Summary
هنا ، نقدم بروتوكولا لإزالة التعصيب الودي الكلوي (RDN) في الفئران المصابة بارتفاع ضغط الدم الناجم عن تسريب الأنجيوتنسين الثاني. الإجراء قابل للتكرار ومريح ويسمح بدراسة الآليات التنظيمية ل RDN على ارتفاع ضغط الدم وتضخم القلب.
Abstract
تم إثبات فوائد إزالة التعصيب الودي الكلوي (RDN) على ضغط الدم في عدد كبير من التجارب السريرية في السنوات الأخيرة. ومع ذلك ، فإن الآلية التنظيمية ل RDN على ارتفاع ضغط الدم لا تزال بعيدة المنال. وبالتالي ، من الضروري إنشاء نموذج RDN أبسط في الفئران. في هذه الدراسة ، تم زرع مضخات صغيرة تناضحية مملوءة بالأنجيوتنسين II في فئران C57BL / 6 عمرها 14 أسبوعا. بعد أسبوع واحد من زرع المضخة التناضحية المصغرة ، تم إجراء RDN المعدل على الشرايين الكلوية الثنائية للفئران باستخدام الفينول. أعطيت الفئران المتطابقة مع العمر والجنس محلول ملحي وعملت كمجموعة صورية. تم قياس ضغط الدم عند خط الأساس وكل أسبوع بعد ذلك لمدة 21 يوما. بعد ذلك ، تم جمع الشريان الكلوي والشريان الأورطي البطني والقلب للفحص النسيجي باستخدام تلطيخ H&E و Masson. في هذه الدراسة ، نقدم نموذج RDN بسيطا وعمليا وقابلا للتكرار وموحدا ، والذي يمكنه التحكم في ارتفاع ضغط الدم وتخفيف تضخم القلب. يمكن لهذه التقنية أن تزيل الأعصاب الكلوية الطرفية دون تلف الشريان الكلوي. بالمقارنة مع النماذج السابقة ، يسهل RDN المعدل دراسة علم الأمراض والفيزيولوجيا المرضية لارتفاع ضغط الدم.
Introduction
ارتفاع ضغط الدم هو أحد أمراض القلب والأوعية الدموية المزمنة الرئيسية في جميع أنحاء العالم. يمكن أن يؤدي ارتفاع ضغط الدم غير المنضبط إلى تلف الأعضاء المستهدفة والمساهمة في قصور القلب والسكتة الدماغية وأمراض الكلى المزمنة1،2،3. ارتفع معدل انتشار ارتفاع ضغط الدم من 20٪ إلى 31٪ بين عامي 1991 و 2007 في الصين. يمكن أن يتضاعف عدد البالغين المصابين بارتفاع ضغط الدم في الصين بعد مراجعة حديثة لمعايير تشخيص ارتفاع ضغط الدم (130/80 مم زئبق)4. يمكن السيطرة على ارتفاع ضغط الدم عن طريق الدواء ، ومع ذلك ، فإن ما يقرب من 20 ٪ من المرضى غير قادرين على السيطرة على ارتفاع ضغط الدم ، حتى عند تلقي ما لا يقل عن ثلاثة أدوية خافضة للضغط (بما في ذلك مدر للبول واحد) بأقصى جرعة يمكن تحملها ، مما قد يؤدي إلى تطوير ارتفاع ضغط الدم المقاوم للأدوية5.
ثبت أن إزالة التعصيب الودي الكلوي (RDN) هو علاج محتمل لارتفاع ضغط الدم. في عام 2009 ، أبلغ كروم وزملاؤه عن علاج ارتفاع ضغط الدم المقاوم باستخدام RDN لأول مرة. وقد وجد أن استئصال الشريان الكلوي عن طريق الجلد يمكن أن يسبب بشكل فعال انخفاض ضغط الدم المستمر في المرضى6. ومع ذلك ، فإن فشل تجربة ارتفاع ضغط الدم التماثلي 3 (HTN-3) أعاق تطبيق RDN7 ، مما حول RDN إلى علاج مثير للجدل. ومع ذلك ، لم يتم استبعاد احتمال RDN بعد. أكدت التجارب السريرية الحديثة ، بما في ذلك RADIANCE-HTN SOLO ، SPYRAL HTN-OFF MED / ON MED ، و SPYRAL HTN-OFF MED Pivotal فعالية RDN على ارتفاع ضغط الدم8،9،10،11،12. وبالتالي ، يجب إجراء بحث ميكانيكي أكثر تفصيلا لاستكشاف تأثيرات RDN.
