Summary
इस अध्ययन में, पीरियडोंटाइटिस के प्रेरण का एक चूहा मॉडल पोरफाइरोमोनास जिंजिवलिस से प्राप्त लिपोपॉलीसेकेराइड के रिटेनटिव लिगेचर और दोहराए जाने वाले इंजेक्शन के संयोजन के माध्यम से प्रस्तुत किया जाता है, जो पहले मैक्सिलरी दाढ़ के आसपास 14 दिनों तक होता है। लिगेशन और एलपीएस इंजेक्शन तकनीक पेरिडोन्टाइटिस को प्रेरित करने में प्रभावी थे, जिसके परिणामस्वरूप वायुकोशीय हड्डी का नुकसान और सूजन हुई।
Abstract
पीरियडोंटाइटिस (पीडी) पीरियडोंटियम की एक अत्यधिक प्रचलित, पुरानी प्रतिरक्षा-भड़काऊ बीमारी है, जिसके परिणामस्वरूप मसूड़े के नरम ऊतक, पीरियडोंटल लिगामेंट, सीमेंटम और वायुकोशीय हड्डी का नुकसान होता है। इस अध्ययन में, चूहों में पीडी प्रेरण की एक सरल विधि का वर्णन किया गया है। हम पहले मैक्सिलरी मोलर्स (एम 1) के आसपास लिगेचर मॉडल के प्लेसमेंट के लिए विस्तृत निर्देश प्रदान करते हैं और एम 1 के मेसियो-पलाटल साइड पर पोर्फिरोमोनास जिंजिवलिस से प्राप्त लिपोपॉलीसेकेराइड (एलपीएस) के इंजेक्शन के संयोजन के लिए विस्तृत निर्देश प्रदान करते हैं। पीरियडोंटाइटिस के प्रेरण को 14 दिनों तक बनाए रखा गया था, जिससे बैक्टीरिया बायोफिल्म और सूजन के संचय को बढ़ावा मिला। पशु मॉडल को मान्य करने के लिए, आईएल -1, एक प्रमुख भड़काऊ मध्यस्थ, मसूड़े के क्रेविकुलर द्रव (जीसीएफ) में एक इम्यूनोएसे द्वारा निर्धारित किया गया था, और वायुकोशीय हड्डी के नुकसान की गणना शंकु बीम कंप्यूटेड टोमोग्राफी (सीबीसीटी) का उपयोग करके की गई थी। यह तकनीक 14 दिनों के बाद प्रयोगात्मक प्रक्रिया के अंत में जीसीएफ में जिंजिवा मंदी, वायुकोशीय हड्डी के नुकसान और आईएल -1 के स्तर में वृद्धि को बढ़ावा देने में प्रभावी थी। यह विधि पीडी को प्रेरित करने में प्रभावी थी, इस प्रकार रोग प्रगति तंत्र और भविष्य के संभावित उपचारों पर अध्ययन में उपयोग करने में सक्षम थी।
Introduction
पीरियडोंटाइटिस (पीडी) दुनिया भर में छठी सबसे प्रचलित सार्वजनिक स्वास्थ्य स्थिति है, जो कुल आबादी के लगभग 11% को प्रभावित करती है, जो पेरियोडोंटल बीमारी 1,2 का एक उन्नत, अपरिवर्तनीय और विनाशकारी रूप है। पीडी एक भड़काऊ प्रक्रिया है जो मसूड़े और पेरियोडोंटल ऊतकों को प्रभावित करती है, जिसके परिणामस्वरूप जिंजिवा मंदी, जेब के विकास के साथ जंक्शन एपिथेलियम का एपिकल माइग्रेशन और वायुकोशीय हड्डीका नुकसान होता है। इसके अलावा, पीडी हृदय रोग, मोटापा, मधुमेह और रूमेटोइड गठिया सहित कई प्रणालीगत बीमारियों से जुड़ा हुआ है, जिसके लिए पर्यावरण और मेजबान-विशिष्ट कारक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं।
इसलिए, पीडी एक बहुक्रियात्मक बीमारी है जो मुख्य रूप से माइक्रोबियल पट्टिका के संचय से शुरू होती है - माइक्रोबियल समुदायों के डिस्बिओसिस के परिणामस्वरूप - और पीरियडोंटल रोगजनकों के लिए अतिरंजित मेजबान प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया द्वारा, जो पीरियडोंटल ऊतक 4,6 के टूटने की ओर जाता है। कई पेरियोडोंटल बैक्टीरिया के बीच, ग्राम-नकारात्मक एनारोबिक जीवाणु पोर्फिरोमोनास जिंजिवलिस पीडी4 में प्रमुख रोगजनकों में से एक है। जिंजिवलिस में इसकी दीवारों में एक जटिल लिपोपॉलेसेकेराइड (एलपीएस) होता है, एक अणु जो सूजन वाले पेरियोडोंटल ऊतकों में पॉलीमोर्फोन्यूक्लियर ल्यूकोसाइट घुसपैठ और संवहनी फैलाव को प्रेरित करने के लिए जानाजाता है। इसके परिणामस्वरूप इंटरल्यूकिन 1 (आईएल -1), आईएल -6, और आईएल -8, ट्यूमर नेक्रोसिस फैक्टर (टीएनएफ), या प्रोस्टाग्लैंडिंस जैसे भड़काऊ मध्यस्थों का उत्पादन होता है, जिसके बाद ओस्टियोक्लास्ट सक्रियण और हड्डी पुनर्जीवन होता है, जिससे ऊतक विनाश और अंतिम दांत हानिहोती है।
पशु मॉडल के विभिन्न फायदों में मनुष्यों के रूप में सेलुलर जटिलताओं की नकल करने की क्षमता शामिल है, या इन विट्रो अध्ययनों की तुलना में अधिक सटीक होना है, जो सीमित सेलप्रकारों के साथ प्लास्टिक की सतहों पर किए जाते हैं। विवो में प्रयोगात्मक रूप से पीडी मॉडलिंग के लिए, विभिन्न जानवरों की प्रजातियों का उपयोग किया गया है, जैसे गैर-मानव प्राइमेट्स, कुत्ते, सूअर, फेरेट, खरगोश, चूहे और चूहे9। हालांकि, चूहे पीडी के रोगजनन के लिए सबसे बड़े पैमाने पर अध्ययन किए गए पशु मॉडल हैं क्योंकि वे सस्ती हैं और10 को संभालना आसान है। उनके दंत मसूड़े के ऊतकों में मानव मसूड़े के ऊतकों के समान संरचनात्मक विशेषताएं होती हैं, जिसमें दांत की सतह से जुड़ा उथला मसूड़े का सुल्कस और जंक्शन एपिथेलियम होता है। इसके अलावा, मनुष्यों की तरह, जंक्शन एपिथेलियम भड़काऊ कोशिकाओं से बैक्टीरिया, विदेशी सामग्री और एक्स्यूडेट्स के पारित होने की सुविधा प्रदान करता है।
चूहों में पीडी प्रेरण के सबसे अधिक रिपोर्ट किए गए प्रयोगात्मक मॉडलों में से एक दांतों के चारों ओर लिगेटर्स का प्लेसमेंट है, जो तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण लेकिन विश्वसनीयहै। लिगेचर प्लेसमेंट दंत पट्टिका और जीवाणु संचय की सुविधा प्रदान करता है, जिससे मसूड़े के सुल्की में एक डिस्बिओसिस उत्पन्न होता है, जो पीरियडोंटल ऊतक सूजनऔर विनाश का कारण बनता है। इस चूहे के मॉडल 8 में 7 दिनों में पेरियोडोंटल लगाव और वायुकोशीय हड्डी के पुनरुत्थान का नुकसान हो सकताहै।
