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विस्टार अल्बिनो चूहों में एक फीमर ओस्टियोटॉमी मॉडल विकसित करने के लिए प्रोटोकॉल

Published: August 31, 2022 doi: 10.3791/63712
Automatic Translation
1, 2, 2, 2, 2, 2, 2, 6, 6, 3, 4, 5, 1, 2
1Department of Orthopedics, All India Institute of Medical Sciences (AIIMS), 2Department of Biochemistry, All India Institute of Medical Sciences (AIIMS), 3Department of Anaesthesiology Pain Medicine and Critical Care, All India Institute of Medical Sciences (AIIMS), 4Department of Radiodiagnosis, All India Institute of Medical Sciences (AIIMS), 5Department of Pathology, All India Institute of Medical Sciences (AIIMS), 6Central Council for Research in Homoeopathy (CCRH)

Summary

यहां, हम विस्टार अल्बिनो चूहों की फीमर की शाफ्ट को आयनोजेनिक रूप से फ्रैक्चर करने और कैलस के विकास पर अनुवर्ती कार्रवाई करने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं। यह फीमर ऑस्टियोटॉमी मॉडल शोधकर्ताओं को फ्रैक्चर उपचार की प्रक्रिया का मूल्यांकन करने और यह अध्ययन करने में मदद कर सकता है कि एक दवा फ्रैक्चर उपचार को कैसे प्रभावित कर सकती है।

Abstract

फ्रैक्चर उपचार एक शारीरिक प्रक्रिया है जिसके परिणामस्वरूप ओस्टियोब्लास्ट और ओस्टियोक्लास्ट की समन्वित कार्रवाई द्वारा हड्डी के दोषों का पुनर्जनन होता है। ओस्टियोनाबोलिक दवाओं में फ्रैक्चर की मरम्मत को बढ़ाने की क्षमता होती है लेकिन उच्च लागत या अवांछनीय दुष्प्रभाव जैसी बाधाएं होती हैं। एक दवा की हड्डी उपचार क्षमता शुरू में इन विट्रो अध्ययनों द्वारा निर्धारित की जा सकती है, लेकिन विवो अध्ययन में अवधारणा के अंतिम प्रमाण के लिए आवश्यक हैं। हमारा उद्देश्य एक फीमर ओस्टियोटॉमी कृंतक मॉडल विकसित करना था जो शोधकर्ताओं को फीमर के शाफ्ट के फ्रैक्चर के बाद कैलस गठन के विकास को समझने में मदद कर सकता है और यह स्थापित करने में मदद कर सकता है कि क्या एक संभावित दवा में हड्डी उपचार गुण हैं। संस्थागत पशु आचार समिति की मंजूरी के बाद वयस्क नर विस्टार अल्बिनो चूहों का उपयोग किया गया था। कृन्तकों को एनेस्थेटाइज्ड किया गया था, और सड़न रोकनेवाली परिस्थितियों में, खुले ऑस्टियोटॉमी का उपयोग करके फीमर के शाफ्ट के मध्य में पूर्ण अनुप्रस्थ फ्रैक्चर बनाए गए थे। फ्रैक्चर को कम किया गया और आंतरिक रूप से इंट्रामेडुलरी के-तारों का उपयोग करके तय किया गया, और द्वितीयक फ्रैक्चर उपचार होने की अनुमति दी गई। सर्जरी के बाद, इंट्रापरिटोनियल एनाल्जेसिक और एंटीबायोटिक्स 5 दिनों के लिए दिए गए थे। अनुक्रमिक साप्ताहिक एक्स-रे ने कैलस गठन का आकलन किया। चूहों को रेडियोलॉजिकल रूप से पूर्व-निर्धारित समय बिंदुओं के आधार पर बलिदान किया गया था, और फ्रैक्चर कैलस के विकास का रेडियोलॉजिकल रूप से विश्लेषण किया गया था और इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री का उपयोग किया गया था।

Introduction

हड्डी एक घने संयोजी ऊतक है जिसमें हड्डी बनाने वाली कोशिकाएं, ओस्टियोब्लास्ट और हड्डी-पुनर्जीवित कोशिकाएं, ओस्टियोक्लास्ट शामिल हैं। फ्रैक्चर उपचार एक शारीरिक प्रक्रिया है जिसके परिणामस्वरूप ओस्टियोब्लास्ट और ओस्टियोक्लास्टकी समन्वित कार्रवाई द्वारा हड्डी के दोषों का पुनर्जनन होता है। जब फ्रैक्चर होता है, तो फ्रैक्चर साइट पर ओस्टियोब्लास्टिक और ओस्टियोक्लास्टिक गतिविधि कुछ महत्वपूर्ण कारक होते हैं जो हड्डी के उपचार को निर्धारित करते हैं। जब फ्रैक्चर हीलिंग अपने सामान्य पाठ्यक्रम से विचलित हो जाती है, तो इसके परिणामस्वरूप देरी से संघ, मैलयूनियन या नॉनयूनियन होता है। एक फ्रैक्चर को नॉनयूनियन में कहा जाता है जब 9 महीने तक फ्रैक्चर के संघ की विफलता होती है, पिछले 3 महीनों में मरम्मत की कोई प्रगति नहीं होतीहै। सभी फ्रैक्चर के लगभग 10% -15% मरम्मत में देरी का अनुभव करते हैं जो नॉनयूनियन4 में प्रगति कर सकता है। सभी फ्रैक्चर के लिए नॉनयूनियन दर 5% -10% है और इसमें शामिल हड्डी और फ्रैक्चर की साइट के आधार पर भिन्न होतीहै।

फ्रैक्चर नॉनयूनियन के उपचार के लिए वर्तमान आहार में सर्जिकल और / या चिकित्सा तौर-तरीके शामिल हैं। वर्तमान में, अस्थि ग्राफ्टिंग जैसी शल्य चिकित्सा रणनीतियों द्वारा फ्रैक्चर के विलंबित या गैर-मिलन को दूर किया जा सकता है। हालांकि, हड्डी ग्राफ्टिंग की अपनी सीमाएं और जटिलताएं हैं जैसे ग्राफ्ट ऊतक की उपलब्धता, दाता साइट दर्द, रुग्णता और संक्रमण6। चिकित्सा उपचार में अस्थि मोर्फोजेनेटिक प्रोटीन (बीएमपी) और टेरीपैराटाइड (पैराथोर्मोन एनालॉग) जैसी ओस्टियोनाबोलिक दवाएं शामिल हैं। वर्तमान में उपयोग किए जाने वाले ओस्टियोएनाबोलिक एजेंटों में फ्रैक्चर की मरम्मत को बढ़ाने की क्षमता है, लेकिन अत्यधिक लागत या अवांछनीय दुष्प्रभाव जैसी बाधाएंहैं। इसलिए, हड्डी के उपचार के लिए लागत प्रभावी, गैर-सर्जिकल विकल्पों की पहचान करने की गुंजाइश है। एक दवा की हड्डी उपचार क्षमता शुरू में इन विट्रो अध्ययनों द्वारा निर्धारित की जा सकती है, लेकिन विवो अध्ययन में अवधारणा के अंतिम प्रमाण के लिए आवश्यक हैं। एक दवा जो हड्डी के उपचार को बढ़ाने के लिए जानी जाती है, का मूल्यांकन विट्रो में किया जाना चाहिए और, यदि आशाजनक पाया जाता है, तो विवो पशु मॉडल अध्ययनों में उपयोग किया जा सकता है। यदि दवा विवो मॉडल में हड्डी के गठन और रीमॉडेलिंग को बढ़ावा देने के लिए साबित होती है, तो यह अगले चरण (यानी, नैदानिक परीक्षणों) में आगे बढ़ सकती है।