الغرض العام من هذه الدراسة هو توضيح كيف يمكن تعديل RDN في الفئران لإنتاج جراحة أبسط وأكثر استقرارا. درس عدد كبير من التجارب طرقا مختلفة ل RDN ، مثل الاستئصال بالتبريد داخل الأوعية ، والموجات فوق الصوتية خارج الجسم والتطبيق المحلي لمادة كيميائية أو سم عصبي في نماذج حيوانية مختلفة13،14،15،16،17. نموذج RDN الذي تم إنشاؤه باستخدام الاجتثاث الكيميائي مع الفينول هو نموذج تجريبي راسخ لدراسة التسبب في التنشيط الودي على ارتفاع ضغط الدم. يتم إنشاء هذا النموذج عن طريق التآكل الكيميائي للأعصاب الودية الكلوية مع محلول الفينول / الإيثانول بنسبة 10٪ باستخدام قطعة قطن18. من ناحية ، من المحتمل أن يمنع RDN التقليدي النشاط الودي الكلوي ، مما يقلل من إفراز الرينين وإعادة امتصاص الصوديوم ، ويزيد من تدفق الدم الكلوي. من ناحية أخرى ، فإنه يقمع نظام الرينين أنجيوتنسين-الألدوستيرون19. وبالتالي ، فإن RDN له تأثير مفيد على ارتفاع ضغط الدم. ومع ذلك ، فإن نموذج RDN الناتج عن الاجتثاث الكيميائي يفتقر إلى معايير الاجتثاث ووقت الاجتثاث وتفاصيل الإجراء التجريبي غير واضحة بعد. أيضا ، لا توجد تقارير فنية متاحة. في هذا التقرير ، وصفنا بروتوكولا جراحيا لتوليد نموذج RDN مع الفينول باستخدام ورق الوزن في ارتفاع ضغط الدم الناجم عن الأنجيوتنسين II (Ang II) في الفئران C57BL / 6. نقوم بلف الشريان الكلوي بورق وزن يحتوي على الفينول ونوحد وقت الاجتثاث ، مما يساعد على إنشاء نموذج RDN أكثر قابلية للتكرار وموثوقية. يهدف هذا النموذج التجريبي إلى تقييم تأثير RDN على ارتفاع ضغط الدم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
امتثلت جميع الإجراءات التجريبية على الحيوانات للدليل الأخلاقي ذي الصلة لرعاية واستخدام المختبر (منشور المعاهد الوطنية للصحة رقم 85-23 ، المنقح 2011) وتمت الموافقة عليها من قبل لجان البحوث الحيوانية في مستشفى هوادونغ التابع لجامعة فودان. تم تقسيم ذكور C57BL / 6 الفئران البالغة من العمر أربعة عشر أسبوعا (28-30 جم) عشوائيا إلى أربع مجموعات: مجموعة الشام ، مجموعة Sham + Ang II ، مجموعة RDN ، مجموعة RDN + Ang II ، n = 6 في كل مجموعة. تم الحفاظ على جميع الحيوانات في ظل ظروف مغلقة محددة خالية من مسببات الأمراض في غرفة يتم التحكم في درجة حرارتها عند 24 ± 1 درجة مئوية مع دورة ضوئية / مظلمة لمدة 12 ساعة وحرية الوصول إلى طعام القوارض القياسي والمياه حسب الطلب.
1. إعداد مجال العملية
- تطهير طاولة التشغيل مع 70 ٪ من الإيثانول. اضبط درجة حرارة وسادة التدفئة على 37 درجة مئوية.
- تأكد من تعقيم جميع الأدوات الجراحية قبل الجراحة عند 121 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة أو بطرق أخرى. يتطلب هذا الإجراء مقصا جراحيا دقيقا ، وملقطين مستقيمين دقيقين ، وملقطين منحنيين دقيقين ، وملقط مرقئ ، وشاش معقم ، وأوراق وزن.