पीडी के लिए एक अन्य पशु मॉडल में मसूड़े के ऊतकों में एलपीएस का इंजेक्शन होता है। नतीजतन, ओस्टियोक्लास्टोजेनेसिस और हड्डी के नुकसान को उत्तेजित किया जाता है। इस मॉडल की हिस्टोपैथोलॉजिकल विशेषताएं मानव-स्थापित पीडी के समान हैं, जो प्रोइंफ्लेमेटरी साइटोकिन्स, कोलेजन क्षरण और वायुकोशीय हड्डी पुनरुत्थान 6,8 के उच्च स्तर की विशेषता है।
इस प्रकार, इस अध्ययन का उद्देश्य पी जिंजिवलिस-एलपीएस (पीजी-एलपीएस) इंजेक्शन की तकनीकों के आधार पर प्रयोगात्मक पीडी के एक सरल चूहे मॉडल का वर्णन करना था, जो पहले मैक्सिलरी मोलर्स (एम 1) के आसपास लिगेचर प्लेसमेंट के साथ संयुक्त था। यह मानव पीडी रोग में देखे गए समान विशेषताओं वाला एक मॉडल है, जिसका उपयोग रोग प्रगति तंत्र और भविष्य के संभावित उपचारों के अध्ययन में किया जा सकता है।
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Protocol
नोट: अध्ययन के प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल को बेलिएरिक द्वीप स्वास्थ्य अनुसंधान संस्थान (सीईईए-यूआईबी; संदर्भ संख्या 163/03/21) के पशु प्रयोग की नैतिक समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था।
1. पशु संज्ञाहरण और प्रक्रिया की तैयारी
- सर्जरी से पहले सभी सर्जिकल उपकरणों (एल्यूमीनियम माउथ गैग्स, डेंटल एक्सप्लोरर, डायमंड लांस, सर्जिकल कैंची, माइक्रोसर्जिकल प्लियर्स, एक माइक्रो नीडल होल्डर, एक होलेनबैक कार्वर, एक पेरीओस्टियल माइक्रोसर्जिकल लिफ्ट, और माइक्रोसर्जिकल कैंची) (135 डिग्री सेल्सियस पर 5 मिनट) को निष्फल करें।
- बाँझ स्थितियों में प्रक्रिया के लिए आवश्यक सभी समाधान तैयार करें, जैसा कि वर्णित है:
- फॉस्फेट बफर सॉल्यूशन (पीबीएस)/खारा में पतला 1 एमएल जाइलाज़िन के साथ 1.6 एमएल केटामाइन को मिलाकर केटामाइन (60 मिलीग्राम/एमएल) और जाइलाज़िन (8 मिलीग्राम/एमएल) का मिश्रण तैयार करें। स्टॉक को 4 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।
- पीबीएस/खारा में 0.25 मिलीग्राम/एमएल की अंतिम सांद्रता के लिए एटिपामेज़ोल को पतला करें। स्टॉक को 4 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।
- ब्यूप्रेनोर्फिन को पीबीएस/खारा में 0.03 मिलीग्राम/एमएल की अंतिम सांद्रता तक पतला करें। स्टॉक को 4 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।
- बाँझ लवण में पीजी-एलपीएस (1 मिलीग्राम / एमएल) का 1 एमएल तैयार करें। स्टॉक को -20 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।
- प्रयोग के लिए, 12 सप्ताह की आयु के महिला और पुरुष विस्टार चूहों का उपयोग करें और सर्जरी के समय 210-350 ग्राम वजन करें। जानवरों को उचित वातावरण और निरंतर परिस्थितियों (20-24 डिग्री सेल्सियस, 12 घंटे प्रति दिन प्रकाश-अंधेरे चक्र) के तहत समूहों में रखा जाता है, भोजन और मानक पानी के साथ, विज्ञापन लिबिटम की पेशकश की जाती है।
- संज्ञाहरण को प्रेरित करने के लिए, चूहे का वजन करें और 25 ग्राम बाँझ हाइपोडर्मिक सुई और 1 एमएल सिरिंज का उपयोग करके 80/10 मिलीग्राम / किलोग्राम इंट्रापेरिटोनियल (आईपी) की एकाग्रता पर केटामाइन / ज़ाइलज़िन के मिश्रण को प्रशासित करें।
- चूहे को एनेस्थेटाइज करने के बाद, जानवर को गर्म सर्जिकल प्लेटफॉर्म पर उसकी पीठ पर रखें; प्रक्रिया के दौरान, गर्मी के नुकसान को रोकने के लिए जानवर के शरीर को कवर करें।
नोट: एनेस्थीसिया गहराई का मूल्यांकन प्रक्रिया के दौरान पेडल रिफ्लेक्स के नुकसान और महत्वपूर्ण संकेतों की निगरानी द्वारा किया जाता है। यदि आवश्यक हो, तो 100% ऑक्सीजन में 2% आइसोफ्लुरेन के साथ संज्ञाहरण बनाए रखने के लिए एक छोटे नाक शंकु का उपयोग करें। कॉर्निया की रक्षा और सूखने से रोकने के लिए संज्ञाहरण प्रेरण के बाद दोनों आंखों पर बाँझ नेत्र मलहम लागू करें। - प्रक्रियाओं के दौरान, एक छोटी नाक शंकु का उपयोग करके 100% ऑक्सीजन का प्रबंधन करें, और पल्स ऑक्सीमेट्री द्वारा पल्स दर और ऑक्सीजन संतृप्ति की निगरानी करें।
नोट: यदि ऑक्सीजन संतृप्ति और पल्स दर क्रमशः 95% और 190 बीपीएम से नीचे गिर जाती है, तो प्रक्रिया को रोक दें और जानवर को सामान्य मूल्यों तक पहुंचने तक पार्श्व डेक्यूबिटस स्थिति में रखें। - छेदक (ऊपरी और निचले) के चारों ओर एल्यूमीनियम मुंह गैग का उपयोग करके चूहे के मुंह को खोलें, इसके साथ जीभ को पीछे हटाएं और मैक्सिला और जबड़े को खुली, आरामदायक कामकाजी स्थिति में स्थिर करें, जिससे मैंडिबुलर दाढ़ तक पहुंच संभव हो सके।
नोट: यदि जानवर को पार्श्व डिक्युबिटस में रखने की आवश्यकता है, तो वसूली के पक्ष में अपनी स्थिति बदलने से पहले मुंह के गैग को हटा दें। एक बार जब जानवर को एनेस्थेटाइज कर दिया जाता है, तो सर्जरी से पहले मसूड़े के क्रेविकुलर द्रव (जीसीएफ) एकत्र करें (बेसल स्थितियों में नमूना) (दिन 0)। - निम्न चरणों द्वारा वर्णित GCF एकत्र करें:
- जानवर को एक सर्जिकल प्लेटफॉर्म पर अपनी पीठ पर रखें और मैक्सिला और जबड़े को एल्यूमीनियम माउथ गैग्स के साथ खुली स्थिति में स्थिर करें।
