Name: أساليب لتصحيح تسجيلات السعة المشبك من كاليكس (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-29T00:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 58 s
Description: تعلم تقنيات التسجيل بالتثبيت الكهربي قبل المشبكي من كاليكس هيلد في الفئران. يوضح هذا البروتوكول إعداد نسيج الدماغ بدقة للحفاظ على حيويته أثناء التجارب الفسيولوجية العصبية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

التصحيح المشبك الإعداد : البصريات : البصريات ومهمة جدا للعثور على خلية جيدة ، وإنشاء موقف منه. في محاولة للحصول على صورة واضحة من الخلايا : حواف حادة ، لينة يبحث الخلية. مسح الحقل بالكامل للبحث عن الخلايا الرئيسية MNTB جيدة مع الكأس المرفقة. تدوير الطبق للبحث عن الكؤوس من زوايا مختلفة. في البداية ، وأنه موافق على محطة لممارسة شكل بالون. اختيار الخلية على سطح شريحة ، أو في الطبقة الثانية والخلية 2. الهدف الأول 1 / 3 الثالث من الزنازين مع ماصة تحديد Calyxes : لغشاء مزدوجة (انظر الشكل 1) انظر ، وتناوب على طبق شريحة لرؤيتها من زوايا مختلفة للمساعدة على تأكيد أنها الكأس. <img src="/files/ftp_upload/old/244_2008_8_22_2/244_Figure-01.png" alt="الشكل 1" width="298" height="159" /> الشكل 1 عمق كاليكس : كاليكس ينبغي أن يكون على السطح أو على مقربة من سطح ممكن. السطحية المتاحة من أجل التصحيح : استخدام مقبض غرامة التركيز على المجهر لتحديد كيفية &quot;واسعة / العميق&quot; من الكأس هو. على سبيل المثال ، سوف ~ 10 ٪ من كامل بدوره على التركيز غرامة تعطيك أكثر من مساحة كافية لرأب الصدع على. الختم على خلية قبل المشبكي : للوصول إلى خلية المرفقة ، والبحث عن تشوه &quot;صغير&quot; على سطح الخلايا نتيجة للضغط على نقاط البيع (~ 0.15psi) في ماصة ، واستخدام مناور ماصة لتشغيل أعلى والأسفل وعبر ، وحتى في سطح محطة presyn للحصول على تشوه جيدة ، ثم حرر الضغط والشفط تطبيق ، إذا لزم الأمر. PULSE ، وبيانات حيازة برنامج : الحاجة إلى زيادة حجم المخزن المؤقت قبل الاستخدام لأول مرة ، وكلما لزمت بواسطة القدرة أخذ العينات. تحتاج إلى تحميل وحدات الماكرو تعديل في كل مرة. تقاطع السائلة المحتملة : الحل هو تسجيل Presyn - 11mV (11mV سلبية). Presyn : Cslow = ~ 15 PF روبية للشركات presyn : 10 μsec ، 65 ٪ (أكثر التعويض قد أمكن ث / خارج التذبذبات) قبل تسجيل السعة : اختبار الاسترخاء الحالية (10 فولت و 10 مللي ثانية القفزة) لمعرفة ما إذا كان هو الاسترخاء monoexponential ، أي ما إذا كان يمكن أن تكون على غرار مصطلح presyn حجرة واحدة. مرشحات : تعيين في 30 كيلوهرتز و 10 كيلوهرتز (بسل تصفية 1 و 2 على التوالي) خلال قياس الاسترخاء ، للتأكد من عدم ضياع سريع مكون من جرا. خلال التسجيلات صغيرة ، وتستخدم شين شنغ 10 كيلوهرتز و5kHz. طلب مني أن LGW فقط استخدام تصفية مجموعة 1 في 30 كيلوهرتز للتأكد من أننا يمكن قياس الارتفاع مرة وصغيرة. تسمية الملفات : 7 أرقام 000mmxx ، حيث mm هو الشهر (أو الشهر والسنة) وxx هو عدد الخلايا. تنظيف خطوط الحل : تتبع خطوط تنظيفها في نهاية التجربة مع 20 مل من حمض الهيدروكلوريك 0.1 M بواسطة ddH2O 200 مل. يتم تدوير الحلول الخارجية ، وسرعة المضخة 20-30 دورة في الدقيقة. (حل عودته من غرفة حمام تدفقات العودة إلى الاسطوانة). إنشاء 3 خطوط المنتهية ولايته لضمان امتصاص كافية. ماصة