2. ارتفاع ضغط الدم الناجم عن الأنجيوتنسين الثاني
- توفير ميلوكسيكام (0.5 ملغم / كغم ، SC) للفئران C57BL / 6 قبل وقت قصير من تحريض التخدير. ثم تخدير الفئران باستخدام حقن بنتوباربيتال الصوديوم كما هو موضح سابقا20,21. يمكن أيضا استخدام إيزوفلوران ، إذا كنت تفضل ذلك. تأكد من عمق التخدير بمنعكس قرصة إصبع القدم السلبي.
- إزالة الشعر على الظهر مع ماكينة حلاقة. ضع مرهم الطبيب البيطري على العينين لمنع الجفاف أثناء التخدير.
- ضع الحيوان على طاولة العمليات في الوضع الظهري. امسحي وامسحي المنطقة المحلوقة بالبوفيدون واليود متبوعا بثلاث مناديل تحتوي على 70٪ من الإيثانول.
- قم بعمل شق 1 سم باستخدام شفرة مشرط معقمة ، عمودية على الذيل ، خلف الأذن فوق لوح الكتف في الساق الأمامية.
- استخدم مرقئ معقم لعمل نفق تحت الجلد وإنشاء جيب للمضخة22. أدخل مضخة تناضحية مملوءة بالأنجيوتنسين II (1000 نانوغرام / كجم / دقيقة) في الجيب برفق. تأكد من وجود مساحة خالية كافية لخياطة الجرح دون شد الجلد.
- خياطة العضلات مع الغرز Vicryl المتقطعة 6-0 وإغلاق الجلد مع الغرز النايلون 4-0 متقطعة. مسحة ومسح موقع الجرح مع البوفيدون اليود. قم بإجراء نفس الجراحة بحجم متساو من المحلول الملحي للمجموعة الضابطة.
- ضع جميع الأدوات الجراحية في معقم لمدة 10 ثوان واستبدل القفازات المعقمة بين العمليات الجراحية. راقب جميع الفئران حتى تتعافى تماما.
- راقب عن كثب وراقب التئام الجروح في الفئران مرتين يوميا على الأقل خلال الأسبوع الأول ومرة كل يوم بعد ذلك ، بما في ذلك الاحمرار والتورم والعدوى. إجراء تشريح على الفور إذا ماتت الفئران أثناء ضخ Ang II.
- قم بقياس ضغط الدم عند خط الأساس وكل أسبوع بعد تسريب Ang II باستخدام طريقة تخطيط حجم الكفة23 في الفئران الواعية. تأكد من إجراء تجارب قياس ضغط الدم في منطقة هادئة ، عند 22 ± 2 درجة مئوية ، حيث تتأقلم الفئران لمدة 1 ساعة قبل بدء التجربة. تعويد الفئران لمدة 5 أيام متتالية على الأقل قبل قياسات ضغط الدم الأساسية23,24.
3. إزالة التعصيب الكلوي الثنائي
- حدد الفئران ذات ضغط الدم المرتفع (BP) ≥140/90mmHg أو زيادة بنسبة 25٪ في ضغط الدم الانقباضي / ضغط الدم الانبساطي ، بعد أسبوع واحد من تسريب Ang II.
- سجل وزن الحيوان قبل الجراحة واختر الحيوانات التي لا يقل وزنها عن 24 جم لجراحة إزالة التعصيب الكلوي.
- تخدير الفئران باستخدام بنتوباربيتال الصوديوم. تأكد من عمق التخدير بمنعكس قرصة إصبع القدم السلبي.
- إزالة الشعر على البطن مع ماكينة حلاقة. نفذ هذا الإجراء بعناية ودقة لتجنب أي تلوث جراحي.
- ضع الفئران على طاولة العمليات ، مع الحفاظ على البطن وإصلاح أطرافه بشريط. تطهير جلد البطن مع البوفيدون اليود تليها ثلاث مناديل مع 70 ٪ من الإيثانول.
- قم بعمل شق بطني في خط الوسط البطني بطول 2 سم باستخدام شفرة مشرط. اسحب الأمعاء للخلف بشاش منقوع في محلول ملحي 37 درجة مئوية لكشف الشريان الكلوي الأيسر. قم بتشريح الدهون بعناية وبصراحة بعيدا عن الشريان الكلوي باستخدام ملاقط منحنية. (الشكل 1 أ - ج).