जानवरों में फ्रैक्चर चिकित्सा का आकलन मानव परीक्षणों से गुजरने से पहले हड्डी के उपचार के लिए पेश किए गए एक नए एजेंट का मूल्यांकन करने के लिए एक तार्किक कदम है। फ्रैक्चर उपचार के विवो पशु मॉडल अध्ययनों के लिए, कृन्तक एक तेजी से लोकप्रिय मॉडल बन गए हैं। कृंतक मॉडल ने कम परिचालन लागत, स्थान की सीमित आवश्यकता और हड्डी के उपचार के लिए आवश्यक कम समय के कारणबढ़ती रुचि उत्पन्न की है। इसके अलावा, कृन्तकों में एंटीबॉडी और जीन लक्ष्यों का एक व्यापक स्पेक्ट्रम होता है, जो हड्डी के उपचार और पुनर्जनन के आणविक तंत्र पर अध्ययन की अनुमतिदेता है। एक आम सहमति बैठक ने व्यापक रूप से विभिन्न छोटे पशु हड्डी उपचार मॉडल पर प्रकाश डाला और हड्डी के उपचार को प्रभावित करने वाले विभिन्न मापदंडों पर ध्यान केंद्रित किया, साथ ही साथ कई छोटे पशु फ्रैक्चर मॉडल और प्रत्यारोपणपर जोर दिया।

मूल फ्रैक्चर मॉडल को मोटे तौर पर खुले या बंद मॉडल में विभाजित किया जा सकता है। बंद फ्रैक्चर मॉडल हड्डी पर तीन या चार-बिंदु झुकने वाले बल का उपयोग करते हैं और पारंपरिक शल्य चिकित्सा दृष्टिकोण की आवश्यकता नहीं होती है। वे तिरछे या सर्पिल फ्रैक्चर का कारण बनते हैं, जो मनुष्यों में लंबी हड्डी के फ्रैक्चर के समान होते हैं, लेकिन फ्रैक्चर स्थान और आयामों के मानकीकरण की कमी उनमें एक भ्रमित कारक के रूप में कार्य कर सकतीहै। ओपन फ्रैक्चर मॉडल को हड्डी के ऑस्टियोटॉमी के लिए सर्जिकल एक्सेस की आवश्यकता होती है, फ्रैक्चर साइट पर अधिक सुसंगत फ्रैक्चर पैटर्न प्राप्त करने में मदद मिलती है, लेकिन बंद मॉडल13 की तुलना में देरी से उपचार से जुड़े होते हैं। फ्रैक्चर उपचार का अध्ययन करने के लिए उपयोग की जाने वाली हड्डी की पसंद मुख्य रूप से उनके आयामों और पहुंच के कारण टिबिया और फीमर बनी हुई है। फ्रैक्चर की साइट का विकल्प आमतौर पर डायफिसिस या मेटाफिसिस होता है। मेटाफिज़ियल क्षेत्र को विशेष रूप से उन मामलों में चुना जाता है जहां ऑस्टियोपोरोटिक विषयों में फ्रैक्चर उपचार का अध्ययन किया जाता है, क्योंकि मेटाफिसिस ऑस्टियोपोरोसिस14 से अधिक प्रभावित होता है। फ्रैक्चर11,15 को स्थिर करने के लिए इंट्रामेडुलरी पिन और बाहरी फिक्सेटर जैसे कई प्रत्यारोपण का उपयोग किया जा सकता है।

इस अध्ययन का उद्देश्य एक सरल और आसानी से पालन करने वाले कृंतक मॉडल को विकसित करना था जो शोधकर्ताओं को न केवल फीमर के फ्रैक्चर के बाद कैलस के विकास को समझने में मदद कर सकता है, बल्कि यह निर्धारित करने में मदद कर सकता है कि क्या एक संभावित दवा में उस तंत्र को समझकर हड्डी के उपचार गुण हैं जिसके द्वारा यह कार्य करता है।

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Protocol

संस्थागत पशु आचार समिति (आईएईसी), एम्स, नई दिल्ली, भारत (286/आईएईसी-1/2021) से नैतिक अनुमोदन लेने के बाद पशु प्रयोग किए गए थे।

1. प्रीऑपरेटिव प्रक्रिया

  1. अलग-अलग पिंजरों में सेंट्रल एनिमल फैसिलिटी (सीएएफ) में 6-8 सप्ताह की उम्र के पुरुष विस्टार अल्बिनो चूहों का वजन 150-200 ग्राम के बीच होता है। यह सुनिश्चित करता है कि जब कई चूहे पिंजरों को साझा करते हैं तो कोई सर्जिकल / फ्रैक्चर साइट की चोट नहीं होती है।
  2. चूहों को 50% ± 5% की सापेक्ष आर्द्रता के साथ आर्द्रता-नियंत्रित वातावरण में 23 डिग्री सेल्सियस ± 2 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर रखें, उन्हें 12 घंटे के अंधेरे / प्रकाश चक्र के संपर्क में रखें, और एड लिबिटम को भोजन (मानक अर्ध-सिंथेटिक आहार) तक पहुंच दें: पेलेट आहार (सूखा) और पानी। मानक अर्ध-सिंथेटिक आहार की संरचना इस प्रकार है: भुना हुआ बंगाल बेसन (60%), गेहूं का आटा (22%), कैसिइन (4%), स्किम मिल्क पाउडर (5%), परिष्कृत तेल (4%), स्टार्च के साथ नमक मिश्रण (4.8%), और स्टार्च के साथ विटामिन कोलीन मिश्रण (0.2%)।
  3. सर्जरी से पहले कम से कम 48 घंटे की अवधि के लिए चूहों को अनुकूलित करें।
  4. प्रत्येक चूहे को डिजिटल वजन पैमाने पर तौलें और वजन नोट करें।
  5. सर्जिकल प्रक्रिया शुरू करने से 15 मिनट पहले चूहों को सेफ्यूरोक्सीम (100 मिलीग्राम / किग्रा शरीर का वजन), ट्रामाडोल (25 मिलीग्राम / किग्रा शरीर का वजन), और केटामाइन (75 मिलीग्राम / किग्रा शरीर का वजन) के संयोजन के साथ ज़ाइलाज़िन (10 मिलीग्राम / किग्रा शरीर का वजन) के इंट्रापरिटोनियल (आईपी) इंजेक्शन दें। सूखी आंख को रोकने के लिए दोनों आंखों पर नेत्र मरहम लागू करें।
  6. बाल हटाने वाली क्रीम के सामयिक अनुप्रयोग के साथ, फ्लैंक क्षेत्र से घुटने के जोड़ तक, दाहिने निचले अंग से बालों को हटा दें।
    नोट: विभिन्न मापदंडों के आधारभूत विश्लेषण के लिए प्रत्येक चूहे की पूंछ की नस से रक्त (0.5 एमएल) एकत्र किया जा सकता है। सर्जरी के बाद हर 2 सप्ताह में रक्त फिर से एकत्र किया जा सकता है।