الحل تسجيل قبل المشبكي : ~ 310 ملي Osmolar Presyn الحل يجب أن يكون 310 ~ mOsm لمنع وصول R - الزيادة خلال التجربة. Presyn ماصة حل يختلف postsyn ماصة الحل (ATP &amp; Presyn وقد GTP لالسابقين). TTX الشاي محلول (كاليفورنيا لعزل التيارات) : <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> محاولة تطبيق بعد الختم ، أو حتى ترميم ، على الخلية ، والشاي في كتل حل K - القنوات وdepolarizes الخلية. هذا ليس جيدا بالنسبة للخلية. للسبب نفسه ، فإنه قد لا يكون من الممكن إعادة استخدام شريحة بعد تطبيق TTX. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قارن الاستجابة الأولى والأخيرة للخلية ، أو شريحة للتحقق من أي تأثير الاستقطاب لفترات طويلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يستخدم TTX في 1 ميكرومتر بدلا من 0.5 ميكرومتر حتى تأثير أسرع. في حاجة إلى الانتظار وقتا أقل بعد تغيير الحلول. </li></ul> قطع شرائح ضبط Vibratome : <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 70Hz الاهتزازات الوحشي </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السعة : 1.0 ملم </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سرعة إلى الأمام 0،01-0،02 مم / ثانية ، بينما قطع شرائح مع الكأس ، 0.1 سمك خلاف ذلك : 180 ميكرون (~ 150ميكرومتر في الحيوانات الاكبر سنا) </li></ul> شرائح احتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 1 ساعة (ويشمل وقت القطع) ، أي ترك في الحمام بعد قطع 15-20 دقيقة. ماصات : Presyn : 3،5-4،5 MΩ في البداية ، 3،0-3،5 MΩ عندما تشعر بمزيد من الثقة دليل استخدام مجتذب لضبط الإعدادات. استخدام ميزة تأخير بسبب الزجاج السميك (التأخير من 200 أو 1 العمل) نوع الزجاج : البورسليكات ، ومعيار الجدار ، أي خيوط القطر الخارجي : 2.0 ملم القطر الداخلي 1.16 مم مدة العرض : 7.5 سم

أساليب لتصحيح تسجيلات السعة المشبك من كاليكس

Methods for Patch Clamp Capacitance Recordings from the Calyx

نحن لشرح التقنيات الأساسية لتسجيل التصحيح قبل المشبكي المشبك في الكأس لهيلد ، الثدييات النظام العصبي المركزي العصب الطرفي. التسجيلات الكهربائية من المحطة قبل المشبكي يسمح للقياس إمكانات العمل ، والتيارات قناة الكالسيوم ، والانصهار الحويصلة (إيماس) واللاحقة امتصاص غشاء (الإلتقام). اندماج الحويصلات التي تحتوي على ناقل عصبي يسبب غشاء الحويصلة تضاف إلى غشاء الخلية من الكأس. وتقاس هذه الزيادة في كمية من غشاء الخلية وزيادة في السعة. تخفيض لاحق في السعة يشير الإلتقام ، وعملية امتصاص أو إزالة غشاء من غشاء الكأس. الإلتقام ، أمر ضروري للحفاظ على هيكل الكأس وإنما هو أيضا ضروري لتكوين الحويصلات التي ستكون مليئة العصبي للأحداث إيماس المستقبل. وقد التسجيلات السعة في الكأس لالمعقودة من الممكن قياس مباشرة وبسرعة الافراج الحويصلي والإلتقام لاحقة في محطة الثدييات العصبية الجهاز العصبي المركزي. بالإضافة ، يمكن قياس النشاط بعد المشبكي المقابلة في وقت واحد باستخدام التسجيلات المقترنة. وبالتالي تكوين صورة كاملة عن النشاط الكهربائي قبل المشبكي وبعد المشبكي في المشبك الجهاز العصبي المركزي يمكن تحقيقه باستخدام هذا الإعداد. هنا ، تعرض طرق تحضير شريحة ، معالم شكلية لتحديد من الكؤوس المعقودة ، وتقنيات التصحيح الأساسية لقط ، وأمثلة من التسجيلات لقياس السعة وإيماس الإلتقام.