- قطع ورقة الوزن إلى مستطيل من نفس حجم الشريان الكلوي مع مقص حاد معقمة. كمرجع ، قم بقص ورق الوزن بنفس الحجم كما هو موضح في الخط المنقط في الشكل 1C.
ملاحظة: إنه جزء مهم من الجراحة ، حاول قطع عدة قطع من ورق الوزن في وقت واحد للحفاظ على نفس الشكل. - اغمس ورق الوزن في محلول فينول / إيثانول بنسبة 10٪ لمدة 30 ثانية على الأقل. قم بتغطية سطح الشريان الكلوي الأيسر ولف الوعاء بورق الوزن ، واحتفظ به لمدة 2 دقيقة (الشكل 1 د). استخدم الشاش لحماية الأنسجة المحيطة لتجنب لمس ورق الوزن للكلى والأمعاء المحيطة.
ملاحظة: محلول الفينول مستقر في الأنابيب البلاستيكية ولكن ليس في القوارير الزجاجية. لذلك ، يجب إعداد الحل حديثا لكل تجربة18. - نفذ نفس الإجراء للشريان الكلوي الأيمن. قم بإجراء الجراحة الوهمية باستخدام ورق وزن مغمور في محلول ملحي.
- أعد وضع العضلات في موضعها الأولي وأغلق الصفاق بخيوط 6-0 Vicryl في خياطة متقطعة. ثم أغلق الجلد بخيوط نايلون متقطعة 4-0. راقب جميع الفئران حتى تتعافى تماما.
4. رعاية ما بعد الجراحة
- ضع البوفيدون اليود على الشق وضع الحيوان في بطانية كهربائية دافئة للتعافي والمراقبة بعد الجراحة.
- راقب الفئران مرتين في اليوم لتقييم الاحمرار والتورم والألم أو عدوى البطن. توفير ميلوكسيكام (0.5 مجم / كجم ، SC) لجميع الفئران قبل حوالي 1 ساعة و 24 ساعة بعد إجراء RDN.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
الاحصاءات
يتم التعبير عن جميع البيانات كمتوسط ± الانحراف المعياري. تم استخدام ANOVA أحادي الاتجاه للتجارب مع ثلاثة أو أكثر من الحالات تليها اختبارات Bonferroni posthoc للمقارنات بين المجموعات الفردية. ضع في اعتبارك أن القيمة p تساوي أو تقل عن 0.05 على أنها مهمة. تم استخدام برنامج تجاري لإجراء جميع التحليلات الإحصائية.
تم تخفيف الزيادة في ضغط الدم الناجم عن Ang II بعد RDN
لوحظت زيادة كبيرة في ضغط الدم الانقباضي (SBP) في 1 أسبوع بعد ضخ Ang II. أظهرت مجموعة RDN + Ang II انخفاضا كبيرا في SBP عند مقارنتها بمجموعة Sham + Ang II بعد 21 يوما من إجراء RDN (143.50 ± 5.43 مقابل 196.67 ± 14.26 مم زئبق ، p < 0.01). لم يكن هناك فرق بين مجموعة الشام ومجموعة RDN (113.33 ± 9.35 مقابل 113.17 ± 8.47 مم زئبق ، ص > 0.05) بعد أسبوعين من RDN (الشكل 2).
تأكيد RDN وتلف الشريان الكلوي
بعد 21 يوما من تسريب Ang II ، تم القتل الرحيم للحيوانات عن طريق الحقن داخل الصفاق من بنتوباربيتال الصوديوم (250 مغ / كغ). تم جمع القلب والكلى. تم إجراء تلطيخ H&E للكشف عن الأضرار التي لحقت العصب الكلوي والشرايين الكلوية. أظهرت النتائج أنه لم يكن هناك سماكة واضحة للطبقة الداخلية الوعائية الكلوية في كل مجموعة (الشكل 3A-D). أظهر تلطيخ H&E للأعصاب الكلوية عددا كبيرا من نوى pyknotic ، وغرف الهضم ، ونوى الأعصاب المنتفخة التي تسببها RDN (الشكل 3E-H). كشفت الكيمياء الهيستولوجية المناعية للحزم العصبية أن التعبير عن هيدروكسيلاز التيروزين (TH ، تخفيف 1: 500) انخفض بشكل ملحوظ في مجموعة RDN ومجموعة RDN + Ang II (الشكل 4). خفض RDN محتوى النورإبينفرين القشري الكلوي في كل من مجموعة ضغط الدم العادي وارتفاع ضغط الدم (المجموعة الوهمية مقابل مجموعة RDN ، 18.60 ± 6.91 مقابل 180.76 ± 11.47 نانوغرام / جم ، p < 0.01 ؛ الشكل 5).
