Automatic Translation

This translation into Norwegian was automatically generated through Google Translate.
English Version | Other Languages

 JoVE Chemistry

En Aptamer basert sensor for uchelatert gadolinium (III)

1, 1, 1, 1, 1

1Department of Chemistry and Biochemistry, California State University, East Bay

Article
    Downloads Comments Metrics Publish with JoVE

    You must be subscribed to JoVE to access this content.

    Enter your email to receive a free trial:

    Welcome!

    Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!


    Admit it, you like to watch.

     

    Summary

    Cite this Article

    Edogun, O., Chan, T. Y., Nguyen, N. H., Luu, A., Halim, M. An Aptamer-based Sensor for Unchelated Gadolinium(III). J. Vis. Exp. (119), e55216, doi:10.3791/55216 (2017).

    Introduction

    Den økende betydning av magnetisk resonansavbildning (MRI) i klinisk diagnose, som er begrenset av den iboende følsomheten av teknikken, har resultert i den raske veksten av forskning på utvikling av nye gadolinium-baserte kontrastmidler (GBCAs) 1. GBCAs er molekyler som administreres for å forbedre bildekvaliteten, og de vanligvis har den kjemiske strukturen av et treverdig ion gadolinium (Gd 3+) koordinert til en polydentat ligand. Dette kompleks er av avgjørende betydning som uchelatert Gd 3+ er giftig; det har vært innblandet i utviklingen av nefrogen systemisk fibrose hos noen pasienter med nyresykdom eller fiasko 2. Følgelig, oppdager den vandige fri ion er instrumental i å sikre sikkerheten til GBCAs. Tilstedeværelsen av uchelatert Gd 3+ i gbca løsninger ofte er resultatet av en ufullstendig reaksjon mellom liganden og den ion, dissosiasjon av komplekset, eller fortrengningt av andre biologiske metallkationer 3.

    Blant de mange teknikker som for tiden anvendes for å bestemme tilstedeværelsen av Gd 3+, de som er avhengig av kromatografi og / eller spektrometri rang høyest når det gjelder fleksibilitet og anvendbarhet 4. Blant deres styrke er høy følsomhet og nøyaktighet, evnen til å analysere ulike eksempel matriser (inkludert humant serum 5, urin og hår 6, 7 avløpsvann, og kontrastmiddel formuleringer 8), og den samtidige kvantifisering av flere Gd 3 + komplekser (en liste studier før 2013 er beskrevet i en omfattende gjennomgang av Telgmann et al.) 4. Den eneste ulempen er at flere av disse metodene krever besetninger (som induktivt koplet plasma-massespektrometri) 4 at noen laboratorier kanskje ikke har tilgang til. Innenfor rammen av romanen gbca funn i forskning og proof-of-concept nivåer, arelatively mer praktisk, rask og kostnadseffektiv spektroskopisk basert metode (for eksempel UV-Vis absorpsjon eller fluorescens) kan tjene som et verdifullt alternativ. Med disse programmene i tankene, var en fluorescerende aptamer basert sensor for vann Gd 3+ utviklet ni.

    Den aptamer (Gd-aptamer) er et 44-base-lang enkelt-trådet DNA-molekyl med en spesifikk sekvens av baser som ble isolert gjennom prosessen med systematiske utskilling av ligander med eksponensiell anrikning (SELEX) 9. For å tilpasse den aptamer til en fluoriserende sensor, er en fluorofor festet til 5'-terminale ende av tråden, som deretter hybridisert med en slukke tråd (QS) via 13 komplementære baser (figur 1). QS er merket med en mørk quencher molekyl ved 3'-terminus. I fravær av Gd 3+, føleren (Gd-sensor), som består av en 1: 2 molforhold av Gd-aptamer og QS henholdsvis, vil ha minimal fluorescens-emisjon på grunn av to energioverføring fra fluoroforen til drikk. Tilsetningen av vandig Gd 3+ vil fortrenge QS fra Gd-aptamer, noe som resulterer i en økning i fluorescensemisjon.