2. ओपन ओस्टियोटॉमी के माध्यम से पूर्ण अनुप्रस्थ फ्रैक्चर बनाने के लिए सर्जिकल प्रक्रिया

नोट: प्रक्रिया करने के लिए एक ऑपरेटिंग टेबल और इष्टतम परिवेश तापमान (26 डिग्री सेल्सियस) के साथ एक निर्दिष्ट ऑपरेशन रूम का उपयोग करें।

  1. ऑपरेटिंग टेबल पर मोम ब्लॉक (एल्यूमीनियम ट्रे 30 सेमी x 30 सेमी x 4 सेमी जिसमें मोम 2.5 सेमी की गहराई तक होता है) रखें और इसे बाँझ ड्रेप्स के साथ कवर करें। मोम ब्लॉक सर्जरी के दौरान जानवर की स्थिति में किसी भी बदलाव को रोकता है।
  2. संज्ञाहरण की शुरुआत की पुष्टि करें (पैर की अंगुली चुटकी के नुकसान की जांच करके)। एनेस्थेटाइज्ड चूहे को बाएं पार्श्व स्थिति में बाँझ ड्रेप पर रखें। एक सहायक को विस्तार में दाहिने निचले अंग (घुटने और कूल्हे) को पकड़ने के लिए कहें। फीमर को सहारा देने के लिए दाहिने पैर के नीचे बाँझ हार्ड सपोर्ट (मार्बल ब्लॉक) रखें। सर्जिकल साइट को शराब और बीटाडीन से साफ करें।
  3. चीरा (दाईं जांघ के पार्श्व पहलू) की जगह पर स्थानीय संज्ञाहरण (1% लिग्नोकेन का 0.25 एमएल) इंजेक्ट करें, एक और बाँझ ड्रेप में एक छेद काटें, और सर्जरी के लिए इसके माध्यम से चूहे के केवल दाहिने पैर को उजागर करें।
  4. दाईं जांघ के पार्श्व की ओर 1 सेमी ऊर्ध्वाधर त्वचा चीरा दें, और इसे नंबर 15 सर्जिकल ब्लेड के साथ आवश्यकता के अनुसार बढ़ाएं।
  5. मेटज़ेनबाम कैंची का उपयोग करके गहरी प्रावरणी को अलग करके विशाल पार्श्विक मांसपेशियों को उजागर करें। जब तक फीमर की शाफ्ट तक नहीं पहुंच जाता, तब तक धमनी बल का उपयोग करके मांसपेशियों के तंतुओं के अनुरूप वास्तु पार्श्व को विभाजित करें।
  6. पेरीओस्टेल लिफ्ट का उपयोग करके हड्डी को इससे जुड़ी मांसपेशियों से मुक्त करें।
  7. वैसोवैगल रिफ्लेक्स को रोकने के लिए पेरीओस्टेम में और उसके आसपास स्थानीय संज्ञाहरण (1% लिग्नोकेन का 0.2 एमएल) इंजेक्ट करें।
  8. नंबर 15 सर्जिकल ब्लेड का उपयोग करके फीमर के शाफ्ट के मध्य-तिहाई में एक इंडेंटेशन बनाएं, और बनाए गए इंडेंटेशन पर छेनी रखकर (पूर्ण फ्रैक्चर) शाफ्ट के मध्य-तिहाई में हड्डी को फ्रैक्चर करें (ताकि छेनी फिसल न जाए) और धीरे से छेनी को हथौड़े से टैप करें। एक साफ ब्रेक सुनिश्चित करने के लिए हड्डी को फ्रैक्चर करते समय हड्डी का समर्थन करने के लिए बाँझ हार्ड सपोर्ट (संगमरमर ब्लॉक) का उपयोग करें।
    नोट: बाँझ कठोर समर्थन आमतौर पर नीचे की मांसपेशियों को महत्वपूर्ण चोट नहीं पहुंचाता है।
  9. बैटरी संचालित पावर ड्रिल की मदद से आयोजित बाँझ के-तार (1.0 मिमी) का उपयोग करके फ्रैक्चर को आंतरिक रूप से ठीक करें। के-तार को फ्रैक्चर साइट के माध्यम से डिस्टल टुकड़े की मज्जा नहर में पास करें। फिर, बैटरी संचालित पावर ड्रिल का उपयोग करके फीमर के बाहर के छोर के माध्यम से के-तार को ड्रिल करें।
    नोट: उपयोग से पहले शराब के साथ पावर ड्रिल की सतह को कीटाणुरहित करें। के-वायर ठीक होने के बाद दस्ताने बदलें।
  10. फ्रैक्चर को कम करने के बाद, के-तार को डिस्टल छोर से समीपस्थ टुकड़े की नहर में आगे बढ़ाएं जब तक कि यह ट्रोचेंटेरिक क्षेत्र में खरीद प्राप्त न कर ले। तार कटर का उपयोग करके त्वचा के माध्यम से फैले के-तार के बाहरी हिस्से को काट लें।
  11. प्लियर्स का उपयोग करके के-तार की नोक को लगभग 90 ° तक झुकाएं और पिन-साइट ड्रेसिंग के लिए बीटाडीन में भिगोई गई धुंध पट्टी का उपयोग करें। के-वायर फ्रैक्चर को कम स्थिति में रखने के लिए एक इंट्रामेडुलरी स्प्लिंट के रूप में कार्य करता है।
  12. 3-0 नायलॉन सीवन का उपयोग करके त्वचा को बंद करने से पहले पूर्ण हेमोस्टेसिस सुनिश्चित करें। किसी भी रक्तस्राव को रोकने के लिए बाँझ धुंध या धमनी बल का उपयोग करके रक्तस्राव क्षेत्र पर दबाव डालें।
  13. घाव को बीटाडाइन से साफ करें, और इसे बाँझ धुंध और माइक्रोपोर चिपकने वाले टेप के साथ कवर करें।