علاج RDN المخفف Ang II التسريب الناجم عن تضخم القلب المرضي
لم يظهر تلطيخ ماسون أي زيادة ملحوظة في الوسائط الداخلية للشريان الأورطي البطني بين هذه المجموعات. تم تحسين تضخم القلب الناجم عن التسريب Ang II من خلال علاج RDN كما هو موضح في انخفاض التليف الخلالي (7.45٪ ± 0.28 مقابل 4.53٪ ± 0.32 ، p < 0.01) وحجم عضلة القلب (348.39 ± 31.56 مقابل 322.21 ± 22.26 ميكرومتر ، p = 0.37 ؛ الشكل 6).
الشكل 1: إجراء RDN مع وزن الورق. (أ ، ب) صور تشريحية للشريان الكلوي من الفئران C57BL / 6 (خارج الجسم الحي). (ج) يشير الجزء الموجود داخل الخطين المنقطين إلى المنطقة التي يغطيها ورق الوزن. (د) تغطية سطح الشريان الكلوي الثنائي بورق الوزن المناسب المغمور في محلول الفينول / الإيثانول بنسبة 10٪. لا تقم بتغطية ورق الترشيح خارج الخط المنقط. * تشير إلى ورق الوزن. الرجاء الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
الشكل 2: RDN يخفف من ارتفاع ضغط الدم الناجم عن ضخ Ang II. تم قياس ضغط الدم بطريقة تخطيط التحجم في الكفة الخلفية وكل أسبوع بعد ضخ Ang II. * يشير إلى الدلالة الإحصائية (p < 0.05) ، ** يشير إلى الدلالة الإحصائية (p < 0.01). يتم تمثيل القيم كمتوسط ± خطأ قياسي ؛ N = 6 في كل مجموعة ؛ تشير مجموعة RDN + Ang II إلى إزالة التعصيب الكلوي الذي تم تشغيله في 1 أسبوع بعد تسريب Ang II في الفئران C57BL / 6. الاختصارات: SBP = ضغط الدم الانقباضي. الرجاء الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
الشكل 3: صور تمثيلية للعصب الكلوي السمبثاوي والشريان الكلوي. (أ-د) لم يلاحظ أي سماكة في الطبقة الداخلية للشريان الكلوي في المجموعات الأربع. صور تمثيلية للأعصاب الكلوية التالفة بعد RDN. (ه-ح) لوحظت نوى مجزأة و pyknotic ، والهضم ، وتورم الأنسجة الداخلية في كل من RDN و RDN + Ang II المجموعة. الرجاء الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
الشكل 4: التلوين المناعي للتيروزين هيدروكسيلاز في العصب الكلوي السمبثاوي . (أ) لوحظ رد فعل إيجابي قوي لتلطيخ الأجسام المضادة TH في الفئران التي تعمل بالوهم، في حين لوحظ تفاعل أضعف في الفئران التي تعمل بنظام RDN. شريط المقياس = 50 ميكرومتر. (ب) القياس الكمي لتعبير TH في الأعصاب الكلوية. ** يشير إلى دلالة إحصائية (P < 0.01) ، يشير NS إلى عدم الأهمية. القيم تعني ± خطأ قياسي ؛ N = 6 في كل مجموعة ؛ تشير مجموعة RDN + Ang II إلى إزالة التعصيب الكلوي الذي تم تشغيله في 1 أسبوع بعد تسريب Ang II في الفئران C57BL / 6. الرجاء الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