    Figur 1
    Figur 1. Sensor (Gd-sensor) som består av 44-base-lang aptamer (Gd-aptamer) merket med fluorescein (en fluorofor) og 13-base-quenching lang tråd (QS) merket med dabcyl (en mørk quencher) . I fravær av uchelatert Gd 3+, fluorescensen av sensoren er minimal. Under tilsetning av Gd 3+, forskyvning av QS inntreffer og en økning i fluorescensemisjon observeres. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

    Det finnes i dag, en vanlig brukt spektroskopisk basert metode for å detektereing vandig Gd 3+. Denne analysen anvender molekylet xylenolorange, som gjennomgår en forskyvning i den maksimale absorpsjon bølgelengde 433-573 nm ved chelatering å ionet 10. Forholdet mellom disse to absorbans maksima kan brukes til å kvantifisere mengden av uchelatert Gd 3+. Den aptamer sensoren er et alternativ (kan også være komplementær) til den xylenolorange assay, som de to metodene har forskjellige reaksjonsbetingelser (for eksempel pH og sammensetningen av de bufferoppløsninger som brukes), mål-selektiviteter, lineære områder av kvantifisering, og deteksjons modaliteter 9.

    Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

    Protocol

    MERK: Molecular biology grade vann brukes i alle buffer og løsningsmidler. Alle disponibel rør (mikrosentrifugerør og PCR) og pipettespisser er DNase- og RNase-fritt. Vennligst se dataarket for materialsikkerhet (MSDS) for alle kjemikalier før bruk. Bruk av egnet personlig verneutstyr (PVU) anbefales sterkt.

    1. Utarbeidelse av Aptamer Stock Solutions

    1. Kjøp 2 tråder polydeoxynucleotide kommersielt. Bestille begge tråder med rensing ved hjelp av væskekromatografi med høy ytelse (HPLC).
      Strand 1 (Gd-aptamer):
      5 '- / 56-FAM / AGGCTCTCGGGACGACCAGTTGGTCCCGCTTTATGTGTCCCGAG-3'
      Strand 2 (QS):
      5'-GTCCCGAGAGCCT / 3Dab / -3 '
    2. Oppløs hver tråd i vann for å gi 100 uM individuelle forrådsoppløsninger av Gd-aptamer og den QS.
    3. Oppbevar disse løsningene ved -20 ° C. Løsningene er stabile så langt, i 3 år.
    4. For å minimere Freeze-tine sykluser, lagre stamløsninger i 10 ul porsjoner.

    2. Utarbeidelse av 2x Gd-sensor Solution

    1. Klargjør analysebuffer (20 mM HEPES, 2 mM MgCl2, 150 mM NaCl, 5 mM KCl). Juster pH til ~ 7,4 med NaOH og HCl og filtreres gjennom sterile engangsflaske toppfiltre med 0,2 um PES membran. Oppbevar i sterile flasker. Hvis filtrert og lagret på riktig måte (ved romtemperatur), er buffer stabil hittil, i 2 år.
    2. Fortynn 1 mL av Gd-aptamer lagerløsning (fra trinn 1,2) og 2 pl av QS-stamløsningen (fra trinn 1.2) i 497 ul av analysebufferen. Bland godt ved hjelp av en vortex. Deres konsentrasjoner i den 2x Gd-sensor løsning er 200 nM og 400 nM, respektivt.
      MERK: volum av 2x Gd-sensor oppløsning fremstilt i dette trinnet er 500 ul, som er tilstrekkelig til å teste 6 - 7 varierende konsentrasjoner av Gd 3+ for kalibreringskurve, og de kontrastmiddeloppløsninger(Trinn 3). Hver prøve vil gi to brønner i en 384-brønners plate.
      1. Juster volumet av den 2x Gd-sensor løsning i henhold til antallet av Gd 3+ løsninger som skal testes.
    3. Overfør 2x Gd-sensor oppløsning til 9 PCR-rørene, sammen med 50 ul i hver tube. Plasser rørene i en termosykler.
    4. Sette programmet i den termosykler for å varme opp oppløsningen i rørene til 95 ° C, holde i 5 minutter, og deretter langsomt avkjøles oppløsningene til 25 ° C i løpet av ~ 15 min (med en hastighet på ~ 0,05 til 0,1 ° C / s). Oppvarming og kjøling syklusen er å sikre optimal hybridisering mellom Gd-aptamer og QS. Partielle hybridiserings resulterer i ufullstendig bråkjøling og høyere bakgrunnsfluorescens av sensoren. Hvis en termosykler ikke er tilgjengelig, gjennomføre denne prosessen ved hjelp av et varmt vannbad i stedet.
    5. Når avkjølt til 25 ° C, straks bruke oppløsningen eller holde den termiske cycler (opp til ca. 2 timer) inntil de er klare til å blianvendes. Når et vannbad brukes for oppvarming, la rørene i badekaret som vannet langsomt avkjøles til romtemperatur.