3. पोस्टऑपरेटिव देखभाल

  1. चूहों को उनके पिंजरों में वापस करें, सामान्य अनुकरण की अनुमति दें, और उन्हें बलिदान करने तक एक मानक अर्ध-सिंथेटिक आहार देना जारी रखें, साथ ही एंटीबायोटिक्स (इंजेक्शन सेफ्यूरोक्सीम 100 मिलीग्राम / किग्रा) और एनाल्जेसिक (इंजेक्शन ट्रामाडोल 25 मिलीग्राम / किलोग्राम / दिन दो विभाजित खुराक में) प्रक्रिया के बाद 5 दिनों के लिए इंट्रापेरिटोनियल रूप से।
    नोट: चूहों को किसी विशेष दवा का परीक्षण करने के लिए उपचार और नियंत्रण समूहों में विभाजित किया जा सकता है। यदि दवा पानी में घुलनशील है, तो इसे गैवेज के माध्यम से मौखिक रूप से दिया जा सकता है। उपयोग की जाने वाली दवा की खुराक की गणना करने के लिए व्यक्तिगत जानवरों के वजन को नोट किया जा सकता है। पशु समूहों की एकरूपता सुनिश्चित करने के लिए समावेश और बहिष्करण मानदंडों का पालन किया जा सकता है।
  2. जानवरों को प्रीऑपरेटिव अवधि के समान परिस्थितियों में अलग-अलग पिंजरों में रखें। पोस्टऑपरेटिव दर्द, घाव संक्रमण, सीवन के फिसलने, या किसी भी पेट की सूजन या असुविधा के किसी भी संकेत को देखने के लिए हर दिन सर्जिकल साइट का निरीक्षण करें।
  3. साप्ताहिक रूप से एक बार खंडित साइट के एक्स-रे द्वारा हड्डी के उपचार का आकलन करें।

4. रेडियोलॉजिकल प्रक्रिया

  1. एक्स-रे से पहले, चूहों को केटामाइन (50 मिलीग्राम / किग्रा शरीर का वजन) और ज़ाइलाज़िन (5 मिलीग्राम / किग्रा शरीर का वजन) के इंट्रापरिटोनियल इंजेक्शन के साथ एनेस्थेटाइज करें।
  2. चूहे के कूल्हे के जोड़ को एक लचीली और अपहरण की स्थिति में रखें, जबकि घुटने के जोड़ को निम्नलिखित एक्सपोज़र सेटिंग्स के साथ फ्रैक्चर वाले अंग का एक्स-रे लेने के लिए अर्ध-फ्लेक्स रखा जाता है: रेफ केवीपी ≈ 62; रेफ एमएएस = 6.4; और स्वचालित एक्सपोजर सेटिंग्स (रेफरी एमए = 160)।
    नोट: एक्स-रे बेसलाइन (सर्जरी के 1 दिन बाद) पर लिए गए थे और फिर बलिदान या 5 सप्ताह तक साप्ताहिक रूप से एक बार लिया गया था।

5. पशु इच्छामृत्यु और कैलस पुनर्प्राप्ति

  1. कार्बन डाइऑक्साइड के ओवरडोज से चूहों का बलिदान करें (1 मिनट के लिए 7-8 एल / मिनट की प्रवाह दर पर 100% सीओ2 का प्रबंधन करें, इसके बाद 4-5 मिनट की प्रतीक्षा अवधि), क्रमशः नरम और हार्ड ब्रिजिंग कॉलस की रेडियोलॉजिकल उपस्थिति के आधार पर पहले से निर्धारित दो समय बिंदुओं पर।
  2. फीमर के समानांतर त्वचा को इंजेक्ट करें और कैलस ऊतक को नुकसान से बचने के लिए ऊपरी मांसपेशियों को सावधानी से अलग करें।
  3. हथौड़ा और छेनी का उपयोग करके कूल्हे के जोड़ और कैलस ऊतक के बीच की हड्डी को फ्रैक्चर करें। इसी तरह, कैलस और घुटने के जोड़ के बीच की हड्डी को फ्रैक्चर। रक्त के थक्कों और नरम ऊतक को हटाने के लिए के-तार को हटा दें और हड्डी के टुकड़े को खारे में साफ करें।
  4. कैलस को तुरंत 10% तटस्थ बफर्ड फॉर्मेलिन (20 एमएल प्रति नमूना) के साथ एक लेबल कंटेनर में स्थानांतरित करें और इसे कमरे के तापमान (आरटी) पर 3 दिनों के लिए रखें।

6. हड्डी और कैलस ऊतक का डीकैल्सीफिकेशन

  1. फॉर्मेलिन से कैलस ऊतक लें और हड्डी के ऊतकों के डिकैल्सीफिकेशन के लिए इसे 20% ईटीडीए समाधान, पीएच 7 में आरटी पर रखें।
  2. लगभग 3 सप्ताह के लिए हर 2 दिनों में ताजा ईडीटीए समाधान बदलें, और कैलस ऊतक को परेशान किए बिना सुई के साथ हड्डी को घुमाकर हड्डी के डिकैल्सीफिकेशन की जांच करें। इष्टतम डिकैल्सीफिकेशन को हड्डी के ऊतकों की सामान्य किरकिरा संवेदना के नुकसान से दर्शाया जाता है।
  3. पूर्ण डिकैल्सीफिकेशन के बाद, कैलस के खंड को काट लें और कैलस ऊतक के पैराफिन ब्लॉक तैयार करें। हिस्टोपैथोलॉजिकल 16 और किसी भी अन्य तुलनात्मक विश्लेषण17 के लिए कैलस ऊतक के 4 μm मोटे खंडों कोकाटें।

