーによって、in vivoでのプラーク病変の評価は最近、AD 4のための研究診断基準に含まれています。 Aβ1-42のCSF測定のために、いくつかのイムノアッセイが利用可能であり、多くの臨床検査室5で使用されています。 CSF中のAβ1-42の濃度は、BRでのプラーク中のペプチドの沈着を反映し、認知正常な高齢者に比べてAD患者では約50％低くなっていますAIN 6、7。
これらのバイオマーカーは、主に免疫アッセイ（ すなわち、抗体ベースの技術）を用いて分析されているが、これらのアッセイは、マトリックス効果8によって影響され得ます。異なるテクノロジプラットフォームイムノアッセイおよびアッセイの標準化9の欠如の使用は、10は 11、12困難なグローバルなカットオフ濃度の導入を行います。分析的に検証さRMPは、理想的には、分析プラットフォーム間でより良い比較では、全体的な測定のばらつきの要因のより良好な制御が得られ、異なるアッセイプラットフォームの均一なキャリブレーションを可能にするであろう。
開発されたLC-MS / MS法を用いてAβ1-42の絶対的な定量化は、抗体ベースのTECHNに関連する問題の多くを克服しますiques。検査医学（JCTLMデータベース識別番号C11RMP9）におけるトレーサビリティのための合同委員会がRMPとしてリストされている方法は、CSFAβ1を調和させる認証標準物質（CRM）におけるAβ1-42の絶対濃度を決定するために使用されます技術および分析プラットフォーム間-42測定。説明ワークフローは、医学の他の領域内のペプチドおよびタンパク質のための候補参照方法の開発のための関連性のものでなければなりません。
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Protocol
注：このプロトコルは、出発物質として、各Aβペプチドのために50μg/ mLの濃度で、少なくとも50μLのアリコートを必要とします。 Aβペプチドは、脱イオン水中の20％アセトニトリル（ACN）、4％濃アンモニア溶液（V / V）に溶解し、80℃で保存されるべきです。
注意：安全情報については、 表1を参照してください。
ソリューションの調製
- 脱イオン水中でACN、濃縮アンモニアの4mLの（〜25％）の20 mLで希釈し、脱イオン水中の20％ACN、4％濃アンモニア溶液（v / v）を100mLのを準備します。脱イオン水で100mLへの最終的な音量を調整します。新鮮な毎日を行います。
- 50 mLの最終容量まで脱イオン水にグアニジン塩酸塩の26.08グラムを溶解することにより、5 Mグアニジン塩酸50mLのを準備します。 20℃で保存し、新鮮な毎月を作ります。
- 脱イオン水中の4％リン酸（V / 200mLのを準備v）で脱イオン水中に濃リン酸（〜85％）の9.4 mLで希釈し。脱イオン水で200ミリリットルの最終容量を調整します。冷蔵庫に保管し、新鮮毎週行います。
- 脱イオン水中でACN 37.5 mL及び濃アンモニア5mLの（〜25％）を希釈して、脱イオン水中で75％ACNおよび10％濃アンモニア溶液50ml（V / V）を調製します。脱イオン水で50 mLで最終容量を調整します。新鮮な毎日を行います。
- 日常の臨床分析から匿名化された残りの試料から得られたキャリブレータのためのヒトCSFの少なくとも2.5mLのを、解凍します。
- 150mMのナトリウム、3.0 mMのK、1.4 mMのカルシウム、0.8 mMのマグネシウム、1.0 mMのP、および脱イオン水で155 mMののClを含む人工CSFを準備し、4ミリグラム/ mLの最終濃度にウシ血清アルブミンを追加します。唯一の1 mLを分析ごとに必要ですが、将来の使用のために大容量、一定分量を、およびストアを準備されています。
キャリブレーターの調製
- 4 / mlの1の0.5ミリリットルを準備20％のACNおよび0.5 mLのマイクロ遠心チューブ中の4％の濃アンモニアを50μg/ mLの15NAβ142 0.46ミリリットルの40μLを添加することにより5NAβ1-42ペプチド 。 1分間ボルテックスミキサーで混合します。
- 20％ACNおよび2 mLのマイクロ遠心チューブ中で4％の濃アンモニアの1.95 mLに50μLの4μg/ mLの15のNAβ142を追加することにより、100ng / mlの15NAβ1-42ペプチドの2ミリリットルを準備します。 1分間ボルテックスミキサーで混合します。