    3. Konstruksjon av fluorescens Kalibreringskurve og påvise tilstedeværelse av uchelatert Gd 3+ i en løsning av Gd kontrastmiddel

    1. Oppløs GdCl 3 fast i analysebuffer (den samme buffer som i trinn 2.1).
    2. Gjennom serie fortynning, forberede 100 mL hver av 6 forskjellige Gd 3+ løsninger i mikrosentrifugerør på dobbelt av de endelige ønskede konsentrasjoner for kalibreringskurven (2x løsninger).
      1. For eksempel, for å konstruere en kalibrerings for 0 (buffer bare uten GdCl 3), 50, 100, 200, 400, og 800 nM av Gd 3+, fremstille oppløsninger inneholdende 0, 100, 200, 400, 800 og 1600 nM av ionet. Sørg for å alltid inkludere 'blank' med 0 nM Gd 3+ som negativ kontroll.
    3. Løs opp kontrastmiddel for å være tested i analysebufferen. Forbered 2 eller 3 forskjellige konsentrasjoner av kontrastmiddelet løsninger via seriell fortynning.
      MERK: Testing 3 forskjellige konsentrasjoner av kontrastmiddeloppløsningen anbefales. Dette er for å sikre at disse konsentrasjoner er innenfor det lineære området. Hvis prøvene som ble testet ikke vise et lineært forhold, reduserer konsentrasjonen av kontrastmidlet benyttes.
    4. Ta PCR-rør inneholdende den 2x Gd-sensor løsning fra trinn 2.5 av den termosykler.
    5. Tilsett 50 mL av hver Gd 3+ løsning fra trinn 3,2 til 6 av de 9 PCR-rør inneholdende den 2x Gd-sensor løsning. Bland ved å pipettere opp og ned. Hver PCR-røret inneholder nå den ønskede konsentrasjon av Gd 3+ som skal testes, 100 nM Gd-aptamer, og 200 nM QS.
    6. Til de øvrige PCR-rør inneholdende den 2x Gd-sensor løsning, tilsett 50 pl av kontrastmiddeloppløsninger fra trinn 3.3. Bland godt ved å pipettere opp og ned et par ganger.
    7. Inkuber s-vedtak i PCR-rørene for rundt fem minutter ved romtemperatur. De kan stå i opp til 30 min.
    8. Overfør 45 ul av hvert rør inn i en 384-brønners plate. Hver PCR rør vil gi to brønner hver.
    9. Spill fluorescens av hver brønn på en plate-leser. Fluoroforen (FAM) som brukes i Gd-sensor design har eksitasjon og emisjon maxima av 495 og 520 nm henholdsvis som er oppført på leverandørens hjemmeside. Velge passende eksitasjons- og emisjonsbølgelengder eller filtere, avhengig av om det plateleser er monochromator- eller filterbasert.
    10. Plott grafen av fluorescens i vilkår fluorescens enheter (AFU) mot konsentrasjonen av Gd 3+.
    11. Plott grafen som fluorescens ganger endring mot konsentrasjonen av Gd 3+. Beregn fluorescens ganger endring ved å dele AFU av hver konsentrasjon av AFU av 'blank' løsning (med 0 nM Gd 3+). Fluorescens ganger endring vil tillate for normalization av resultatene, bør den AFU vise noen tidsskrift (forskjellige dager, etc.) varianter.
    12. Sammenlign fluorescensemisjonen av oppløsningen som inneholder kontrastmidlet og den "blanke", som er den oppløsning inneholdende 0 nM GdCl 3 (buffer only).
      MERK: En høyere fluorescens av den gbca løsning innebærer tilstedeværelse av uchelatert Gd 3+, noe som kan nødvendiggjøre ytterligere rensing av kontrastmidlet. Mengden av uchelatert Gd 3+ til stede, kan bestemmes ved hjelp av kalibreringskurve konstruert i trinn 3,10 eller 3,11.

    Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

    Representative Results

    En typisk fluorescens forandring av Gd-sensoren oppløsning i nærvær av uchelatert Gd 3+ er vist i figur 2. Utslippet kan bli plottet som fluorescensen ganger endring (figur 2A) eller den rå fluorescens-leser (figur 2B) i vilkårlige enheter (AFU). Begge plottene, hvilket ga svært lignende kalibreringskurver med et lineært område for konsentrasjoner av Gd 3+ under 1 um og metning av signalet ved> 3 uM. Påvisningsgrensen er ~ 100 nM med en signal-til-støyforhold 3.