- कुल चार (प्रत्येक एम 1 के लिए दो) शोषक पेपर बिंदु एनº 30 (0.03 सेमी व्यास x 3 सेमी लंबाई) का उपयोग करके जीसीएफ एकत्र करें, इसे मामूली प्रतिरोध तक एम 1 के मेसियो-पलाटल के चारों ओर मसूड़े की दरार (मसूड़े के उपकला और आसन्न तामचीनी के बीच का स्थान) में सम्मिलित करके। तत्काल हटाने से पहले पेपर बिंदु को कुल 30 सेकंड के लिए एक ही स्थिति में बनाए रखें।
- संग्रह के बाद, पेपर बिंदु को तुरंत प्लास्टिक की शीशी में स्थानांतरित करें, और परख प्रदर्शन तक -80 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।
2. रिटेनटिव लिगेचर तकनीक और इंट्राजिंजिव पीजी-एलपीएस इंजेक्शन
नोट: लिगेचर मॉडल (दिन 0) माइक्रोसर्जिकल उपकरणों का उपयोग करके मसूड़े के सुल्कस के भीतर द्विपक्षीय रूप से एम 1 के चारों ओर एक बाँझ चोटी वाले रेशम लिगेचर (5/0) को रखकर बनाया गया था और इसे पलाटल सतह पर सर्जन की गांठों के साथ सुरक्षित किया गया था। इस्तेमाल किए गए माइक्रोसर्जिकल उपकरणों में माइक्रोसर्जिकल प्लियर्स, एक माइक्रो नीडल होल्डर, एक होलेनबैक कार्वर, एक पेरीओस्टियल माइक्रोसर्जिकल लिफ्ट और माइक्रोसर्जिकल कैंची शामिल थे। एक एलईडी प्रकाश स्रोत के साथ सर्जिकल लूप का भी उपयोग किया गया था (3.6x आवर्धन)।
- सीवन की डिस्टल पूंछ को डेंटिटियन के पैलेटल साइड पर रखें और एम 1 और दूसरे मैक्सिलरी मोलर्स (एम 2) के संपर्क के बीच समीपस्थ खंड डालें।
- सल्कस के भीतर सीवन डालने के लिए पेरीओस्टियल माइक्रोसर्जिकल लिफ्ट का उपयोग करें। एम 1 की सतह के चारों ओर लिगेचर को बहुत सावधानी से लपेटें, क्योंकि इस स्तर पर ऊतक संलग्न जिंजिवा का एक संकीर्ण क्षेत्र पेश करते हैं। पलाटल पहलू पर, सुनिश्चित करें कि सीवन को दोनों सिरों पर कस दिया गया है ताकि यह सुनिश्चित हो सके कि यह मसूड़े के सुल्कस में संचालित हो।
नोट: यदि एम 1 और एम 2 के बीच सीवन डालते समय प्रतिरोध देखा जाता है, तो दंत अन्वेषक और हीरे के लांस के आकार की बर का उपयोग करके संपर्क को थोड़ा खोला जा सकता है। - सीवन के सिरों को सर्जन की गाँठ से बांधें और पूंछ को यथासंभव छोटा करें। सुल्कस में गाँठ डालें।
नोट: सर्जिकल उपकरणों के सुझाव मौखिक आघात और रक्तस्राव का कारण बन सकते हैं। मौखिक गुहा से रक्त को हटाने के लिए धुंध या कपास के फाहे के छोटे खंड तैयार करें और किसी भी रक्तस्राव को रोकने के लिए दबाव लागू करें। माइक्रोसर्जिकल दृष्टिकोण के साथ सावधानीपूर्वक नरम ऊतक प्रबंधन सर्जिकल जटिलताओं को कम करता है और कम ऊतक आघात की ओर जाता है। - लिगेचर पोजिशनिंग के बाद, एम 1 के मेसियो-पलाटल साइड (दिन 0) पर 25 ग्राम बाँझ हाइपोडर्मिक सुई और 1 एमएल सिरिंज के साथ बाँझ लवण में 40 μL Pg-LPS इंजेक्ट करें।
3. प्रक्रिया का अंत
- लिगेशन पोजिशनिंग और पीजी-एलपीएस आवेदन के बाद, चूहे को सर्जिकल अवस्था से छोड़ दें और इसे हीट लैंप के नीचे एक साफ व्यक्तिगत पिंजरे में रखें।
- विरोधी एटिपामेज़ोल (0.5 मिलीग्राम / किग्रा चमड़े के नीचे (एससी)) को 25 ग्राम बाँझ हाइपोडर्मिक सुई और 1 एमएल सिरिंज के साथ इंजेक्ट करें।
- दर्द से राहत के लिए, 0.03 मिलीग्राम / किग्रा ब्यूप्रेनोर्फिन, एससी इंजेक्ट करें।
- जब तक ऑपरेशन के प्रभाव पूरी तरह से उलट न जाएं, तब तक जानवर की वसूली की निगरानी करें। व्यक्तिगत रूप से प्रत्येक चूहे को निरंतर परिस्थितियों (20-24 डिग्री सेल्सियस, 12 घंटे प्रति दिन प्रकाश-अंधेरे चक्र) के तहत उपयुक्त वातावरण में रखें। भोजन और विआयनीकृत पानी की पेशकश करें।
- प्रक्रिया के बाद पहले 2 दिनों के दौरान, जानवरों का वजन करें और दर्द से राहत के लिए दिन में दो बार ब्यूप्रेनोर्फिन एससी इंजेक्ट करें।
नोट: विंडअप प्रभाव को खत्म करने के लिए प्रक्रिया शुरू करने से पहले ब्यूप्रेनोर्फिन को प्रशासित किया जा सकता है। - प्रयोग के समय, सप्ताह में एक या दो बार वजन और सामान्य व्यवहार मूल्यांकन द्वारा जानवरों की निगरानी करें।
4. पोस्ट-प्रक्रिया फॉलो-अप
नोट: बैक्टीरिया बायोफिल्म के संचय और परिणामस्वरूप सूजन को बढ़ावा देने के लिए पीडी के प्रेरण को 14 दिनों तक बनाए रखा गया था। लिगेटर्स की जांच और समायोजन किया जाना है, और पीजी-एलपीएस को प्रति सप्ताह तीन बार इंजेक्ट किया जाता है (दिन 2, दिन 4, दिन 6, दिन 8, दिन 10, और दिन 12)।
- लिगेचर (दिन 2, दिन 4, दिन 6, दिन 8, दिन 10, और दिन 12) की जांच करें और समायोजित करें:
- एनेस्थीसिया इंडक्शन चैंबर का उपयोग करके 100% ऑक्सीजन में 2% आइसोफ्लुरेन के साथ एनेस्थेटाइज करें।
- चूहे को एनेस्थेटाइज्ड करने के बाद, जानवर को उसकी पीठ पर रखें और पशु संज्ञाहरण के रखरखाव के लिए 100% ऑक्सीजन में 1% आइसोफ्लुरेन के साथ प्रक्रिया के दौरान एक छोटे नाक शंकु का उपयोग करें।
- छेदक (ऊपरी और निचले) के चारों ओर एल्यूमीनियम मुंह गैग का उपयोग करके चूहे के मुंह को खोलें, इसके साथ जीभ को पीछे हटाएं और मैक्सिला और जबड़े को खुली, आरामदायक कामकाजी स्थिति में स्थिर करें, जिससे लिगेटर्स तक पहुंच संभव हो सके।
- एक पेरीओस्टियल माइक्रोसर्जिकल लिफ्ट की मदद से जिंजिवा के खिलाफ लिगेटर्स को कसें, और सुनिश्चित करें कि लिगेचर की सीवन डाली गई है, जिससे जिंजिवा के चारों ओर सूजन पैदा होती है।