الشكل 5: مستويات نورإبينفرين الأنسجة القشرية الكلوية التي حللها ELISA. انخفض محتوى النورإبينفرين القشري الكلوي في الكلى المعصبة بشكل ملحوظ مقارنة بتلك الموجودة في الكلى المعصبة. ** يشير إلى دلالة إحصائية (P < 0.01) ، يشير NS إلى عدم الأهمية. القيم تعني ± خطأ قياسي ؛ N = 6 في كل مجموعة ؛ تشير مجموعة RDN + Ang II إلى إزالة التعصيب الكلوي التي أجريت في 1 أسبوع بعد تسريب Ang II في C57BL / 6. الرجاء الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
الشكل 6: RDN يخفف من تضخم القلب المرضي الناجم عن Ang II . (أ) صور تمثيلية للشريان الأورطي البطني. لم يلاحظ أي سماكة في طبقة الشريان الأورطي البطني في هذه المجموعة (تلطيخ ماسون). (ب، ج) صور تمثيلية لعضلة القلب في مجموعات مختلفة (H&E ، تلطيخ ماسون). (د) التحديد الكمي لنسبة التليف في منطقة البطين الأيسر وتحليل النسبة المئوية لمنطقة التليف (عدد المجالات البصرية لكل فئران). شريط المقياس = 50 ميكرومتر. N = 6 في كل مجموعة ؛ يشير RDN + Ang II إلى إزالة التعصيب الكلوي الذي يتم تشغيله في أسبوع واحد بعد تسريب Ang II في C57BL / 6. الرجاء الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
أصبح ما إذا كان RDN يمكن أن يخفض ضغط الدم مثيرا للجدل منذ نشر النتيجة السلبية لتجربة HTN-3 التماثلية 7,25. ومع ذلك ، فقد أظهرت العديد من التجارب السريرية والتجارب على الحيوانات نتائج إيجابية وفعالة من RDN على البشر والحيوانات ارتفاع ضغط الدم9،10،11،12،13،14،15،16،17. يستخدم الفينول لتدمير العصب الكلوي في الحيوانات ، ولا تزال تفاصيل الاستئصال غير معروفة في الأبحاث السابقة ، مثل منطقة الاستئصال ووقت الاستئصال ، والتي ربما ساهمت في نتائج مختلفة16.
الطرق التقليدية ل RDN ، مثل استخدام مسحة القطن مع الفينول في الفئران ، والاستئصال القائم على القسطرة ، والعلاج الإشعاعي التجسيمي في الخنازير ، تسبب تلفا للعصب الكلوي18،26،27،28. هذه الطرق ليست مناسبة أيضا للفئران ، التي تزن عشرات الجرامات فقط ، ومن المرجح أن تؤدي إلى الوفاة. إلى جانب ذلك ، تسبب هذه الطرق تضيق الشريان الكلوي. في الواقع ، قمنا بإعداد نماذج RDN واستخدمنا هذه الأساليب في تجربتنا المسبقة. ومع ذلك ، مات 40/50 الفئران. أدت طريقة استخدام مسحة القطن مع الفينول إلى ارتفاع معدل الوفيات.
وهكذا ، في هذه الدراسة ، تم إنشاء طريقة تمكن من الأداء الموحد ل RDN ، ولكنها تتطلب مهارة جراحية أقل ووقت تشغيل أقل. استخدمنا ورق وزن منقوع بمحلول الفينول / الإيثانول بنسبة 10٪ ، تم وضعه لمدة 2 دقيقة على الشريان الكلوي ، مما يوفر طريقة موثوقة لتآكل العصب الودي الكلوي في الفئران. يتم تأكيد فعاليته من خلال علم أمراض الأنسجة في العصب الكلوي. لقد خفف بشكل كبير من ارتفاع SBP الناجم عن Ang II. علاوة على ذلك ، فقد خفف أيضا من تضخم القلب الناجم عن Ang II. بالإضافة إلى ذلك ، يتميز الإجراء المحسن بالعديد من الخصائص ، بما في ذلك سهولة الأداء وزيادة معدل النجاح ومعدلات البقاء على قيد الحياة عند مقارنته بالإجراءات التقليدية.