- 表2に示した各溶液の体積を混合することにより、6キャリブレーター溶液（AF）を準備します。 0.5、1.5、および2 mLのマイクロ遠心チューブを使用してください。 1分間ボルテックスミキサーで混合します。
- 1分間ボルテックスミキサーに、表3ミックスに応じて対応するキャリブレーションソリューションと人間のCSFを追加することにより、0.5 mLのマイクロ遠心チューブ中の最終キャリブレータ（二重に）を準備します。
内部標準の調製
- 20％ACNおよび2 mLのマイクロ遠心チューブ中の4％の濃アンモニアの1.968 mLに32μLを50μg/ mLの13のCAβ142を追加することにより、0.8μgの/ mLの13CAβ1-42ペプチドの2ミリリットルを準備します。 1分間ボルテックスミキサーで混合します。
- 5 mLのマイクロ遠心チューブ中の20％ACNおよび4％濃アンモニアの4.9 mLに0.8μgの/ mLの0.1mLのを追加することにより、16 ngの/ mLの13CAβ1-42ペプチドの5ミリリットルを準備します。 1分間ボルテックスミキサーで混合します。
レスポンスファクタのサンプルの4準備
注：応答因子（RF）決意を較正するために使用標識ペプチドの濃度（15NAβ1-42）を決定するために実行されます。これは、天然Aβ1-42ペプチドの濃度は、アミノ酸分析（AAA）を用いて決定されていることを必要とします。このように、ボリュームおよびネイティブAβ1-42ペプチドのアリコートの濃度AAAの要件を満たす必要があります。
- 20％のACNおよび0.5 mLのマイクロ遠心チューブ中で4％の濃アンモニアの0.46 mLに50μg/ mlのネイティブAβ1-42の40μLを追加することで、4μgの/ mLのネイティブ（非標識）Aβ1-42 0.5mLのを準備します。 1分間ボルテックスミキサーで混合します。
- 20％の1.96 mLに4μgの/ mLの15NAβ1-42の4 / mlのネイティブAβ1-42および20μLの20μLを追加することで、ネイティブと15NAβ1-42の2-mLの40 ngの/ mLのミックスを調製ACNおよび4％が2 mLのマイクロ遠心チューブ中のアンモニアを濃縮しました。 1分間ボルテックスミキサーで混合します。
- 0.5mLのマイクロチューブに人工CSFの0.38 mLに40 ngの/ mLの混合物の20μLを追加します。重複を準備し、1分間ボルテックスミキサーで混ぜます。
5.サンプル調製
注：ローラー上、室温で測定されるサンプルを解凍します。
- （使用している場合、品質管理を含む[QC]サンプル） 図1（完全版が使用されていると仮定）によると、96ディープウェルプレート1 mLのタンパク質に、各キャリブレータの0.18 mLを加え、応答率、および未知のサンプル。でサンプルを追加してください、またはウェルの底に近いです。
- 各ウェル（ すなわち、キャリブレータ、応答因子のQC、及び未知数）に内部標準の20μLを追加します。ピペットチップを浸漬することなく、試料の表面に十分に近い側のドロップを解放することが重要です。
- 各ウェルに0.2 mLと5 Mグアニジン塩酸塩を追加します。
- マイクロプレートシェーカー上のサンプルプレートを配置し、1100 rpmで45分間サンプルを混ぜます。最適な周波数は、計装に応じて異なる場合があります。ソリューションが完全に混合され、内部標準またはCSFのない滴をウェルの側に混合されていない残っていないように、ミキサーの周波数と振幅を設定します。
- 4％リン酸0.2 mLを加え各ウェルに。渦を簡単に混ぜます。
6.固相抽出
注：すべての洗浄、ロード、および溶出工程では、溶液を添加した後、可能な限り低い真空を適用し、ロードまたは溶液を溶出するために、必要に応じて徐々に増加します。各ローディングおよび溶出工程の間に真空を無効にします。
- 混合モード下での廃棄物のための貯蔵トレーを入れ、抽出プレートマニホールド室における陽イオン交換、96ウェル固相抽出（SPE）プレート。
- 各ウェルにメタノール0.2mLのを追加することにより、SPE吸着剤を調整します。
- 各ウェルに、4％のリン酸を0.2mLを添加することにより吸着剤を平衡化します。
- SPEプレートにディープウェルプレートから全てのサンプル（各ウェル中に約0.62ミリリットル）を転送します。 SPEプレートにディープウェルプレートからサンプルを転送するときに8チャンネルピペットを使用します。サンプルはインターンが含まれているため、すべてのサンプルの全体または同等のボリュームを転送することが重要ではありません変動を補償しますアル標準。