नोट: यह संभव है कि सर्जरी के 7-10 दिन बाद, लिगेटर्स खो जाते हैं। यदि ऐसा होता है, तो पीजी-एलपीएस (चरण 2.4) के इंजेक्शन के लिए बताए गए प्रोटोकॉल का पालन करें।
- लिगेचर समायोजन के बाद, द्विपक्षीय रूप से 25 ग्राम बाँझ हाइपोडर्मिक सुई के साथ पीजी-एलपीएस के 40 μL और M1 (दिन 2, दिन 4, दिन 6, दिन 8, दिन 10, और दिन 12) के मेसियो-पलाटल पक्ष पर सबजिंजीवल ऊतक में 1 एमएल सिरिंज इंजेक्ट करें।
- एनेस्थीसिया के लिए नाक के शंकु को हटा दें और चूहे को उसके पिंजरे में रखें। एनेस्थीसिया के प्रभाव पूरी तरह से उलट होने तक जानवर की वसूली की निगरानी करें।
5. पशु बलिदान और विश्लेषण
नोट: पीडी की प्रगति का मूल्यांकन करने के लिए विभिन्न विकल्प हैं। यहां, वर्णित विश्लेषण में मसूड़े के क्रेविकुलर द्रव (जीसीएफ) में प्रो-भड़काऊ साइटोकिन्स का मूल्यांकन और वायुकोशीय हड्डी के नुकसान का मूल्यांकन शामिल है।
- अध्ययन के 14 वें दिन (दिन 14), कार्बन डाइऑक्साइड कक्ष में सीओ2 के साथ जानवरों की बलि दें। कृन्तकों के लिए कक्ष मात्रा /मिनट के 30% से 70% की विस्थापन दर की सिफारिश की जाती है।
नोट: इच्छामृत्यु की पुष्टि करने के लिए पेडल रिफ्लेक्स के लिए जानवरों की प्रतिक्रिया की कमी और महत्वपूर्ण संकेतों की अनुपस्थिति को सत्यापित किया जाना चाहिए। - निम्न चरणों द्वारा वर्णित GCF एकत्र करें:
नोट: जीसीएफ पीडी प्रेरण से पहले (सर्जरी से पहले) (दिन 0) और पीडी प्रेरण (बलिदान के बाद) (दिन 14) के बाद एकत्र किया जाता है।- जानवर को एक सर्जिकल प्लेटफॉर्म पर अपनी पीठ पर रखें, और एल्यूमीनियम माउथ गैग्स के साथ खुली स्थिति में मैक्सिला और जबड़ा को स्थिर करें।
- मामूली प्रतिरोध तक एम 1 के मेसियो-पलाटल के चारों ओर मसूड़े की दरार में डालकर अधिशोषक पेपर बिंदु एनº 30 (0.03 सेमी व्यास x 3 सेमी लंबाई) का उपयोग करके जीसीएफ एकत्र करें। तत्काल हटाने से पहले पेपर बिंदु को कुल 30 सेकंड के लिए एक ही स्थिति में बनाए रखें।
- संग्रह के बाद, पेपर बिंदु को तुरंत प्लास्टिक की शीशी में स्थानांतरित करें और परख प्रदर्शन तक -80 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।
- जीसीएफ के भीतर प्रोटीन का मूल्यांकन करने के लिए, निम्नलिखित समाधान तैयार करें और वर्णित क्षालन विधि के चरणों का पालन करें:
नोट: आईएल -1 का मूल्यांकन जीसीएफ (दिन 14) पर निर्माता के प्रोटोकॉल के अनुसार, इम्यूनोसे का उपयोग करके किया जाता है।- क्षालन बफर को ताजा तैयार करें और प्रोटीज गतिविधि को रोकने के लिए इसे पूरी निष्कर्षण प्रक्रिया में बर्फ पर रखें।
- वर्णित क्षालन बफर के लिए आवश्यक सभी समाधान तैयार करें:
- अल्ट्राप्योर पानी में 1 एमएल एप्रोटिनिन (1 मिलीग्राम / एमएल) तैयार करें।
- मेथनॉल में 10 एमएल फेनिलमिथाइलसल्फोनिलफ्लोराइड (पीएमएसएफ) (200 एमएम) तैयार करें।
- क्षालन बफर तैयार करने के लिए पीबीएस समाधान (पीएच = 7.4) के 24.5 एमएल में पीएमएसएफ के 125 μL और Aprotinin के 250 μL जोड़ें।
- 4 डिग्री सेल्सियस पर आंदोलन के तहत 10 मिनट के लिए ताजा तैयार क्षालन बफर के 10 एमएल के साथ एक वाणिज्यिक फॉस्फेट अवरोधक टैबलेट को भंग करें।
नोट: जीसीएफ क्षालन की अवधि सीमित है; पहले 30 मिनट के भीतर फॉस्फेट अवरोधक टैबलेट को जोड़ने के बाद सेंट्रीफ्यूजेशन के लिए तुरंत उपयोग करें। - फॉस्फेट अवरोधक जोड़ने के बाद, पेपर बिंदुओं के साथ सीधे ट्यूब पर पूर्ण क्षालन बफर के 11 μL जोड़ें।
- ट्यूब को 452 x g पर 4 °C पर 5 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज करें।
- एक नई प्लास्टिक की शीशी में इल्यूटेड सामग्री स्थानांतरित करें। 50 μL कुल मात्रा प्राप्त करने के लिए इस प्रक्रिया को चार अतिरिक्त बार दोहराएं।
- अंतिम सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद, पेपर पॉइंट पर सीधे 60 μL की कुल मात्रा जोड़ें, और 4 डिग्री सेल्सियस पर 5 मिनट के लिए 452 x g पर आखिरी बार सेंट्रीफ्यूज करें।
- प्रोटीन मूल्यांकन के लिए आवश्यक मात्रा का उपयोग करें।
- इच्छामृत्यु और जीसीएफ संग्रह के बाद, सर्जिकल कैंची की मदद से, चूहों के बेहतर जबड़े को काट दिया। चूहे के मुखौटे को छीलने की कोशिश करें और जितना संभव हो उतना नरम ऊतक छोड़ दें।
- विज़ुअलाइज़ेशन के लिए माइक्रोस्कोप चरण में जबड़े को रखें और वांछित आवर्धन पर एक तस्वीर लें।
- जबड़े को सीधे पीबीएस में पतला 4% पैराफॉर्मलडिहाइड (पीएफए) में रखें। पूर्ण निर्धारण के लिए 12 दिनों के लिए नए पीएफए के साथ सप्ताह में दो बार पुन: ताज़ा करें।
चेतावनी: पीएफए से जुड़े चरणों को सुरक्षा डेटा शीट सिफारिशों के बाद एक फ्यूम हुड में किया जाना चाहिए। - पूर्ण जबड़े निर्धारण के बाद, शंकु-बीम कंप्यूटेड टोमोग्राफी (सीबीसीटी) स्कैनर का उपयोग करके हड्डी के नुकसान का मूल्यांकन करें, निम्नानुसार:
- PC खोलें।
- CBCT विश्लेषण प्रोग्राम खोलें।
- डेन्चर स्कैन मोड > स्कैन प्रोटोकॉल का चयन करें।
- फील्ड ऑफ व्यू (एफओवी) > (11x8) HIRes (वोल्टेज का 90 kV और धारा का 3 mA) का चयन करें।
- गैन्ट्री में चूहों के निश्चित ऊपरी मैक्सिला रखें।
- अगला क्लिक करें.