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Representative Results

यह अध्ययन विस्टार अल्बिनो चूहों में एक फीमर ओस्टियोटॉमी मॉडल विकसित करने के लिए किया गया था। इस मॉडल का उपयोग हड्डी के उपचार का मूल्यांकन करने के लिए किया जा सकता है, साथ ही हड्डी के उपचार में एक आशाजनक ऑस्टियोनाबोलिक दवा के ओस्टोजेनिक प्रभाव का भी मूल्यांकन किया जा सकता है। मानक सर्जिकल सावधानियों और प्रोटोकॉल का पालन किया गया। प्रक्रिया के लिए बाँझ गाउन, ड्रेप्स और सर्जिकल उपकरणों का उपयोग किया गया था (चित्रा 1)। उपकरण (तालिका 1) को सर्जरी से 48 घंटे पहले निष्फल किया गया था। प्रोटोकॉल के अनुसार एनेस्थेटिक, एनाल्जेसिक और एंटीबायोटिक दवाओं का उपयोग किया गया था ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि जानवरों को हर समय दर्द और संक्रमण मुक्त रखा जाए। रक्त (0.5 एमएल) को बेसलाइन विश्लेषण और फ्रैक्चर उपचार के रूप में विभिन्न मापदंडों के अनुक्रमिक कालानुक्रमिक तुलनात्मक अनुवर्ती के लिए प्रत्येक चूहे की पूंछ की नस से एकत्र किया जा सकता है। बाल हटाने वाली क्रीम (चित्रा 2) का उपयोग करके बालों को फ्लैंक क्षेत्र से घुटने के क्षेत्र में हटा दिया गया था। ओस्टियोटॉमी प्रक्रिया को पूरा करने में लगभग 10 मिनट लगे (पहले चीरा से सीवन तक)। सड़न रोकनेवाली सावधानियों का पालन करने पर संक्रमण और मृत्यु दर नगण्य थी। स्थानीय संज्ञाहरण (लिग्नोकेन) के बाद एक चीरा लगाया गया था, और फीमर की शाफ्ट को वास्टस लेटरलिस के तंतुओं को वापस लेने के बाद उजागर किया गया था (चित्रा 3)। छेनी न फिसलने के लिए सर्जिकल ब्लेड का उपयोग करके हड्डी में एक इंडेंटेशन (नाली) बनाया गया था। बाँझ हार्ड सपोर्ट (संगमरमर ब्लॉक) का उपयोग हड्डी का समर्थन करने के लिए किया गया था, जबकि इसे एक साफ ब्रेक सुनिश्चित करने के लिए फ्रैक्चर किया गया था (चित्रा 1)। छेनी और हथौड़ा का उपयोग करके फीमर के शाफ्ट के मध्य तिहाई में एक पूर्ण अनुप्रस्थ फ्रैक्चर को प्रेरित किया गया था (चित्र 4)।

फ्रैक्चर को आंतरिक रूप से बाँझ के-तार (1.0 मिमी) का उपयोग करके ठीक किया गया था। के-तार को फ्रैक्चर साइट के माध्यम से डिस्टल टुकड़े की मज्जा नहर में पारित किया गया था। के-तार को तब फीमर के बाहर के छोर के माध्यम से ड्रिल किया गया था। फ्रैक्चर कम हो गया था, और फिर के-तार को डिस्टल छोर से समीपस्थ टुकड़े की नहर में उन्नत किया गया था जब तक कि इसे ट्रोचेंटेरिक क्षेत्र में खरीद नहीं मिली। के-तार का बाहरी हिस्सा जो त्वचा के माध्यम से फैला हुआ था, उसे काट दिया गया था। के-वायर ने फ्रैक्चर को कम स्थिति में रखने के लिए एक इंट्रामेडुलरी स्प्लिंट के रूप में काम किया (चित्रा 5)।

रेडियोलॉजिस्ट द्वारा मूल्यांकन के अनुसार, कैलस की उपस्थिति (फ्रैक्चर उपचार की शुरुआत) और ब्रिजिंग कैलस की उपस्थिति (पहली बार जब फ्रैक्चर गैप ठीक हो गया था) का मूल्यांकन करने के लिए सर्जरी के 1 दिन बाद और साप्ताहिक रूप से फ्रैक्चर क्षेत्र का एक्स-रे लिया गया था ( चित्रा 6)। फ्रैक्चर उपचार के तुलनात्मक मूल्यांकन के लिए दो रेडियोलॉजिकल समय बिंदु (नरम) कैलस की उपस्थिति (विज़ुअलाइज़ेशन) और ब्रिजिंग (हार्ड) कैलस की उपस्थिति थे।

बलिदान के बाद, फीमर को फॉर्मलिन में सावधानीपूर्वक संरक्षित किया गया था, इसके बाद हड्डी डिकैल्सीफिकेशन के लिए प्रोटोकॉल (चित्रा 7)। बलिदान के दौरान के-तार को हटा दिया गया था, इस बात का ध्यान रखते हुए कि कैलस को परेशान न किया जाए। पूर्ण डीकैल्सीफिकेशन के बाद, हड्डी को खंडों में काट दिया गया और आवश्यकतानुसार सेक्शनिंग (4 μm मोटी अनुभागों) के लिए पैराफिन ब्लॉकों में संरक्षित किया गया। फ्रैक्चर साइट और कैलस के एक हेमेटॉक्सिलिन-और-ईओसिन-दाग वाले खंड ने 5 सप्ताह के अंत में उपास्थि और नई हड्डी के गठन की पुष्टि की (चित्रा 8)।