    I oppløsninger inneholdende gbca av interesse, vil nærværet av uchelatert Gd 3+ settes til et fluorescens økning av sensoren i forhold til den "blanke" løsning. Fluorescens endringer i løsninger av 2 forskjellige grupper av Gd-DOTA-komplekset, en høyere renhet enn den andre, er visn som eksempler på representative resultater (figur 3). Gd-DOTA (gadoteric syre) er et gadoliniumkompleks av Gd 3+ omgitt av en organisk ligand DOTA som er funnet i en kommersiell kontrastmiddel. Porsjonen av høyere renhet ikke viser en betydelig økning i utslipp opp til 20 mM Gd-DOTA. Når uchelatert Gd 3+ er til stede, er en endring som er merkbar selv ved Gd-DOTA konsentrasjoner under 5 mM observert. I dette eksempel hvor datapunktene er plottet som fluorescens ganger endring av sensoren, kan kvantifisering av mengden av uchelatert Gd 3+ bestemmes ved hjelp av kalibreringskurven i figur 2A.

    Figur 2
    Figur 2. Representative Gd-sensor fluorescens kalibreringskurve plott. Alle datapunkter ble utført minst i duplikat og den gjennomsnittlige verdier plottetted med standardavvik som feilfelt. (A) En kalibreringskurve oppnådd ved anvendelse av 100 nM Gd-aptamer og 200 nM QS. Grafen er plottet med fluorescens ganger endring som y-aksen. (B) Den samme kalibreringskurve som i (A) med rå fluorescens i vilkårlige enheter (AFU) som y-aksen. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

    Figur 3
    Figur 3. Representant Gd-sensor fluorescens endring ved testing av tilstedeværelsen av uchelatert Gd 3+ i prøver av Gd-DOTA-molekylet. To forskjellige satser av Gd-DOTA komplekse løsninger er vist i dette plottet, en med høyere renhet (sirkel markør), og den andre inneholdende uchelatert Gd 3+ (blå triangle markør). Hvert datapunkt er et gjennomsnitt av to målinger med standardavvik som feilstolpene. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

    Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

    Discussion

    Ved hjelp av aptamer-baserte Gd-sensor, en økning i fluorescensemisjon som er proporsjonal med konsentrasjonen av uchelatert Gd 3+ observeres. Å minimalisere mengden av prøve som brukes, kan analysen bli kjørt i en 384-brønners mikroplate med et totalt prøvevolum på 45 ul pr brønn. I denne designen, ble valget av fluorescein (FAM) og dabcyl (DAB) i hovedsak basert på kostnaden av reagenser; for å modifisere emisjonsbølgelengden, en annen sammenkobling av fluorofor og slukkeren kan brukes 11.

    Det er viktig å merke seg at for å oppnå det beste resultat med sensoren, er en av de kritiske trinn av oppvarming til 95 ° C og langsom avkjøling (trinn 2.4) i analysebuffer for å oppnå optimal hybridisering mellom Gd-aptamer og QS tråder. Som tidligere nevnt i protokollen, hvis en termosykler er ikke tilgjengelig, inkubering ved 95 ° C kan utføres i et vannbad. En annen viktig parameter for å kontrollere er than sammensetninger av de bufferløsninger; bruk av analysebufferen angitt i trinn 2.1 for å oppløse kontrastmidlet er anbefalt, eller deionisert vann kan også anvendes. Imidlertid bør løsninger som inneholder potensielle interfererende unngås. Et eksempel på en slik buffer er en som inneholder fosfat-anioner, som kan koordinere til uchelatert Gd 3+ for å danne uoppløselig gadolinium fosfat 12. Bunnfallet vil ikke reagere med sensoren, noe som resulterer i et falskt negativt resultat.