- एक्स-रे फायरिंग बटन पर क्लिक करें (उत्सर्जन करने के लिए एक्स-रे रिमोट कंट्रोल दबाएं और इसे स्कैन की पूरी अवधि के लिए दबाए रखें)।
- यदि आवश्यक हो, तो नियंत्रण बटन दबाकर फ्रंटल प्लेन के केंद्र में ऊपरी मैक्सिला को स्थानांतरित करें, फिर एक्स-रे फायरिंग बटन पर क्लिक करें (उत्सर्जन करने के लिए एक्स-रे रिमोट कंट्रोल दबाएं और इसे स्कैन की पूरी अवधि के लिए दबाए रखें)।
- अगला क्लिक करें.
- एक्स-रे फायरिंग बटन पर क्लिक करें (उत्सर्जन करने के लिए एक्स-रे रिमोट कंट्रोल दबाएं और इसे स्कैन की पूरी अवधि के लिए दबाए रखें)।
- यदि आवश्यक हो, तो नियंत्रण बटन दबाकर नकली दांत को विमान के केंद्र में स्थानांतरित करें, फिर एक्स-रे फायरिंग बटन पर क्लिक करें (उत्सर्जन करने के लिए एक्स-रे रिमोट कंट्रोल दबाएं और इसे स्कैन की पूरी अवधि के लिए दबाए रखें)।
- अगला क्लिक करें.
- स्टार्ट बटन पर क्लिक करें (उत्सर्जन करने के लिए एक्स-रे रिमोट कंट्रोल दबाएं और इसे परीक्षा की पूरी अवधि के लिए दबाए रखें)। कोई प्रसंस्करण संदेश प्राप्त होने तक प्रतीक्षा करें, और उसके बाद दिखाए गए निर्देशों का पालन करें.
- एक विंडो दृश्य प्रकट होता है। ग्रे को 65% पर विनियमित करें और लागू करें पर क्लिक करें।
- स्कैन को सहेजने के लिए, फ़ाइल पर क्लिक करें और इसे DICOM प्रारूप में सहेजें। फिर, सभी छवियों पर क्लिक करें और DICOM निर्यात चयन विंडो पर, दिखाए गए सभी पैरामीटर (प्रारंभिक छवि, मूल अक्षीय, पुनर्निर्मित अक्षीय, मल्टीप्लानर) का चयन करें और पूर्वनिर्धारित प्रकार का चयन करें।
- एक विश्लेषण कार्यक्रम का उपयोग करके मैक्सिलरी दाढ़ के दो-आयामी और प्रतिनिधि छवियों को निम्नानुसार संसाधित करें:
- सॉफ़्टवेयर खोलें.
- फ़ाइल और खोलें क्लिक करें, और तब DICOM स्वरूप में छवियों वाले फ़ोल्डर का चयन करें और खोलें क्लिक करें.
- विंडो "8 बिट में कनवर्ट करें" प्रकट होने तक प्रतीक्षा करें, 0 से 6,000 तक की सीमा का चयन करें, और ठीक क्लिक करें।
- कच्ची छवियों पर क्लिक करें।
- रुचि के क्षेत्र को सीमित करने के लिए चयन के शीर्ष और निचले भाग को परिभाषित करें। पहली और अंतिम छवियों की खोज करें जहां वायुकोशीय हड्डी दिखाई देती है और चयन के शीर्ष और चयन आदेशों के निचले भाग के साथ इसका चयन करें।
नोट: दाढ़ की वायुकोशीय हड्डी की प्रतिनिधि दो आयामी छवियों को निर्यात किया जा सकता है, जैसा कि चित्रा 3 ए, बी में है। - प्रतिनिधि छवियों के लिए, टॉगल प्रोफाइल बार पर क्लिक करें।
- तालु के बीच में एक रेखा खींचें और रेस्लाइस मॉडल पर क्लिक करें। ब्याज के क्षेत्र को सीमांकित करने के लिए पैरामीटर निर्धारित करें (स्लाइस स्पेसिंग: 1; स्लाइस की संख्या: 100) और ठीक पर क्लिक करें। रीस्लिकिंग मॉडल समाप्त होने तक प्रतीक्षा करें। अंत में, Resliced छवियों को सहेजें पर क्लिक करें।
नोट: दाढ़ की वायुकोशीय हड्डी की प्रतिनिधि कल्पना निर्यात की जा सकती है, जैसा कि चित्रा 3 सी, डी में है।
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Representative Results
प्रायोगिक चरणों की एक समयरेखा चित्रा 1 में प्रस्तुत की गई है। चित्रा 2 ए सर्जिकल हस्तक्षेप के बाद मंडीबुला की एक छवि दिखाता है, जिसमें प्रयोग के समय 0 पर एम 1 के सल्कस के चारों ओर लिगेचर प्लेसमेंट होता है। चित्रा 2 बी दिखाता है कि कैसे, प्रक्रिया के 14 दिनों के बाद, एम 1 के चारों ओर की लिगेचर मसूड़े के सुल्कस में प्रवेश करती है, जिससे जिंजिवा की सूजन और घुसपैठ संचय होता है।
चित्र 1: चूहों में पीरियोडोंटाइटिस (पीडी) प्रेरण की प्रयोगात्मक प्रक्रिया की समयरेखा का योजनाबद्ध प्रतिनिधित्व। कृपया इस आंकड़े के बड़े संस्करण को देखने के लिए यहां क्लिक करें।
प्रतिनिधि द्वि-आयामी छवियां (चित्रा 3; लाल वर्ग) बेसल नियंत्रण के बीच मंडीबुला में वायुकोशीय हड्डी के नुकसान के अंतर को प्रदर्शित करती हैं, अधिक हड्डी की मात्रा (चित्रा 3 ए) दिखाती हैं, और पीडी स्थापना के बाद, उच्च वायुकोशीय हड्डी हानि दिखाती हैं (चित्रा 3 बी)। इसके अलावा, चित्रों के विश्लेषण से बेसल नियंत्रण समूह (चित्रा 3 सी) की तुलना में पीडी स्थापना के बाद एम 1 (चित्रा 3 डी; लाल तीर) और एम 2 (चित्रा 3 डी; हरा तीर) के इंटररैडिकुलर हड्डी क्षेत्र में अधिक वायुकोशीय हड्डी के नुकसान पर प्रकाश डाला गया है। इसके अलावा, वायुकोशीय हड्डी पुनरुत्थान को सीमेंट तामचीनी जंक्शन (सीईजे) और वायुकोशीय हड्डी शिखा (एबीसी) के बीच की जगह में वृद्धि की विशेषता थी। दोनों चूहे समूहों में सीईजे और एबीसी के बीच की दूरी को नीले तीर के साथ चित्रा 3 सी, डी में दिखाया गया है। बेसल नियंत्रण (चित्रा 3 सी) की तुलना में स्थापित पीडी ने सीईजे और एबीसी (चित्रा 3 डी) के बीच बड़े स्थान विकसित किए।