الجزء الأكثر أهمية في البروتوكول هو أن ورقة الوزن مع الفينول يجب ألا تلمس الأنسجة المحيطة ، وإلا فقد تسبب انسدادا معويا مميتا وعدوى في البطن وتضيق الشريان الكلوي. ينصح بعدم لمس محلول الكلى لأن كمية صغيرة فقط من الفينول يمكن أن تسبب فرط النشاط الكلويالودي 18. إلى جانب ذلك ، يجب إيلاء اهتمام خاص عند قطع ورق الوزن. من الأفضل تخصيصه تحت المجهر بمقص جراحي. لا نوصي بعزل الأعصاب الكلوية بملاقط صغيرة ، لأن ذلك قد يؤدي إلى تلف الأوعية الدموية الكلوية. عادة ، يمكن تنفيذ الإجراء بأمان في غضون 20 دقيقة ، حتى مع الأداء البطيء. علاوة على ذلك ، فإن درجة انصهار الفينول هي 40.5 درجة مئوية.
القيد الرئيسي لإجراء RDN المحسن هو أن وقت المتابعة بعد العملية الجراحية كان فقط 2 أسابيع. تأثير RDN على المدى الطويل على BP وتجديد العصب الكلوي غير واضح.
التطبيق المستقبلي لهذا النموذج هو إنتاج نماذج حيوانية أكثر توحيدا لإزالة التعصيب يمكن أن تسهم في شرح المسارات التي تكمن وراء عملية ارتفاع ضغط الدم وتضخم القلب.
في الختام ، هذه الطريقة عملية وقابلة للتكرار. الأهم من ذلك ، يمكن أن تولد نماذج RDN موحدة لدراسة الآليات التي تتحكم في ارتفاع ضغط الدم ومكافحة أمراض القلب والأوعية الدموية مثل تضخم القلب.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
لا يوجد تضارب في المصالح ، مالي أو غير ذلك ، كما أعلن المؤلفون.
Acknowledgments
تم دعم هذا العمل من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (81770420) ، ولجنة العلوم والتكنولوجيا التابعة لبلدية شنغهاي (20140900600) ، ومختبر شنغهاي الرئيسي لطب الشيخوخة السريري (13dz2260700) ، والتخصص السريري الرئيسي لبلدية شنغهاي (shslczdzk02801) ومركز مرض الشريان التاجي للشيخوخة ، مستشفى هوادونغ التابع لجامعة فودان.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Angiotensin II | Sangon Biotech | CAS:4474-91-3 | To make a hypertensive animol model |
| Anti-Tyrosine Hydroxylase antibody | Abcam | ab137869 | To evaluate the expression of TH of renal nerves |
| Blood Pressure Analysis | Visitech Systems | BP-2000 | Measure the blood pressure of mice |
| Mini-osmotic pump | DURECT Corporation | CA 95014 | To fill with Angiotensin II |
| Norepinephrine ELISA Kit | Abcam | ab287789 | to measure renal norepinephrine levels |
| Phenol | Sangon Biotech | CAS:108-95-2 | Damage the renal sympathetic nerve |
| Weighing paper | Sangon Biotech | F512112 | To destroy renal nerve with weighing paper immersed with phenol; https://www.sangon.com/productDetail?productInfo.code=F512112. |
References
- Messerli, F. H., Rimoldi, S. F., Bangalore, S. The transition from hypertension to heart failure: Contemporary update. JACC Heart Failure. 5 (8), 543-551 (2017).
- Lackland, D. T., et al. Implications of recent clinical trials and hypertension guidelines on stroke and future cerebrovascular research. Stroke. 49 (3), 772-779 (2018).
- Rossignol, P., et al. The double challenge of resistant hypertension and chronic kidney disease. The Lancet. 386 (10003), 1588-1598 (2015).
- Du, X., Patel, A., Anderson, C. S., Dong, J., Ma, C. Epidemiology of cardiovascular disease in China and opportunities for improvement. JACC International. Journal of the American College of Cardiology. 73 (24), 3135-3147 (2019).
- Valenzuela, P. L., et al. Lifestyle interventions for the prevention and treatment of hypertension. Nature Review Cardiology. 18 (4), 251-275 (2021).
- Krum, H., et al. Catheter-based renal sympathetic denervation for resistant hypertension: a multicentre safety and proof-of-principle cohort study. The Lancet. 373 (9671), 1275-1281 (2009).
- Bhatt, D. L., et al. A controlled trial of renal denervation for resistant hypertension. The New England Journal of Medicine. 370 (15), 1393-1401 (2014).