Figure 1
चित्रा 1: ऑपरेटिंग टेबल पर सर्जिकल ड्रेप पर रखे बाँझ सर्जिकल उपकरण। सर्जन बाँझ उपकरणों के साथ बाँझ वातावरण में शल्य चिकित्सा प्रक्रिया शुरू करने के लिए तैयार है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 2
चित्रा 2: एनेस्थेटाइज्ड चूहा ऑपरेटिंग टेबल पर रखा गया। चूहे को एनेस्थीसिया देने और चीरा स्थल के आसपास के बालों को हटाने के बाद, इसे बाएं पार्श्व स्थिति में ऑपरेटिंग टेबल पर रखा जाता है, जिससे ओस्टियोटॉमी के लिए दाहिने पैर को उजागर किया जाता है। एक अन्य सर्जिकल ड्रेप का उपयोग दाहिने पैर को उस ड्रेप में एक छेद के माध्यम से पारित करने के लिए किया जाता है ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि केवल पैर उजागर हो, जिससे घाव के संक्रमण को कम किया जा सके। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 3
चित्रा 3: सर्जिकल प्रक्रिया: चूहे की फीमर के शाफ्ट का जोखिम। ओस्टियोटॉमी के दौरान, वास्तु पार्श्विक के उजागर होने के बाद, इसे फीमर के शाफ्ट को उजागर करने के लिए मांसपेशियों के तंतुओं के अनुरूप विभाजित किया जाता है। पेरीओस्टेल लिफ्ट का उपयोग करके हड्डी को संलग्न मांसपेशियों से मुक्त किया जाता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 4
चित्रा 4: छेनी और हथौड़ा का उपयोग करके फीमर के शाफ्ट के मध्य तिहाई में एक पूर्ण अनुप्रस्थ ऑस्टियोटॉमी बनाना। हथौड़े से छेनी को धीरे से टैप करके फीमर के शाफ्ट के मध्य एक तिहाई हिस्से में एक पूर्ण अनुप्रस्थ फ्रैक्चर बनाया जाता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 5
चित्रा 5: के-वायर फ्रैक्चर को कम स्थिति में रखने के लिए एक इंट्रामेडुलरी स्प्लिंट के रूप में कार्य करता है। के-तार को फ्रैक्चर साइट के माध्यम से डिस्टल टुकड़े की मज्जा नहर में पारित किया जाता है। के-तार को फिर फीमर के बाहर के छोर के माध्यम से ड्रिल किया जाता है। फ्रैक्चर कम हो जाता है और फिर के-तार को डिस्टल छोर से समीपस्थ टुकड़े की नहर में उन्नत किया जाता है जब तक कि इसे ट्रोचेंटेरिक क्षेत्र में खरीद नहीं मिल जाती। यह बैटरी संचालित पावर ड्रिल का उपयोग करके किया जाता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 6
चित्र 6: चूहे की फीमर का एक्स-रे, जिसमें के-वायर होता है। (A) फ्रैक्चर को प्रेरित करने से पहले और (B) सर्जरी के 1 दिन बाद। रेडियोलॉजिकल रूप से कैलस गठन का आकलन करने के लिए संचालित साइट के अनुक्रमिक साप्ताहिक एक्स-रे लेकर फ्रैक्चर उपचार की रेडियोलॉजिकल रूप से निगरानी की जाती है। फ्रैक्चर इंट्रामेडुलरी के-तार के साथ कम और स्थिर रहता है। पहले और बाद के प्रतिनिधि डेटा एक ही जानवर से नहीं हैं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 7
चित्र 7: कैलस के साथ हड्डी (इष्टतम डिकैल्सीफिकेशन के बाद) पूर्व-निर्धारित समय बिंदु पर जानवर की बलि देने के बाद प्राप्त की जाती है। (बी) कैलस का एक खंड। जानवर की बलि देने के बाद, वर्णित पद्धति का उपयोग करके फ्रैक्चर साइट के क्षेत्र को प्राप्त, संरक्षित और डिकैल्सीफाइड किया जाता है। किसी भी अन्य तकनीक (सेंटीमीटर में संदर्भ पैमाने) द्वारा मूल्यांकन करने से पहले इष्टतम डिकैल्सीफिकेशन सुनिश्चित करने के लिए कैलस का रुक-रुक कर मूल्यांकन किया जाता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 8
चित्र 8: फ्रैक्चर साइट के हेमेटॉक्सिलिन-और-ईओसिन-दाग वाले खंड में उपास्थि और नई हड्डी के गठन के साथ एक कठोर कैलस दिखाया गया है। (ए) कम आवर्धन; (बी) उच्च आवर्धन। फ्रैक्चर साइट के हेमेटॉक्सिलिन-और-ईओसिन-दाग वाले खंड उपास्थि (काले तीर) और नई हड्डी (पीले तीर) के गठन के साथ एक कठोर कैलस दिखाते हैं (ए: 40 एक्स; बी: 100x)। नीला तीर हड्डी के फ्रैक्चर छोर को दर्शाता है, और लाल तीर दूसरे कॉर्टिकल क्षेत्र को दर्शाता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

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Discussion

यह विधि स्पष्ट रूप से विस्टार अल्बिनो चूहों में फ्रैक्चर ओस्टियोटॉमी मॉडल विकसित करने के लिए आवश्यक विवरणों का वर्णन करती है। इस मॉडल का उपयोग फ्रैक्चर उपचार में एक आशाजनक ऑस्टियोनाबोलिक दवा के ओस्टोजेनिक प्रभाव का मूल्यांकन करने के लिए किया जा सकता है, साथ ही हड्डी के उपचार की पेचीदगियों को भी समझा जा सकता है। इस विधि की मुख्य विशेषता यह है कि यह सरल है और बहुत अधिक समय या परिष्कृत उपकरणों की आवश्यकता नहीं है। इस विधि में, वयस्क नर विस्टार अल्बिनो चूहों को प्रयोगों के लिए कृंतक मॉडल के रूप में चुना गया था। सेक्स हार्मोन से संबंधित हड्डी के उपचार पर किसी भी भ्रामक कारक को हटाने के लिए समान लिंग का चयन किया गया था।

इस अध्ययन ने ओपन ओस्टियोटॉमी की प्रक्रिया का पालन किया, जो अन्य समूहों के साथ-साथ अन्य छोटे पशु मॉडल 11,18,19 के समान है। अन्य हड्डी चिकित्सा मॉडल पर इस विधि में पालन किए गए ओपन ओस्टियोटॉमी का लाभ यह है कि चोट-प्रेरित (पूर्ण कॉर्टिकल हड्डी फ्रैक्चर) एक नियमित लंबी हड्डी फ्रैक्चर जैसा दिखता है, और इस विधि में फ्रैक्चर चिकित्सा एक नियमित फ्रैक्चर के समान होती है, जहां ड्रिल छेद हड्डी की चोट की तुलना में कैलस गठन द्वारा द्वितीयक हड्डी चिकित्सा (एनकॉन्ड्रल ओसिफिकेशन) होती है, जहां प्राथमिक हड्डी चिकित्सा (इंट्रामेम्ब्रेनस ऑसिफिकेशन) 20 है। ओपन ओस्टियोटॉमी की विधि बंद ओस्टियोटॉमी या तीन-बिंदु दबाव-उत्प्रेरण विधि से भी बेहतर है, जहां फ्रैक्चर लाइन में हड्डी टूटने और व्यापक असमानता की संभावना है, इस प्रकार फ्रैक्चर उपचारमें अंतर होता है। ओपन ओस्टियोटॉमी बंद ऑस्टियोटॉमी की तुलना में घाव के संक्रमण की संभावना को बढ़ाता है, लेकिन, अन्य अध्ययनों के समान, हमने देखा कि उचित सावधानियों के साथ, घावसंक्रमण नगण्य था। इस पद्धति में यह भी देखा गया कि छेनी और हथौड़े से फ्रैक्चर करने से पहले ब्लेड से हड्डी पर एक नाली (इंडेंटेशन) बनाने से एक समान फ्रैक्चर लाइन बनती है और हड्डी पर छेनी फिसलने से बचा जाता है। इस विधि में हमने एक और संशोधन पेश किया था जो हड्डी के नीचे एक कठोर, बाँझ ब्लॉक को फ्रैक्चर करने के लिए रख रहा था। इसने न केवल फ्रैक्चर बनाते समय एक काउंटरफोर्स प्रदान किया, बल्कि टूटने, कुचलने या अनियमित फ्रैक्चर लाइन से बचने में भी मदद की। यह आमतौर पर नीचे की मांसपेशियों को कोई महत्वपूर्ण चोट नहीं पहुंचाता है।