बलिदान के समय, तालु की छवियों ने विभिन्न समूहों में एम 1 में मसूड़े की मंदी में अंतर प्रस्तुत किया (आंकड़े 4 ए, बी)। पीडी समूह (चित्रा 4 बी) बेसल नियंत्रण समूह (चित्रा 4 ए) की तुलना में हड्डी के समर्थन और जड़ जोखिम के नुकसान के कारण अधिक एपिकल मसूड़े प्रवास दिखाता है। इसके अलावा, पीडी समूह (चित्रा 4 बी) ने बेसल नियंत्रण समूह (चित्रा 4 ए) की तुलना में मैक्सिलरी दाढ़ के आसपास जिंजिवा की अधिक सूजन प्रस्तुत की। चित्रा 4 सी जीसीएफ से प्रो-इंफ्लेमेटरी साइटोकिन आईएल -1 के विश्लेषण के परिणामों को दर्शाता है, जो नियंत्रण समूह की तुलना में पीडी समूह में प्रदर्शित आईएल -1 की काफी अधिक रिहाई दिखाता है। साहित्य के अनुसार, आईएल -1ओ पीरियडोंटाइटिस में सूजन, प्रतिरक्षा विनियमन और हड्डी के पुनरुत्थान में भाग लेता है, और पीरियडोंटल ऊतक विनाश12 का एक मजबूत उत्तेजक है।
चित्र 2: अलग-अलग समय पर एम 1 के सुल्कस में डाली गई लिगेचर की छवियां। (ए) एम 1 के चारों ओर लिगेचर प्लेसमेंट के साथ चूहा तालू, लिगेचर के सम्मिलन के 0 दिन बाद। (बी) एम 1 के चारों ओर लिगेचर प्लेसमेंट के साथ चूहा तालू, लिगेचर के सम्मिलन के 14 दिन बाद। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 3: वायुकोशीय हड्डी और मैक्सिलरी दाढ़ की प्रतिनिधि द्वि-आयामी छवियां। सीबीसीटी द्वारा प्राप्त प्रतिनिधि द्वि-आयामी तस्वीरें (ए) बेसल नियंत्रण के मैक्सिलरी मोलर्स (लाल वर्ग) की वायुकोशीय हड्डी की सीबीसीटी द्वारा प्राप्त की गईं, और (बी) लिगेचर सम्मिलन और पीजी-एलपीएस इंजेक्शन के साथ 14 दिनों के लिए पीरियडोंटाइटिस (पीडी) की स्थापना की। (सी) बेसल नियंत्रण और (डी) पीडी के मैक्सिलरी दाढ़ के प्रतिनिधि द्वि-आयामी दृश्य। लाल तीर एम 1 के इंटररैडिकुलर वायुकोशीय हड्डी क्षेत्र को इंगित करते हैं, नीले तीर सीईजे और एबीसी के बीच की दूरी को इंगित करते हैं, और हरे तीर एम 2 के इंटररैडिकुलर वायुकोशीय हड्डी क्षेत्र को इंगित करते हैं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 4: तालु की प्रतिनिधि छवियां। (ए) बेसल नियंत्रण समूह और (बी) पेरियोडोंटाइटिस (पीडी) समूह के बलिदान के बाद तालु की प्रतिनिधि छवियां, लिगेचर सम्मिलन और पीजी-एलपीएस इंजेक्शन के साथ 14 दिनों तक इलाज किया गया। (सी) बेसल नियंत्रण समूह और पीडी समूह (एन = 9) के जीसीएफ में आईएल -1 + सांद्रता का निर्धारण। ± परिणाम सांख्यिकीय रूप से क्रुस्कल-वालिस द्वारा तुलना की गई थी: * पी < 0.05 पीडी समूह बनाम बेसल नियंत्रण समूह। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
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Discussion
यह विधि पीजी-एलपीएस इंजेक्शन और एम 1 के चारों ओर लिगेचर प्लेसमेंट की एक संयुक्त तकनीक के बाद चूहों में पीडी के प्रेरण का वर्णन करती है, जिससे पता चलता है कि इस विधि के बाद 14 दिनों में पीरियडोंटल ऊतकों और वायुकोशीय हड्डी में महत्वपूर्ण परिवर्तन प्रेरित किए जा सकते हैं।
इस प्रक्रिया के दौरान, विभिन्न महत्वपूर्ण चरणों पर ध्यान दिया जाना चाहिए। पशु संज्ञाहरण और प्रक्रिया की तैयारी के दौरान, शल्य चिकित्सा प्रक्रिया के दौरान उचित संज्ञाहरण का आकलन करना इसकी सफलता के लिए महत्वपूर्ण है, क्योंकि जानवर की सही स्थिति सुनिश्चित करना, छेदक के चारों ओर एल्यूमीनियम मुंह गैग के साथ खुले चूहे के मुंह को स्थिर करना, और गैग और सर्जिकल उपकरणों से जानवरों को चोट लगने से बचना। यदि ऑक्सीजन संतृप्ति और पल्स दर गिर जाती है, तो प्रक्रिया को रोक दिया जाना चाहिए और जानवर को सामान्य मूल्यों तक पहुंचने तक पार्श्व डेक्यूबिटस स्थिति में रखा जाना चाहिए। लिगेचर स्थिति के दौरान, यह आवश्यक है कि सीवन और गाँठ को सुल्कस में सही ढंग से डाला जाए, यह देखते हुए कि नरम ऊतक की चोट को अन्य क्षेत्रों में दर्द और सूजन को रोकने के लिए कम से कम किया जाना चाहिए। जानवरों की भलाई के बारे में नैतिक मुद्दों को ध्यान में रखते हुए, जानवर की वसूली की निगरानी करना आवश्यक है जब तक कि एनेस्थीसिया के प्रभाव पूरी तरह से उलट न जाएं। प्रक्रिया के बाद पहले 2 दिनों के दौरान दर्द की दवा अपरिहार्य है। जानवरों के वजन और व्यवहार की निगरानी करना भी महत्वपूर्ण है, यह आकलन करने के लिए कि चूहा प्रक्रिया को कितनी अच्छी तरह सहन करता है और यह सुनिश्चित करता है कि यह किसी भी चरम संकट का प्रदर्शन नहीं करता है। पीजी-एलपीएस के इंजेक्शन के पोस्ट-प्रक्रिया प्रोटोकॉल के दौरान और एम 1 के चारों ओर सबजिंजीवल ऊतक में लिगेचर के समायोजन के दौरान, सबसे पहले, सूजन बनाने के लिए एक एपिकल स्थिति में लिगेचर को कसना और स्थानांतरित करना महत्वपूर्ण है। दूसरे, मौखिक आघात का कारण नहीं बनने के लिए, देखभाल के साथ पीजी-एलपीएस को द्विपक्षीय रूप से इंजेक्ट करना महत्वपूर्ण है। इसके अलावा, जानवर को एनेस्थेटाइज करते समय देखभाल की जानी चाहिए, और वसूली तक इसकी निगरानी की जानी चाहिए। जीसीएफ के संग्रह के दौरान, कैलिब्रेटेड पेपर को एक ही कुल समय के लिए एक ही स्थिति में बनाए रखा जाना चाहिए, और इसे मेसियो-पलाटल एम 1 के चारों ओर एक ही मसूड़े की दरार पर डालना महत्वपूर्ण है। जीसीएफ क्षालन चरणों के दौरान, वाणिज्यिक फॉस्फेट अवरोधक टैबलेट जोड़ने के तुरंत बाद क्षालन बफर का उपयोग करना महत्वपूर्ण है। प्रोटोकॉल का एक अंतिम महत्वपूर्ण कदम सीबीसीटी स्कैन के दौरान है; नमूने का उचित संरेखण और विश्लेषण का प्रोटोकॉल व्याख्या योग्य परिणाम प्राप्त करने के लिए महत्वपूर्ण है।