- サンプルを各ウェルに4％リン酸を0.2mLを添加することによって通過した後の吸着剤を洗浄します。
- 洗浄溶媒は、吸着剤から溶出した後、捕集板や管をリザーバートレイを交換してください。
- 二回75％ACN / 10％濃アンモニアの50μLを添加することにより、吸着剤から試料を溶出し、そしてこの溶液が吸着剤を通過することは非常に低真空を必要とすることに注意してください。各添加の間に真空を無効にすることを忘れないでください。
- オプション：コレクションプレートまたはチューブを密封し、-80℃でそれらを凍結。 6.8.2に進む前に、コレクションプレートまたはチューブからシールを取り外します。
- （熱を加えることなく）真空遠心分離を使用して溶出液を乾燥させます。これは、真空遠心分離に応じて、数時間に1から取ることができます。
- 容器を密封し、-80℃でそれらを凍結。
7.液体クロマトグラフィー
- 、およびニードル洗浄（50％ACN（ACN [V / V]で4％の脱イオン水および0.1％濃アンモニア）、B（脱イオン水[V / V]中の5％ACNおよび0.3％濃アンモニア）移動相Aを準備4％の脱イオン水にアンモニアを濃縮[v / v]）。
- 移動相Aの500ミリリットルのために、脱イオン水にACNの25mLの濃アンモニアの1.5 mLを加え。脱イオン水で500 mLで最終容量を調整します。
- 移動相Bの500ミリリットルのために、濃アンモニアの500μLとACNへの脱イオン水25 mLを加え。 ACNと500ミリリットルへの最終的な音量を調整します。
- ACN 120mLの脱イオン水に濃アンモニアの10ミリリットルを追加することにより、ニードル洗浄の250ミリリットルを準備します。脱イオン水で250 mLで最終容量を調整します。
- LCシステムで使用する前に20分間の超音波処理浴中にオープン移動相AとBとニードル洗浄瓶を入れて
- 20％のACNの25μLと、4％concentraで各サンプルを溶解テッドアンモニア溶液と20分間シェーカー上に置きます。遠心分離機のサンプルダウンして、オートサンプラーに配置します（7℃に保ちます）。
- 50℃に維持し、1×250ミリメートル2ポリスチレン-ジビニルベンゼン（逆相）モノリシックカラム上のサンプルの20μLを注入します。
- 0.3 mL /分の流速を用いて、表4に示すLC勾配を使用します。質量分析計の汚染を低減するために迂回バルブを使用して（ポストカラム）を無駄に2最初と最後の5分をそらします。
8.質量分析
注：これらのパラメータはaheatedエレクトロスプレーイオン化源を備えた四重極オービトラップハイブリッド質量分析計のために使用しました。
- 表5に記載のイオン源のパラメータを設定します。
- （ネイティブAβ1-42の4+充電状態を分離するために1,129.48質量をMS機器を設定します2.5メートル/ zのの分離幅と四重極型質量分析計における電荷比[ のm / z]）、1-42 15NAβ（1,143.00 のm / z）、および13CAβ1-42（1,179.50 のm / z）。
- 17.0の正規化衝突エネルギー（NCE）との衝突セル内の単離されたペプチドを断片化します。 （このようなトリプル四重極MSなどの器具の他のタイプを、使用している場合は特に）であっても、同じタイプのこれは、各楽器に合わせて調整する必要がある場合があります。
- 2×10 5の電荷の自動利得制御対象と250ミリ秒の最大噴射時間で、17.500の分解能でフラグメントスペクトルを記録します。
9.データ処理
- 各ペプチドのためのクロマトグラフィーの領域を計算するために、 表6に（±250ミリ質量単位[MMU]の質量公差）プロダクトイオンの合計を使用してください。イオンの種類と数は、ネイティブAβのために示されていることに注意してください
- ネイティブAβ1-42の曲線下面積を持つ15NAβ1-42の曲線（クロマトグラフピーク）の下の領域を分割して2つの応答因子サンプルの平均応答係数を決定します。
- ステップ9.2で算出された応答因子でそれを掛けることによって、キャリブレーションのために使用される15NAβ1-42の濃度を調整します。
- 濃度に対するキャリブレータの2セットから13CAβ1-42に15NAβ1-42の面積比をプロットして検量線を作成します。