हमारे अध्ययन ने पूर्ण प्रयोग शुरू करने से पहले पहली बार बिंदु के रूप में कैलस की रेडियोलॉजिकल उपस्थिति और जानवरों में दूसरे समय बिंदु के रूप में ब्रिजिंग (हार्ड) कैलस की उपस्थिति के आधार पर बलिदान के समय बिंदुओं को निर्धारित करने के लिए एक्स-रे का उपयोग किया। जानवरों के पूरे तुलनात्मक समूह का बलिदान किया जाना चाहिए जब कोई भी उपचार या नियंत्रण समूह ओस्टियोब्लास्टिक और ओस्टियोक्लास्टिक मार्करों के इम्यूनोहिस्टोकेमिकल विश्लेषण का उपयोग करके अपने कॉलस की तुलना करने के लिए एक विशेष समय बिंदु तक पहुंचता है। यह विभिन्न उपचार और नियंत्रण समूहों के बीच निष्पक्ष तुलना सुनिश्चित करेगा। चूहों की खंडित साइट का एक्स-रे साप्ताहिक अंतराल पर किया जाना चाहिए, और रक्त के नमूने (पूंछ की नस) 2 साप्ताहिक अंतराल पर लिया जाना चाहिए जब तक कि वे बलिदान के संबंधित समय बिंदुओं तक नहीं पहुंच जाते। रेडियोलॉजिस्ट (जो नियंत्रण और उपचार समूहों में अंधा था) द्वारा कैलस गठन का मूल्यांकन करने के लिए साप्ताहिक एक्स-रे (संज्ञाहरण के तहत) किए गए थे। एक्स-रे ने हड्डी के उपचार के जैविक मापदंडों को प्रमाणित और पुष्टि करने में भी मदद की।

इस विधि में फ्रैक्चर को कम स्थिति में स्थिर रखने के लिए इंट्रामेडुलरी स्प्लिंट के रूप में के-तार का अनुप्रयोग शामिल है। हालांकि, इंट्रामेडुलरी पिन निर्धारण फ्रैक्चर को पूर्ण स्थिरता प्रदान नहीं करता है, जैसा कि प्लेटिंग और बाहरी फिक्सेटर करते हैं, और कई बार घाव संक्रमण, पिन माइग्रेशन, ऊरु शाफ्ट कॉर्टेक्स के छिद्र आदि जैसी जटिलताओं से जुड़ा हो सकता है। हमारे अध्ययन से यह भी पता चलता है कि पेरीओस्टेम में और उसके आसपास लिग्नोकेन को इंजेक्ट करना बेहतर है, जो बेहद दर्द-संवेदनशील है। यह ऑस्टियोटॉमी के दौरान गंभीर दर्द और न्यूरोजेनिक सदमे की संभावना को रोकता है। यह भी देखा गया कि इंट्रापरिटोनियल इंजेक्शन की मात्रा कम रखने से चूहों में बाद के श्वसन संकट को कम करने में मदद मिली। किसी भी दर्द या संक्रमण को रोकने के लिए सर्जरी के बाद 5 दिनों के लिए एनाल्जेसिक और एंटीबायोटिक्स जारी रखे गए थे। इस अध्ययन के लिए, फ्रैक्चर को प्रेरित करने के लिए फीमर को चुना गया था क्योंकि यह पहुंचना आसान था, सफाई से तोड़ना आसान था, और इसकी सीधी समोच्च के कारण, जो के-वायर सम्मिलन के लिए आसान है। सावधानी बरतनी चाहिए जब के-तार को फीमर के समीपस्थ टुकड़े में उन्नत किया जाता है, क्योंकि ऊरु धमनी को घायल करके रक्तस्राव का खतरा होता है। यह देखा गया कि चूहे के-तार को बाहर निकालते हैं यदि बहुत अधिक अवशिष्ट तार त्वचा से बाहर निकल जाता है।

हड्डी के उपचार के परिणाम के पैरामीटर जानवरों के रक्त और कैलस (विभिन्न समूहों और विभिन्न समय बिंदुओं) में ओस्टियोब्लास्टिक और ओस्टियोक्लास्टिक मार्कर हैं। ओस्टियोब्लास्टिक मार्करों के लिए, ओस्टियोकैल्सिन, कोल 1 ए 1, रैंकएल, पी 1 एनपी, और हड्डी-विशिष्ट क्षारीय फॉस्फेट का चयन किया जा सकता है, जबकि सीटीएक्स और रैंक का मूल्यांकन ओस्टियोक्लास्टिक गतिविधि का मूल्यांकन करने के लिए किया जा सकता है। इनमें से कुछ मापदंडों का सीरम में मूल्यांकन किया जा सकता है, जबकि अन्य का मूल्यांकन कैलस ऊतक में इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री द्वारा किया जा सकता है। ये पैरामीटर ओस्टियोब्लास्टिक और ओस्टियोक्लास्टिक गतिविधि का एक साथ मूल्यांकन करके हड्डी रीमॉडेलिंग का समग्र दृष्टिकोण देते हैं।

इस अध्ययन की सीमा यह है कि यह कैलस की तन्यता शक्ति का मूल्यांकन नहीं करता है। आदर्श रूप से, बायोमेकेनिकल अध्ययन डेटा में मूल्य जोड़ते हैं। डिकैल्सीफिकेशन के लिए कैलस और आस-पास के हड्डी के ऊतकों को संसाधित करते समय सावधानी बरतने की आवश्यकता होती है, क्योंकि अपूर्ण डिकैल्सीफिकेशन इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री में इष्टतम परिणाम नहीं देगा।

कृंतक मॉडल का उपयोग करके फ्रैक्चर उपचार का आकलन करने के लिए यह प्रोटोकॉल उन सभी समूहों के लिए उपयोगी होगा जो ओस्टियोनाबोलिक गतिविधि के साथ आशाजनक दवाओं का मूल्यांकन करने की कोशिश कर रहे हैं। यह ओस्टियोब्लास्टिक और ओस्टियोक्लास्टिक गतिविधि और हड्डी रीमॉडेलिंग का मूल्यांकन करते हुए कृंतक मॉडल में हड्डी और फ्रैक्चर उपचार का सटीक आकलन करने के लिए एक सरल मॉडल है, जो उपयोगी यांत्रिक अंतर्दृष्टि देता है। यदि जानवरों की संख्या के चारों ओर घूमने वाले संसाधन और रसद की अनुमति है, तो जैविक संकेतकों को फ्रैक्चर उपचार के रेडियोलॉजिकल मूल्यांकन द्वारा भी प्रबलित किया जा सकता है, साथ ही साथ तन्यता शक्ति की तुलना की जा सकती है, जो ठीक हड्डी के यांत्रिक कद का आकलन करती है। अध्ययन जो कार्रवाई के तंत्र को स्पष्ट करते हैं, उन्हें विशुद्ध रूप से अवलोकन संबंधी अध्ययनों के लिए प्राथमिकता दी जाती है।