पीजी-एलपीएस इंजेक्शन के लिए प्रत्येक जानवर के विशिष्ट जोखिम की भिन्नता और एम 1 के आसपास पुनरावृत्ति को सही सूजन और परिणामस्वरूप हड्डी पुनर्जीवन प्राप्त नहीं करने के कारणों के रूप में शामिल किया जा सकता है। जबकि इस प्रक्रिया का उपयोग करके पीडी के प्रेरण में अच्छे परिणाम प्राप्त किए जाते हैं, प्रोटोकॉल का बारीकी से पालन करके जानवरों के बीच भिन्नता को कम करना महत्वपूर्ण है। विधि के सबसे महत्वपूर्ण संशोधनों में से एक एम 1 के चारों ओर रिटेनटिव लिगेचर को रखना है, न कि एम 2 के आसपास, साहित्य में सबसे पारंपरिक लिगेचर मॉडल 13,14,15। चूहों या चूहों में लिगेचर प्लेसमेंट के लिए ऑपरेटिंग प्रक्रिया तकनीकी कठिनाई प्रस्तुत करती है, और मुराइन मौखिक गुहा औरदांतों के छोटे आकार के कारण कई शोधकर्ताओं के लिए एक संभावित चुनौती का प्रतिनिधित्व करती है। चूहों के उपयोग और एम 1 के चारों ओर लिगेचर रखने से क्षेत्र में हेरफेर और पहुंच की सुविधा मिली, जिसने प्रक्रिया के दौरान जानवर के तनाव को भी कम कर दिया। प्रोटोकॉल के दौरान कोई पशु पीड़ा नहीं देखी गई, लेकिन अगर कोई चूहा संकट के लक्षण दिखाता है, तो पीड़ा को रोकने के लिए उन्हें प्रयोग से हटाने पर विचार करें। अंत में, प्रक्रिया का सबसे सीमित कदम लिगेचर के नुकसान से बचना है, जो सर्जरी के 7-10 दिन बाद हो सकता है। समय के साथ रोग की तीव्रता को बढ़ाने और बनाए रखने के लिए, जिंजिवा ऊतकों के साथ घनिष्ठ संपर्क बनाए रखने के लिए लिगेटर्स को समायोजित करना महत्वपूर्ण है, जिससे जानवरों के बीच पीरियडोंटाइटिस प्रेरण पर तीव्रता की परिवर्तनशीलता को कम कियाजा सके। सामान्य तौर पर, यदि प्रक्रिया सही ढंग से की जाती है, तो किसी भी संशोधन की आवश्यकता नहीं होनी चाहिए, और लगातार परिणाम प्राप्त किए जाएंगे।
यह ध्यान रखना महत्वपूर्ण है कि यह मॉडल कई सीमाएं प्रस्तुत करता है। सबसे पहले, एक दर्दनाक चोट (लिगेचर स्थिति) के कारण पीडी के अध्ययन के लिए एक तकनीक विकसित की गई थी, जिसे बैक्टीरिया के स्थानीय संचय को सुविधाजनक बनाने के लिए माना जाता है और इस तरह पीजी-एलपीएस इंजेक्शन के संयोजन के साथ बैक्टीरिया-मध्यस्थता सूजन और हड्डी के नुकसान को 13,10 में बढ़ाया जाता है। लेकिन, वास्तव में, विधि प्राकृतिक एटियलॉजिकल कारकों की नकल नहीं करती है जो मानव पीरियडोंटाइटिस में माइक्रोबायोटा डिस्बिओसिस के लिए जिम्मेदार हैं और कई अन्य संभावित तंत्रों की नकल नहीं करते हैं जिनके द्वारा पीरियडोंटाइटिस उत्पन्न हो सकता है। इसके अलावा, मुराइन दंत संरचनाएं मानव15 के समान नहीं हैं। इसके अलावा, जबकि प्रस्तुत विधि तीव्र पीडी का अध्ययन करने के लिए प्रभावी है, यह पुरानी पीडी16 में दीर्घकालिक हड्डी के नुकसान और भड़काऊ घुसपैठ विशेषताओं को प्रतिबिंबित नहीं कर सकती है। वायुकोशीय हड्डी के नुकसान के मूल्यांकन के लिए प्रस्तावित पद्धति के साथ विस्तार से, हड्डी के बहुआयामी मूल्यांकन की सबसे अधिक इस्तेमाल की जाने वाली विधि माइक्रो-सीटी है, जो बाहरी कारकों के मूल्यांकन की अनुमति देती है और हड्डी की त्रि-आयामी छवियां प्रदान करती है। इसके अतिरिक्त, त्रिकोणीय हड्डी मापदंडों, हड्डी की मात्रा और हड्डी खनिज घनत्व का विश्लेषण हड्डियों को तोड़ने के बिना किया जा सकता है 14,17। हालांकि, वायुकोशीय हड्डी के नुकसान के आकलन के लिए सीबीसीटी का उपयोग यहां प्रस्तावित किया गया था (चित्रा 3) माइक्रो-सीटी के विकल्प के रूप में; यद्यपि कम रिज़ॉल्यूशन छवियां प्राप्त की जाती हैं, यह पीरियडोंटाइटिस प्रगति 18,19,20 का एक उपयोगी गुणात्मक और मात्रात्मक विश्लेषण भी प्रदान करता है। इसलिए, सीबीसीटी परीक्षाएं इमेजिंग के लिए एक सटीक विधि प्रदान करती हैं, जो माइक्रो-सीटी की तुलना में अधिक उपलब्ध और सुलभ हैं, जो चूहों में पीरियडोंटाइटिस प्रेरण के अध्ययन की सुविधा प्रदान करेगी।
विवो 16 में पीडी की नकल करने के लिए उपयोग किए जाने वाले विभिन्न पशु मॉडलों में से अच्छी तरह से नियंत्रित परिस्थितियों में दांत-सहायक ऊतकों (जिंजिवा और हड्डी) का आकलन करने के लिए, लिगेचर-प्रेरित पीडी मॉडल का बड़े पैमाने पर चूहों, कुत्तों और गैर-मानव प्राइमेट्स13 में उपयोग किया गया है। साहित्य यह भी इंगित करता है कि, कुछ प्रोटोकॉल में उपयोग किए जाने के बावजूद, चूहों का उपयोग - जो एक सुविधाजनक, सस्ती और बहुमुखी मॉडल का प्रतिनिधित्व करता है - चूहों की तुलना में माउस मौखिक गुहा के अपेक्षाकृत छोटे आकार के कारण अधिक तकनीकी चुनौती का परिणामदेता है। अन्य मॉडलों की तुलना में, लिगेचर-प्रेरित पीडी चूहा मॉडल तेजी से रोग प्रेरण सहित कई फायदे प्रदान करता है, जो अनुमानित समय पर शुरू हो सकता है और कुछ दिनों (चूहों और चूहों) के भीतर वायुकोशीय हड्डी के नुकसान में समाप्त हो सकता है। इस विधि के अन्य फायदे हैं, जैसे कि पीरियडोंटल ऊतक और वायुकोशीय हड्डी पुनर्जनन का अध्ययन करने की क्षमता, साथ ही सूजन के स्तर का आकलन करने के लिए सूजन वाले मसूड़े के ऊतकों का पता लगाने और विच्छेदन करने की क्षमता15। एलपीएस इंजेक्शन के साथ लिगेचर-प्रेरित पीडी मॉडल के संयोजन की विधि पीरियडोंटियम में एक स्थानीय विनाशकारी भड़काऊ प्रतिक्रिया जोड़ती है जो संयोजी ऊतक लगाव और लिगेचर द्वारा उत्पन्न वायुकोशीय हड्डी पुनरुत्थान के नुकसान को बढ़ाती है। इस योजक प्रभाव को एलपीएस इंजेक्शन10 की एकाग्रता और आवृत्ति के साथ बढ़ाने की सलाह दी जाती है। यहां बताई गई विधि दोनों तरीकों के फायदे और महत्व के साथ पीजी-एलपीएस इंजेक्शन के साथ लिगेचर के संयोजन का एक अनुकूलित प्रोटोकॉल प्रस्तुत करती है।