- 線形回帰を用いて検量線の傾きと切片を計算します。
- アンのための内部標準（13CAβ1-42）にネイティブAβ1-42の面積比を計算します既知のサンプル。
- ステップ9.5で得られた傾きと切片を用いて、検量線から未知のサンプルの濃度を外挿する。
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Representative Results
図1のプレート設定は、サンプルの完全版のために使用されます。少数の未知の試料を分析する場合は、第二校正器、RF、およびQCセットは未知サンプルの前半の後に配置する必要があります。
図2に見られるように、校正器は、低い標準偏差を用いて、回帰直線に近いです。この方法は、150 pg / mlで4,000 pg / mlでの定量化の上位レベルの定量化のより低いレベルを有します。キャリブレーションの残余の標準偏差は、もちろん、可能な限り低くあるべきです。キャリブレーションが非線形である場合、ランは、（重症度に応じて）破棄されるべきであり、偏差が不正確なピペット操作技術および/またはキャリブレーターの希釈でのエラーによる可能性が最も高いです。複製の変動係数（CV）は20％以下、好ましくは10％未満であるべきです。
ページ-ogether.within = "1">を同時にLCカラムからネイティブの15 N-及び13CAβ1-42溶出（彼らは唯一の同位体レベルで異なるため）、（ 図3左右対称のピークに近く、かなりのテーリングなしで）。少なくとも10回の測定を各クロマトグラフピークのために行われるべきであり、器具方法における最大注入時間で調整することができます。すべての3つのペプチドは、MS分析の間にすべての測定（較正、RF、および未知）に対して同時に測定することができます。しかし、この方法の感度は次善のであれば、興味のあるペプチドのみ、 すなわち （各注入のために測定する必要があります。、のみ、RFサンプルのネイティブと15NAβ1-42、キャリブレータ15 N-及び13CAβ1-42を測定ネイティブおよび未知の試料について13CAβ1-42）。
図1「SRC = "/ファイル/ ftp_upload / 55386 / 55386fig1.jpg" />
図1：SPE とディープウェルプレートのレイアウト。キャリブレータの典型的なレイアウト（AF）、応答係数サンプル（RF）、品質管理サンプル（QC）、および未知数。 この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。
図2： 検量線。検量線は172で15NAβ1-42、572、1144、2287、3431、および4574 pg / mlで（応答係数を使用して調整）およびヒトCSF中の内部標準として13CAβ1-42を用いて構築した（n = 2） 。 15NAβ1-42 / 13CAβ1-42の面積比をプロットする（Y軸）濃度（X軸）に対して。 この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。
図3： クロマトグラム。 0.500 ngの/ mLのネイティブ（内因性）Aβ1-42（上部パネル）およびヒトCSF中の1.6 ngの/ mLの13CAβ1-42（下のパネル）のクロマトグラム。 この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。
図4： 未知の試料中の未知のAβ1-42の定量<。/ strong>のピーク面積比は、内部標準（13CAβ1-42）クロマトグラフのピーク面積を用いて、天然Aβ1-42クロマトグラフィーピーク面積を割ることによって計算されます。サンプル中の天然のAβ1-42の濃度は、検量線から推定されます。 この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。
表1：安全に関する情報。このプロトコルのために使用される化学物質の安全性情報。
| キャリブレーター溶液 | 100ng / mlの15NAβ1-42溶液（ML）の体積 20％ACNおよび4％アンモニアの体積（mL）を | 最終容量（ミリリットル） | 最終15NAβ1-42濃度（ngの/ mL）を | |
| A | 0.20 | 0.30 | 0.50 | 40.00 |
| B | 0.15 | 0.35 | 0.50 | 30.00 |