- Kjeldsen, S. E., Narkiewicz, K., Burnier, M., Oparil, S. Renal denervation achieved by endovascular delivery of ultrasound in RADIANCE-HTN SOLO or by radiofrequency energy in SPYRAL HTN-OFF and SPYRAL-ON lowers blood pressure. Blood Press. 27 (4), 185-187 (2018).
- Böhm, M., et al. Efficacy of catheter-based renal denervation in the absence of antihypertensive medications (SPYRAL HTN-OFF MED Pivotal): a multicentre, randomised, sham-controlled trial. The Lancet. 395 (10234), 1444-1451 (2020).
- Azizi, M., et al. Endovascular ultrasound renal denervation to treat hypertension (RADIANCE-HTN SOLO): a multicentre, international, single-blind, randomised, sham-controlled trial. The Lancet. 391 (10137), 2335-2345 (2018).
- Kandzari, D. E., et al. Effect of renal denervation on blood pressure in the presence of antihypertensive drugs: 6-month efficacy and safety results from the SPYRAL HTN-ON MED proof-of-concept randomised trial. The Lancet. 391 (10137), 2346-2355 (2018).
- Townsend, R. R., et al. Catheter-based renal denervation in patients with uncontrolled hypertension in the absence of antihypertensive medications (SPYRAL HTN-OFF MED): a randomised, sham-controlled, proof-of-concept trial. The Lancet. 390 (10108), 2160-2170 (2017).
- Sun, X., et al. Renal denervation restrains the inflammatory response in myocardial ischemia-reperfusion injury. Basic Research in Cardiology. 115 (2), 15 (2020).
- Sharp, T. E., et al. Renal denervation prevents heart failure progression via inhibition of the renin-angiotensin system. Journal of the American College of Cardiology. 72 (21), 2609-2621 (2018).
- Wang, H., et al. Renal denervation attenuates progression of atherosclerosis in apolipoprotein E-deficient mice independent of blood pressure lowering. Hypertension. 65 (4), 758-765 (2015).
- Chen, H., et al. Renal denervation mitigates atherosclerosis in ApoE-/- mice via the suppression of inflammation. American Journal of Translational Research. 12 (9), 5362-5380 (2020).
- Wang, Y., et al. Renal denervation promotes atherosclerosis in hypertensive apolipoprotein E-deficient mice infused with Angiotensin II. Frontiers in Physiology. 8, 215 (2017).
- Eriguchi, M., Tsuruya, K.
- Thukkani, A. K., Bhatt, D. L. Renal denervation therapy for hypertension. Circulation. 128 (20), 2251-2254 (2013).
- Zhang, Y. J., et al. NAD(+) administration decreases microvascular damage following cardiac ischemia/reperfusion by restoring autophagic flux. Basic Research in Cardiology. 115 (5), 57 (2020).
- Wang, M., et al. Long-term renal sympathetic denervation ameliorates renal fibrosis and delays the onset of hypertension in spontaneously hypertensive rats. American Journal of Translational Research. 10 (12), 4042-4053 (2018).
- Lu, H., et al. Subcutaneous Angiotensin II infusion using osmotic pumps induces aortic aneurysms in mice. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (103), e53191 (2015).
- Wilde, E., et al. Tail-cuff technique and its influence on central blood pressure in the mouse. Journal of the American Heart Association. 6 (6), 005204 (2017).
- Daugherty, A., Rateri, D., Hong, L., Balakrishnan, A. Measuring blood pressure in mice using volume pressure recording, a tail-cuff method. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (27), e1291 (2009).
- Esler, M. Illusions of truths in the Symplicity HTN-3 trial: generic design strengths but neuroscience failings. Journal of the American Society of Hypertension. 8 (8), 593-598 (2014).
- Han, W., et al. Low-dose sustained-release deoxycorticosterone acetate-induced hypertension in Bama miniature pigs for renal sympathetic nerve denervation. Journal of the American Society of Hypertension. 11 (5), 314-320 (2017).
- Han, W., et al. The safety of renal denervation as assessed by optical coherence tomography: pre- and post-procedure comparison with multi-electrode ablation catheter in animal experiment. Hellenic Journal of Cardiology. 61 (3), 190-196 (2020).
- Cai, X., et al. Noninvasive stereotactic radiotherapy for renal denervation in a swine model. Journal of the American College of Cardiology. 74 (13), 1697-1709 (2019).