पीडी के विवो मॉडल में सुरक्षित और किफायती का अनुकूलन और विकास पीरियडोंटल रोग के रोगजनन की समझ को सुविधाजनक बनाने और नए चिकित्सीय दृष्टिकोणों का परीक्षण करने के लिए महत्वपूर्ण हैं। यहां प्रस्तुत एम 1 के आसपास पीजी-एलपीएस इंजेक्शन और लिगेचर प्लेसमेंट की संयुक्त तकनीक के पीडी मॉडल को एक आकर्षक अध्ययन मॉडल के रूप में मूल्यांकन किया गया है, ताकि मेजबान-माइक्रोब इंटरैक्शन, पीरियडोंटाइटिस में सूजन और वायुकोशीय हड्डी पुनरुत्थान की जांच की जा सके। यह मॉडल प्रोटोकॉल के सबसे महत्वपूर्ण सेटों की पहचान करता है, उन्हें छवि-आधारित तकनीकी विवरण में वर्णित करता है, और इन संयुक्त तकनीकों के उपयोग को मानकीकृत और अनुकूलित करता है। पीरियडोंटाइटिस प्रगति के मूल्यांकन के लिए अतिरिक्त तकनीकों का उपयोग संभव हो सकता है, जिसमें वायुकोशीय हड्डी और आसपास के संलग्न जिंजिवा दोनों के हिस्टोलॉजिकल विश्लेषण, सूजन में शामिल अन्य साइटोकिन्स का निर्धारण और मौखिक माइक्रोबायोटा का लक्षण वर्णन शामिल है। यद्यपि मॉडल मनुष्यों में पीडी के तंत्र या कारणों के सभी पहलुओं को प्रतिबिंबित नहीं कर सकता है, इस अध्ययन से पता चलता है कि हस्तक्षेप के बाद 14 दिनों में पीरियडोंटल ऊतकों और वायुकोशीय हड्डी में महत्वपूर्ण अपक्षयी और भड़काऊ परिवर्तन प्रेरित किए जा सकते हैं, जो भविष्य के प्रीक्लिनिकल निवारक या पीरियडोंटल रोग के लिए उपचार अध्ययन के लिए आधार प्रदान करते हैं।
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Disclosures
लेखक ों ने हितों के टकराव की घोषणा नहीं की है।
Acknowledgments
इस काम को फंडासियो यूनिवर्सिटेट-एम्प्रेसा डे लेस इलेस बेलियर्स (अवधारणा कॉल 2020 का प्रमाण), इंस्टीट्यूटो डी सालुड कार्लोस III, मिनिस्टरियो डी इकोनोमिया वाई कॉम्पेटिविडैड द्वारा समर्थित किया गया था, जो ईएसएफ यूरोपीय सामाजिक कोष और ईआरडीएफ यूरोपीय क्षेत्रीय विकास कोष (एमएमबी के लिए अनुबंध) द्वारा सह-वित्त पोषित था। FI18/00104) और Direccio जनरल डी'Investigació, Conselleria d'Investigacio, गवर्न बालियर (M.M.F.C. के लिए अनुबंध; एफपीआई/040/2020)। अन्ना टॉमस और मारिया टोर्टोसा को इडआईएसबीए के प्रयोगात्मक सर्जरी और मंच पर उनकी मदद के लिए धन्यवाद। अंत में, सीबीसीटी स्कैनर तक पहुंच के लिए एडीईएमए स्कूल ऑफ डेंटिस्ट्री के लिए धन्यवाद।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Adsorbent paper point nº30 | Proclinc | 8187 | |
| Aprotinin | Sigma-Aldrich | A1153 | |
| Atipamezole | Dechra | 573751.5 | Revanzol 5 mg/mL |
| Braided silk ligature (5/0) | Laboratorio Arago Sl | 613112 | |
| Buprenorphine | Richter pharma | 578816.6 | Bupaq 0.3 mg/mL |
| Cone-beam computed tomography (CBCT) Scanner | MyRay | hyperion X9 | Model Hyperion X9 |
| CTAn software | SkyScan | Version 1.13.4.0 | |
| Dental explorer | Proclinc | 99743 | |
| Diamond lance-shaped bur | Dentaltix | IT21517 | |
| Food maintenance diet | Sodispain research | ROD14 | |
| Heated surgical platform | PetSavers | ||
| Hollenback carver | Hu-FRIEDY | HF45234 | |
| Hypodermic needle | BD | 300600 | 25G X 5/8” - 0,5 X 16 MM |
| Isoflurane | Karizoo | Isoflutek 1000mg/g | |
| Ketamine | Dechra | 581140.6 | Anesketin 100 mg/mL |
| Lipopolysaccharide derived from P.Gingivalis | InvivoGen | TLRL-PGLPS | |
| Methanol | Fisher Scientific | M/4000/PB08 | |
| Micro needle holter | Fehling Surgical Instruments | KOT-6 | |
| Microsurgical pliers | KLS Martin | 12-384-06-07 | |
| microsurgical scissors | S&T microsurgical instruments | SDC-15 RV | |
| Monitor iMEC 8 Vet | Mindray | ||
| Multiplex bead immunoassay | Procartaplex, Thermo fisher Scientific | PPX-05 | |
| Paraformaldehyde (PFA) | Sigma-Aldrich | 8187151000 | |
| Periosteal microsurgical elevator | Dentaltix | CU19112468 | |
| Phenylmethylsulfonylfluoride (PMSF) | Roche | 10837091001 | |
| Phosphate Buffer Solution (PBS) | Capricorn Scientific | PBS-1A | |
| PhosSTOP | Roche | 4906845001 | Commercial phosphatase inhibitor tablet |
| Plastic vial | SPL Lifesciencies | 60015 | 1.5mL |
| Saline | Cinfa | 204024.3 | |
| Stereo Microscope | Zeiss | Model SteREO Discovery.V12 | |
| Surgical loupes led light | Zeiss | ||
| Surgical scissors | Zepf Surgical | 08-1701-17 | |
| Syringe | BD plastipak | 303172 | 1mL |
| Veterinary dental micromotor | Eickemeyer | 174028 | |
| Xylazine | Calier | 20102-003 | Xilagesic 20 mg/mL |
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