| C言語 | 0.20 | 0.80 | 1.00 | 20.00 |
| D | 0.10 | 0.90 | 1.00 | 10.00 |
| E | 0.05 | 0.95 | 1.00 | 5.00 |
| F | 0.03 | 1.97 | 2.00 | 1.50 |
表2：キャリブレータソリューションを提供しています。キャリブレーター溶液を20％ACN中で調製し、4％アンモニアを濃縮しますCSFのキャリブレータをスパイクするために使用されます。
| 校正器 | キャリブレーター溶液を、対応するの容量（ml） | 人間のCSFの容量（ml） | 最終容量（ミリリットル） | ファイナル15N-Aβ1-42濃度（ngの/ mL）を |
| A | 0.02（A） | 0.18 | 0.20 | 4.00 |
| B | 0.02（B） | 0.18 | 0.20 | 3.00 |
| C言語 | 0.02（C） | 0.18 | 0.20 | 2.00 |
| D | 0.02（D） | 0.18 | 0.20 | 1.00 |
| E | 0.02（E） | 0.18 | 0.20 | 0.50 |
| F | 0.02（F） | 0.18 | 0.20 | 0.15 |
表3：キャリブレータ。人間のCSF中で調製キャリブレータ。
| 時間（分） | ％移動相B |
| 0 | 5 |
| 1 | 5 |
| 6 | 20 |
| 7 | 90 |
| 9 | 90 |
| 10 | 5 |
| 15 | 5 |
表4：LC勾配。 300μL/分の一定流量で使用するLC勾配。
| パラメーター | 値 |
| シースガス | 50 |
| 補助ガス | 6 |
| スプレー電圧 | 4.4 kVの |
| S-レンズRF | 61 |
| ヒーター温度 | 190°C |
| キャピラリー温度 | 350°C |
表5：イオン源の設定。イオン源のパラメータは、機器の調整ソフトウェアに設定します。
| 前駆イオン | プロダクトイオン |
| ネイティブAβ1-42（のm / z 1129.58、4+） | 915.19（b334 +）、943.21（b344の+）、975.98（b354の+）、1000.74（b364の+）、1029.51（b384の+）、1054.03（b394の+）、1078.79（B404 +）の、1107.06（B414 +）の、1163.23（B313 +）の、1200.25（B323 +）の、1257.29（b343の+）、1300.96（b353の+）、1333.66（B363 +）の、1372.00（b383の+）、1405.02（b393の+） |
| 15N-Aβ1-42（のm / z 1143.00、4+） | 926.41、954.68、987.95、1012.71、1041.22、1066.99、1091.75、1120.28、1177.18、1215.55、1272.58、1316.92、1349.94、1388.63、1422.31 |
| 13C-Aβ1-42（のm / z 1179.50、4+） | 955.33、985.11、1019.37、1045.14、1074.65、1100.67、1126.69、1156.40、1253.43、1313.14、1358.50、1393.19、1432.21、1466.90 |
表6：定量化のために使用されるイオン。前駆イオンの4+の電荷状態を2.5 のm / zの分離幅と、四重極質量分析器で分離されています。 （±250、MMUの質量公差）の生成物イオンは、各ペプチドについてのクロマトグラフィーの領域を計算するために使用されます。イオンの種類と数はONLですyは、彼らが15NAβ1-42と13CAβ1-42の両方で同じであるため、ネイティブAβ1-42プロダクトイオンのために示します。
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Discussion
記載された方法のために、代わりに代理母材を使用して、我々は、ヒトCSF中にキャリブレーションを可能にする、代用分析物アプローチ13、14、15、16を用います。サロゲートの検体のアプローチは、二つの異なる同位体標識された規格を必要とします。別の（13CAβ142）を内部標準として使用され、一方の（15NAβ142）は 、ヒトCSF中の較正曲線を生成するために使用されます。未知の内因性Aβ142の濃度は、その後、較正曲線から推定されている計算されたAβ13分の142内在性CAβ142比で15NAβ13分の142CAβ142の比率を使用して構築。利用可能な分析物のないCSF、および低Aβ142回復が存在しないため、代理の検体のアプローチを使用しましたメソッド開発時にサロゲート行列でネイティブAβ142を使用するときに観察されました。