    Noen få skritt i forsøkene kan modifiseres uten å påvirke utfallet. Først, for å forenkle analysen og beregning, fremstille både Gd-sensor-løsning og den vandige GdCl 3 for kalibreringskurven ved 2x konsentrasjoner. Om ønsket, kan andre fortynningsfaktorer benyttes (for eksempel 10x oppløsninger), forutsatt at de endelige analyse konsentrasjoner av Gd-aptamer og QS blir holdt ved 100 nM og 200 nM, respektivt. For det andre, det analysebuffer does ikke trenger å være nøyaktig pH 7,4. En hvilken som helst verdi mellom 7 til 7,4 vil frembringe den ønskede fluorescensen øker, så lenge den samme bufferen brukes gjennom hele eksperimentet. For det tredje, når lese fluorescensemisjonen er oppnådd, datapunktene kan plottes, enten som rå fluorescens i vilkårlig enhet (AFU) eller som fluorescens ganger endring. For å beregne den fluorescens ganger endring, er det rå fluorescens lesning av hver konsentrasjon normalisert til (dividert) avlesningen av den negative kontroll (0 nM Gd 3+). Som vist i figurene 2A og B, fluorescensemisjonen trendene i begge plottene er nesten identiske. The ganger endring kan være en mer praktisk måte å analysere dataene hvis platen leseren viser noen variasjoner i de rå målinger registrert til forskjellige tider. Til slutt, hvis er utstyrt laboratoriet med et fluorometer, men ikke en plateleser, hvert datapunkt kan måles ved anvendelse av en kyvette, i stedet for en mikroplate. Avhengig av størrelsen of de tilgjengelige kyvettene, kan volumene av løsningene fremstilt i analysen må justeres.

    Den metode som er rapportert heri, er et alternativ til chromatographic- og / eller spektrometriske-baserte metoder for å påvise, vandig Gd 3+. I forhold til sistnevnte, er det Gd-sensor analysen mer begrenset når det gjelder følsomhet, nøyaktighet og mulighet for samtidig påvisning av multiple arter. På den annen side krever den spektroskopiske-baserte sensor en instrumentering som muligens kan være lettere tilgjengelig, kan utføres innenfor en kortere tidsperiode, og prøvepreparering er minimal. Kontrastmidlet kan ganske enkelt er oppløst i bufferoppløsning, blandet med Gd-sensorløsninger, og fluorescensemisjonen direkte målt. Dessuten er sensoren i stand til å detektere en mye lavere konsentrasjon av uchelatert Gd 3+ enn xylenolorange indikatoren (omtrent 2 størrelsesordener forskjell mellom de to fremgangsmåter) og har enhøyere selektivitet for Gd 3+ over flere andre biologisk viktige og overgangsmetallioner 9.

    Det er to ulemper med denne analysen som kan begrense dets anvendelse under visse eksperimentelle betingelser. En begrensning er at sensoren er ikke spesifikke for Gd 3+; det viser en respons til andre lantanidioner (som Eu 3+ og Tb 3+) 9. Dette er imidlertid ikke ioner som vanligvis finnes i kontrastmidler eller de biologiske systemer, og derfor deres interferens er minimal. Det andre punkt å merke seg er at ved høyere konsentrasjoner (over ~ 10 pM) av Gd 3+, en gradvis reduksjon i Gd-sensoren fluorescensemisjonen observeres. Virkningen av bråkjøling av lantanidioner er et godt dokumentert fenomen 13 som også har vært brukt som en teknikk for å detektere og kvantifisere dem 14. Selv om dette begrenser anvendeligheten av den sensor for å måle høye konsentrasjoner av Gd 3+

    I dette arbeidet, har anvendelse av en gunstig fluorescens-baserte teknikk for detektering av giftige uchelatert Gd 3+ i vandig oppløsning er beskrevet. Denne analysen er ment for tidlig stadium evaluering av gadolinium-baserte kontrastmiddel renhet, spesielt i løpet av syntesen og formuleringen for in vitro eksperimenter. Med dagens vekst av magnetisk resonans i diagnose, er et økende antall nye kontrastmidler stadig utviklet og testet. Den aptamer-baserte Gd-sensor vil forenkle denne utviklingen ved å tilveiebringe en anordning for hurtig påvisning av nærvær av sub-mikromolare konsentrasjoner av ureagert eller dissosiert Gd 3+ i vandig oppløsning ved omgivelses pH. Videre, siden sensoren viser kryss-reaktivitet med andre treverdige lantanidioner, kan dens anvendelse væreutvidet til disse områdene av forskning.

    Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

    Disclosures

    Materials

    Name Company Catalog Number Comments
    Gd-aptamer IDTDNA Input sequence and fluorophore modification in the order form A fluorophore with a different emission wavelength may be used. The aptamer may also be ordered from another company.
    Quenching strand IDTDNA Input sequence and quencher modification in the order form A different quencher for optimal energy transfer from the fluorophore may be used. The aptamer may also be ordered from another company.
    Molecular biology grade water No specific manufacturer, both DEPC or non-DEPC treated work equally well
    Gadolinium(III) chloride anhydrous Strem 936416 Toxic
    HEPES Fisher Scientific BP310-500
    Magnesium chloride anhydrous MP Biomedicals 0520984480 - 100 g
    Sodium Chloride Acros Organics 327300025
    Potassium chloride Fisher Scientific P333-500
    Sodium hydroxide, pellets Fisher Scientific BP359 Corrosive
    Hydrochloric acid Fisher Scientific SA49 Toxic and corrosive
    384-well low flange black flat bottom polystyrene NBS plates Corning 3575 Plates which are suitable for fluorescence reading are required.
    Nalgene Rapid-Flow sterile disposable bottle top filter Thermo Scientific 5680020 The bottle top is fitted with 0.2 micron PES membrane
    Disposable sterile bottles 250 mL Corning 430281 A larger or smaller bottle may be used
    1.5 mL microcentrifuge tubes No specific manufacturer, as long as they are DNAse and RNAse-free
    0.2 mL PCR tubes No specific manufacturer, as long as they are DNAse and RNAse-free
    Micropipets No specific manufacturer
    Pipet tips (non filter) of appropriate sizes No specific manufacturer, as long as they are DNAse and RNAse-free
    Equipment
    Plate reader Biotek Synergy H1 Plate readers from other manufacturers would work equally well

    References

    1. Shen, C., New, E. J. Promising strategies for Gd-based responsive magnetic resonance imaging contrast agents. Curr. Opin. Chem. Biol. 17, (2), 158-166 (2013).
    2. Cheong, B. Y. C., Muthupillai, R. Nephrogenic systemic fibrosis: a concise review for cardiologists. Tex. Heart Inst. J. 37, (5), 508-515 (2010).
    3. Hao, D., Ai, T., Goerner, F., Hu, X., Runge, V. M., Tweedle, M. MRI contrast agents: basic chemistry and safety. J Magn. Reson. Imaging. 36, (5), 1060-1071 (2012).
    4. Telgmann, L., Sperling, M., Karst, U. Determination of gadolinium-based MRI contrast agents in biological and environmental samples: a review. Anal. Chim. Acta. 764, 1-16 (2013).
    5. Frenzel, T., Lengsfeld, P., Schirmer, H., Hütter, J., Weinmann, H. -J. Stability of gadolinium-based magnetic resonance imaging contrast agents in human serum at 37 degrees C. Invest. Radiol. 43, (12), 817-828 (2008).
    6. Loreti, V., Bettmer, J. Determination of the MRI contrast agent Gd-DTPA by SEC-ICP-MS. Anal. Bioanal. Chem. 379, (7), 1050-1054 (2004).
    7. Telgmann, L., et al. Speciation and isotope dilution analysis of gadolinium-based contrast agents in wastewater. Environ. Sci. Technol. 46, (21), 11929-11936 (2012).
    8. Cleveland, D., et al. Chromatographic methods for the quantification of free and chelated gadolinium species in MRI contrast agent formulations. Anal. Bioanal. Chem. 398, (7), 2987-2995 (2010).
    9. Edogun, O., Nguyen, N. H., Halim, M. Fluorescent single-stranded DNA-based assay for detecting unchelated gadolinium(III) ions in aqueous solution. Anal. Bioanal. Chem. 408, (15), 4121-4131 (2016).
    10. Barge, A., Cravotto, G., Gianolio, E., Fedeli, F. How to determine free Gd and free ligand in solution of Gd chelates. A technical note. Contrast Med. Mol. Imaging. 1, (5), 184-188 (2006).
    11. Johansson, M. K. Choosing reporter-quencher pairs for efficient quenching through formation of intramolecular dimers. Methods Mol. Biol. 335, 17-29 (2006).
    12. Sherry, A. D., Caravan, P., Lenkinski, R. E. A primer on gadolinium chemistry. J. Magn. Reson. Imaging. 30, (6), 1240-1248 (2009).
    13. Shakhverdov, T. A. A cross-relaxation mechanism of fluorescence quenching in complexes of lanthanide ions with organic ligands. Opt. Spectrosc. 95, (4), 571-580 (2003).
    14. Brittain, H. G. Submicrogram determination of lanthanides through quenching of calcein blue fluorescence. Anal. Chem. 59, (8), 1122-1125 (1987).

    Comments

    0 Comments

    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Metrics

    Waiting
    simple hit counter