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Disclosures

लेखकों में से किसी के पास हितों का कोई टकराव या कोई अन्य वित्तीय प्रकटीकरण नहीं है।

Acknowledgments

लेखक केंद्रीय होम्योपैथी अनुसंधान परिषद (सीसीआरएच), आयुष मंत्रालय, भारत सरकार को अनुसंधान वित्त पोषण के लिए धन्यवाद देना चाहते हैं। लेखक पशु प्रयोगों के साथ उनकी मदद और समर्थन के लिए केंद्रीय पशु सुविधा, एम्स, नई दिल्ली और फोटोग्राफी और वीडियोग्राफी में उनकी मदद और समर्थन के लिए सीएमईटी, एम्स, नई दिल्ली के आभारी हैं।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Alcohol Raman & Weil Pvt. Ltd, Mumbai, Maharashtra, India MFG/MD/2019/000189 Sterillium hand disinfectant
Artery forceps  Nebula surgical, Gujarat, India G.105.05S 5", straight
Bard-Parker handle  Nebula surgical, Gujarat, India G.103.03 Size number 3
Betadine solution Win-medicare New Delhi, India UP14250000001 10% w/v Povidone iodine solution
Cat's-paw skin retractor  Nebula surgical, Gujarat, India 908.S Small
EDTA Sisco research laboratories Pvt. Ltd, Maharashtra, India 43272 Disodium salt
Eosin Sigma Aldrich, Merck Life Sciences Pvt Ltd, Mumbai, Maharashtra, India 115935 For preparing the staining solution 
Forceps (plain) Nebula surgical, Gujarat, India 115.06 6", plain
Forceps (toothed) Nebula surgical, Gujarat, India 117.06 6", toothed
Formaldehyde Sisco research laboratories Pvt. Ltd, Maharashtra, India 84439 For preparing the neutral buffered formalin 
Haematoxylin Sigma Aldrich, Merck Life Sciences Pvt Ltd, Mumbai, Maharashtra, India 104302 For preparing the staining solution 
Hammer Nebula surgical, Gujarat, India 401.M
Injection Cefuroxime Akumentis Healthcare Ltd, Thane, Maharashtra, India 48/UA/SC/P-2013 Cefuroxime sodium IP, 1.5 g/vial 
Injection Ketamine Baxter Pharmaceuticals India Private Limited, Gujarat, India G/28-B/6 Ketamine hydrochloride IP, 50 mg/mL 
Injection Xylazine Indian Immunologicals Limited, Hyderabad, Telangana, India 28/RR/AP/2009/F/G Xylazine hydrochloride USP, 20 mg/mL
Injection Lignocaine Jackson laboratories Pvt Limited, Punjab, India  1308-B 2% Lignocaine Hydrochloride IP, 21.3 mg/mL
Injection Tramadol  Intas Pharmaceuticals Limited, Ahmedabad, Gujarat, India MB/07/500 Tramadol hydrochloride IP, 50 mg/mL
K-wire  Nebula surgical, Gujarat, India 166 (1mm) 12", double ended
Mechanical drill for inserting K-wire ‎Bosch, Germany  06019F70K4 GSR 120-LI Professional
Metzenbaum cutting scissors  Nebula surgical, Gujarat, India G.121.06S 6", straight
Needle holder Nebula surgical, Gujarat, India G.108.06 6", straight
Ophthalmic ointment  GlaxoSmithKline Pharmaceutical Limited, Bengaluru, Karnataka, India KTK/28a/467/2001 Neomycin, Polymixin B sulfate and Bacitracin zinc ophthalmic ointment USP
Osteotome (chisel) Nebula surgical, Gujarat, India 1001.S.10 10 mm, straight
Periosteal elevator  Nebula surgical, Gujarat, India 918.10.S 10 mm, straight
Pliers cum wire cutter Nebula surgical, Gujarat, India 604.65
Reynold’s scissors Nebula surgical, Gujarat, India G.110.06S 6", straight
Standard semi-synthetic diet  Ashirvad Industries, Chandigarh, India No catalog number available Detailed composition provided in materials used
Steel cup for keeping betadine for application Local purchase No catalog number available
Steel tray with lid for autoclaving instruments Local purchase No catalog number available
Sterile gauze Ideal Healthcare Industries, Delhi, India  E(0047)/14/MNB/7951 Sterile, 5cmx5cm, 12 ply
Sterile marble block for support Local purchase No catalog number available Locally fabricated; autoclavable
Syringe and needle (1 mL)  Becton Dickinson India Pvt. Ltd., Haryana, India REF 303060 1 mL sterile Syringe with 26 G x 1/2 (0.45 mm x 13 mm) needle
Syringe and needle (2 mL)  Becton Dickinson India Pvt. Ltd., Haryana, India REF 307749 2 mL sterile syringe with 24 G x 1'' (0.55 mm x 25 mm) needle
Syringe and needle (10 mL)  Hindustan Syringes & Medical Devices Ltd. Faridabad, India  334-B(H) 10 mL sterile syringe with 21 G x1.5" (0.80 mm x 38 mm) needle
Surgical blades (size no.15) Paramount Surgimed Ltd, New Delhi, India for Medline Industries Inc, IL, USA REF MDS15115E Sterile, Single use
Surgical blades (size no.24) Paramount Surgimed Ltd, New Delhi, India for Medline Industries Inc, IL, USA REF MDS15124E Sterile, Single use
Sutures Healthium Medtech Pvt Ltd, Bangalore, Karnataka, India SN 3318 4-0, 16 mm, 3/8 circle cutting needle, monofilament polyamide suture 
Wax block in aluminium tray  Locally fabricated No catalog number available 30 cm x 30 cm x 4 cm aluminium tray containing wax (to prevent animal from slipping)
X-ray machine Philips India Ltd, Gurugram, Haryana SN19861013 Model: Philips Digital Diagnost R 4.2 

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References

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चिकित्सा अंक 186 अस्थि चिकित्सा फ्रैक्चर कैलस कृंतक मॉडल ओपन ओस्टियोटॉमी
विस्टार अल्बिनो चूहों में एक फीमर ओस्टियोटॉमी मॉडल विकसित करने के लिए प्रोटोकॉल
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Aryal, A., Pagaku, P. K., Dey, D.,… More

Aryal, A., Pagaku, P. K., Dey, D., Tyagi, S., Shrivastava, V., Bhattacharya, A., Rani, S., Nayak, D., Khurana, A., Khanna, P., Goyal, A., Mridha, A. R., Garg, B., Sen, S. Protocol for Developing a Femur Osteotomy Model in Wistar Albino Rats. J. Vis. Exp. (186), e63712, doi:10.3791/63712 (2022).

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