15NAβ142とネイティブAβ142が MSで異なる応答を与える可能性があるため、15NAβ142の濃度は、既知濃度で、RFサンプル-15NAβ142とネイティブAβ142の等しい濃度を含む人工CSF試料を測定することによって調整されますAAA.The応答因子によって決定することは、バッチ間の15 N標識ペプチドの同位体純度で可能な変化に異なる質量分析計との間で異なる場合があります。したがって、応答係数は、各測定日に決定されるべきです。
このプロトコルの中で最も重要なステップは、キャリブレータおよびRFサンプルの準備です。特にAβ1-42、Aβペプチドは、非常に疎水性であり、容易にピペットチップにこだわりますND管は8、17、18面 。ピペット中のAβペプチドの損失を最小限にするために、送達前にピペットチップを飽和させる非常に重要です。好ましくは、ペプチド溶液の三巻は、前溶液を含む新しいチューブへの配信のために廃棄されるべきです。ストック溶液の量および濃度に依存し、これは常に可能ではありません。次善のアプローチは、配信前までと3回上下ペプチド溶液をピペットすることはもちろんです。同じ理由で、大きな空隙容積を避ける、チューブの適切なサイズを使用することが重要です。
方法は、以前に公表されたデータは、回収率が100％（15％）15内にあったことを示しています。逆算キャリブレータのための相対誤差は、キャリブレータ曲線19で定義された範囲全体の15％未満でした。
One Oこの技術のbvious制限は、自動イムノアッセイと比較して低いスループットであることです。しかしながら、記載された方法の目的は、高精度ではなく、スループットです。この方法はまた、19短いAβ1-38およびAβ1〜40を含むように拡張することができます。この方法の別の制限は、オペレータが機器の分析を実行する前に、大規模な質量分析法の訓練を必要とするということです。
イムノアッセイを使用して定量化は、抗体と抗原との間の相互作用に依存しています。この相互作用は、妨害または相互作用と競合し得る試料成分の存在によって影響を受ける可能性があります。また、相互作用はまた、抗原の立体構造によって影響を受ける可能性があります。これらの効果は、制御するのが困難であり、免疫アッセイプラットフォーム間、研究所間の結果を調和させることは困難であった主な理由であると考えられています。ベックMSとause定量化は直接、安定同位体で標識された標準と比較した標的分子をカウントに基づいて、定量は絶対、そのようなマトリックス効果により、一般的に影響を受けません。加えて、免疫アッセイによって診断用タンパク質の測定は、このように比較可能性を改善する、有効なLC-MS / MSおよび安定な同位体標識内部標準からRMPSおよびCRMに、高次の測定手順及び材料の切れ目のない鎖によってサポートされるべきであると結果20、21の信頼性。
結論としては、CSF中のAβ142の測定のための説明RMPは、CSF中のAβ142のための一般的なカットオフ濃度を確立するのに役立つCRMを開発する上で重要なステップです。正確なカットオフを正確に早期のADを診断するために非常に重要であり、疾患修飾薬の新しいタイプは、診療所に到達したときに最も重要です。
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Eppendorf Protein LoBind microcentrifuge tubes, 0.5 mL | Eppendorf | 022431081 | |
| Eppendorf Protein LoBind microcentrifuge tubes, 1.5 mL | Eppendorf | 022431081 | |
| Eppendorf Protein LoBind microcentrifuge tubes, 2 mL | Eppendorf | 022431102 | |
| Eppendorf Protein LoBind microcentrifuge tubes, 5 mL | Eppendorf | 0030 108.310 | |