نستعرض التقنيات الأساسية لتسجيل تثبيت الرقعة (patch clamp) قبل التشابكي في "كاليکس هيلد" (calyx of Held)، وهو طرف عصبي في الجهاز العصبي المركزي للثدييات. ...

مرحباً، اسمي كين باراديسو. أعمل مع لينج جانج وو في البرنامج الداخلي للمعهد الوطني للاضطرابات العصبية والسكتة الدماغية، الواقع في مجمع معاهد الصحة الوطنية (NIH) في بيثيسدا. سأقوم بعرض تقنيات تسجيل ما قبل التشابك العصبي في الخلايا الكأسية باستخدام تثبيت الرقعة (Patch clamping).لتحضير أنسجة الدماغ، نقوم باستئصال الدماغ من الجرذ. نضع الدماغ داخل هذا المحلول، وهو محلول منخفض الكالسيوم ومبرد بالثلج، ويتم تمرير الكاربوجين فيه لضمان وصول إمدادات الأكسجين إلى الدماغ في جميع الأوقات. كما يجب أن يكون المحلول مبرداً بالثلج لتقليل قدر التلف.وبذلك يكون الدماغ الآن في هذا المحلول. نقوم بإخراجه، ثم قطعه بشكل مناسب بحيث يمكن وضعه على القاعدة، ويُثبت على القاعدة باستخدام Sano correlate أو الغراء السريع، ثم نملأ الحجرة بمحلول منخفض الكالسيوم شديد البرودة، ونقوم بتهويته، ثم نضعه على جهاز الاهتزاز، وبعد ذلك نقطع شرائح بسماكة 180 إلى 190 ميكرون، وبتردد شفرة يبلغ 70 هرتز، وسرعة تقدم للأمام تتراوح بين 0.01 إلى 0.02 مليمتر في الثانية. وهذا يعادل 10 إلى 20 ميكرون في الثانية.بمجرد الانتهاء من عمل كل شريحة، نقوم بنقل الشرائح من المحلول الملحي المبرد بالثلج إلى هذه الحجرة، التي تحتوي على محلول كالسيوم طبيعي. هذا هو نفس المحلول الذي نستخدمه أثناء التسجيل، وهو عند درجة حرارة فسيولوجية تبلغ 37 °C. بعد ذلك، نضع الشرائح هنا لفترة التعافي.يُترك الدماغ هنا لمدة تتراوح بين نصف ساعة وساعة قبل إجراء تجارب الفسيولوجيا. والآن لدي الدماغ وسأقوم بإخراجه من المحلول. هذا الدماغ أكبر حجماً لأغراض التوضيح.هذا من جرذ في اليوم العشرين بعد الولادة (P 20). سنقوم بقلبه. إن جذع الدماغ هو الجزء الذي نهتم به.لذا فإن هذه المنطقة هنا والسبلة التي تم الإمساك بها تقع تقريباً في تلك المنطقة هناك. لذا، سنقوم بقطع بقية الدماغ، وعزل جذع الدماغ، ثم تحضير جذع الدماغ لغرفة التقطيع. حسناً، سنقوم بتقطيع بقية الدماغ لعزل جذع الدماغ فقط.سأقوم بقلبه الآن لتوضيح موقعنا الحالي. في المعتاد، لن نفعل ذلك بهذه الطريقة، ومرة أخرى، يمكننا ببساطة التخلص من ذلك الجزء بالكامل. عند قلبه مرة أخرى، نكون قد عزلنا جذع الدماغ وسنقوم بإجراء قطع آخر هنا تماماً.حسناً، هذا كل شيء. هذا هو جذع الدماغ. يقع Calyx of held في تلك المنطقة وهناك.هذا هو جذع الدماغ. سنقوم بدفعه للخلف قليلاً مرة أخرى. سنقطع أحد جانبي المخيخ، وهو ما سيسمح لجذع الدماغ بأن يستقر بشكل جانبي على هذا النحو.نضع كمية صغيرة من غراء Sano acrylic، ومع إبقاء العينة في وضع جانبي، نملؤها بسرعة بالثلج البارد ومحلول منخفض الكالسيوم البارد. يتم إدخال خط الأكسجين في أسرع وقت ممكن. نقوم الآن برفعها ونقلها إلى جهاز الهزاز (vibrato).نقوم بإدخاله بسرعة للوصول إلى بداية الدماغ، وبمجرد وصولنا إلى بداية الدماغ، نخفض السرعة إلى 0.01 millimeters per second. أي أنها 10 micros per second. وبالتالي، فهو يتحرك بمعدل بطيء للغاية.