Larval Locomotion Assay: High-Throughput-Methode zur Untersuchung der neurobehavioralen Toxizität einer Verbindung in Zebrafischlarven

Overview

Dieser Artikel beschreibt die Verhaltensreaktion von Zebrafischen auf toxische Verbindungen durch Überwachung der Larvenfortbewegung. Das Protokoll untersucht ferner ein Beispiel für die Reaktion von Zebrafischlarven auf Umweltschadstoffe.

Protocol

1. Vorbereitung auf den Verhaltenstest

1. Übertragen Sie 800 l Belichtungslösung in jeden Brunnen der 48 Well-Mikroplatte.
   HINWEIS: Verwenden Sie 16 Bohrungen für jede Gruppe (d. h. die Steuerungslösung, 5 g/l und 50 g/l-Gruppe).
2. Verwenden Sie eine 1 ml Pipettenspitze, um 200 l Belichtungslösung mit einer Larve aus der glasigen Petrischale in einen Brunnen der 48 Well-Mikroplatte zu übertragen.
3. Übertragen Sie 4 ml Belichtungslösung in jeden Brunnen der 6 Well-Mikroplatte.
   HINWEIS: Verwenden Sie eine 6 Well Mikroplatte für jede Gruppe.
4. Verwenden Sie eine 1 ml Pipettenspitze, um 200 l Belichtungslösung mit zwei Larven in jeden Brunnen der 6 Well-Mikroplatte zu übertragen.
   HINWEIS: Jede Gruppe hat sechs sich wiederholende Gruppen.
5. Stellen Sie vor dem Test sicher, dass die Temperatur des Prüfraums 28 °C 2 h beträgt.
   HINWEIS: Verhaltenstests werden in der Regel am Nachmittag durchgeführt.

2. Bewegungs- und Pfadwinkelprüfung

1. Speichern Sie das Protokoll, und schalten Sie das Licht des Testraums aus.
2. Akklimatisieren Sie die Larven im System für 10 min und klicken Sie auf die Schaltfläche "Experiment" "Ausführen",wählen Sie dann den Ordner aus, in dem die Experimentierdateien gespeichert werden, und geben Sie den Ergebnisnamen ein.
3. Klicken Sie auf die Schaltfläche "Hintergrund" "Starten", um den Test zu starten.
4. Klicken Sie auf die Schaltfläche "Experiment" "Stop", um das Experiment zu beenden, wenn der Test endet.
   HINWEIS: Das System zeigt die daten an, die beim Anhalten des Systems getestet wurden. Die Daten umfassen den verfolgten Abstand bei drei Geschwindigkeitsklassen und Pfadwinkelnummern bei acht Winkelklassen pro Minute. Für den Fortbewegungstest im vorgestellten Beispiel wird die Gesamtentfernung in jeder Lichtperiode (10 min) berechnet und die Differenz zwischen der Kontrollgruppe und den Behandlungsgruppen verglichen.
5. Übertragen Sie die 48 Well-Mikroplatte für andere Experimente zurück auf den Licht-Inkubator.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
48-well-microplate	Corning	3548	Embyros housing
6-well-microplate	Corning	3471	Embyros housing
Zebrabox	Viewpoint	ZebraBox	Behavior instrument
ZebraLab	Viewpoint	ZebraLab	Behavior software
Pipette	Eppendorf	3120000267	Transfer solution