| Eppendorf Protein LoBind Deepwell Plates 96 | Eppendorf | 951032905 | |
| Micronic 0.75 mL polypropylene tubes, V-bottom | Micronic | MPW32071BC3 | Tubes used for collecting SPE eluate, but other collection devices can be used such as 96-well plates. |
| Micronic Split TPE Capcluster for 96 ind. tubes | Micronic | MP53026 | Caps for Micronic tubes. |
| Micronic Loborack-96 white w high cover bar coded | Micronic | MPW51015BC3 | Holder for Micronic tubes. |
| Biohit Optifit tips 1.2 mL | Sartorius | 791210 | Used to reach all the way to the bottom of the LoBind deepwell plates (96-well). Other narrow tips might work as well. |
| Waters Oasis MCX 96-well µElution Plate | Waters | 186001830BA | |
| Waters Plate manifold reservoir tray | Waters | WAT058942 | |
| Waters Extraction Plate Manifold for Oasis 96-Well Plates | Waters | 186001831 | |
| Ammonium hydroxide solution, puriss. p.a., reag. ISO, reag. Ph. Eur., ~25% NH3 basis | Sigma-Aldrich | 30501-1L-D | |
| Acetonitrile, Far UV HPLC Gradient grade, 2.5 L | Fisher Scientific | A/0627/17X | |
| ortho-Phosphoric acid 85%, ACS,ISO,Reag. Ph Eur | Merck Millipore | 1005731000 | |
| Guanidine Hydrochloride, 500 g | Thermo Scientific | 24110 | |
| Thermo Scientific Q-exactive Hybrid Quadrupole Orbitrap Mass Spectrometer | Thermo Scientific | IQLAAEGAAPFALGMAZR | With bundled Dionex Ultimate 3000 LC & autosampler. |
| Dionex ProSwift RP-4H Monolith Column (1.0 x 250mm) | Dionex | 066640 | |
| Bovine Serum Albumin, lyophilized powder, suitable for (for molecular biology), Non-acetylated | Sigma-Aldrich | B6917 | |
| Beta-Amyloid (1-42), Ultra Pure, TFA | rPeptide | A-1002-2 | |
| 15N Beta-Amyloid (1-42), Uniformly labeled | rPeptide | A-1102-2 | |
| 13C Beta-Amyloid (1-42), Uniformly labeled | rPeptide | A-1106-2 | |
| Microplate shakers, TiMix 2 | Edmund Bühler | 6110 000 |
References
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