الجزء الأول من الدماغ هو الجزء الذي يحتوي على mtb، وهو الجسم شبه المنحرف الإنسي (medial nucleus of the trapezoid body). وهذا هو الجزء الذي يحتوي على، حسناً، بمجرد وضعه في ماصة النقل، أحاول تقريبه قدر الإمكان من طرف الماصة. وهنا توجد شريحة الدماغ، وأقوم بنقلها بسرعة إلى هذه الغرفة، التي تحتوي على محلول تسجيل قياسي بمستويات طبيعية من الكالسيوم ودرجة حرارة أعلى.وسيتيح ذلك للشرائح التعافي بعد إجراءات التقطيع لتصبح جاهزة لتجارب الفسيولوجيا. حسنًا، من هذه النقطة فصاعدًا، ستتكرر نفس الخطوات مرارًا وتكرارًا. المعدات التالية هي ما سأستخدمه لإجراء تثبيت الرقعة (patch clamping).لدينا مجهر عمودي ذو منصة ثابتة. وكما ذكرت، فإن المنصة ثابتة، لذا يتحرك المجهر أسفلها بواسطة مناور. نستخدم مناورًا دقيقًا من طراز wigs and Newman لتثبيت المنصة، وبالنسبة لرأس مضخم الإشارة، فإننا نستخدم مضخم تثبيت الغشاء (patch clamp amplifier) من طراز EPC 10 من شركة heca.ومن الأمور التي كان يجب أن أذكرها أيضاً هي أننا نستخدم تقنية DIC مع الضوء تحت الأحمر. لذا، لدينا كاميرا IR هنا، وبالتالي فإن كل ما نراه سيظهر على الشاشة عندما نبحث عن CAEs. يتم التحكم في مضخم patch clamp بواسطة هذا البرنامج المسمى Pulse، وهو أيضاً من إنتاج شركة Heca، ومن خلاله نتحكم في المضخم وفي جميع تفاصيل التجربة الفسيولوجية.ستظهر النتائج على هذه الشاشة. يُعتبر Calyx الذي تم الإمساك به طرفاً قبل مشبكي كبيراً، وبسبب حجمه هذا، فإنه يسمح لنا بإجراء عملية الترقيع (patch) فيزيائياً على الطرف المشبكي. لذا يمكننا أخذ تسجيلات قبل مشبكية، وهو أمر فريد من نوعه، خاصة في الجهاز العصبي المركزي (CNS).وهذا يتيح لنا قياس قنوات الكالسيوم التي يتم تنشيطها قبل التشابك. كما يمكننا أيضاً قياس نشاط جهد الفعل إذا أردنا تحفيز العصب الذي يؤدي إلى الكاليكس. ما نقوم به في هذا المختبر هو قياس عملية تسمى الإخراج الخلوي، وهي اندماج الحويصلات التي تحتوي على الناقل العصبي مع الغشاء.والآن، عندما تندمج هذه الحويصلات مع الغشاء في العملية التي تسمى الإخراج الخلوي (exocytosis)، فإنها تضيف غشاءً إلى النهاية التشابكية، ويمكننا قياس ذلك كإزاحة في السعة الكهربائية. سنحصل على زيادة في السعة الكهربائية مع إضافة الغشاء إلى النهاية التشابكية؛ لذا فإن التجارب التي سأعرضها اليوم هي قياسات للسعة الكهربائية، قبل التشابكية، وعندما يتم إزالة الغشاء. فمن البديهي أنه لا يمكنك الاستمرار في إضافة الغشاء فحسب، بل يجب عليك إزالة جزء منه.تُسمى هذه العملية بالالتقام الخلوي (endocytosis) أو الامتصاص الغشائي. يمكننا أيضاً قياس ذلك، حيث يظهر القياس على شكل انخفاض في مستوى السعة الكهربائية، وسنعرض أمثلة على ذلك لاحقاً. والآن، يتيح لنا هذا مراقبة نشاط قنوات الكالسيوم، وكذلك مراقبة بعض البروتينات المشاركة في عمليتي الإخراج الخلوي (exocytosis) والالتقام الخلوي ودراستها.يمكننا إضافة مواد مثل الببتيدات لِحجب البروتينات المشاركة في عملية الإخراج أو الإدخال الخلوي. كما يمكننا استخدام السموم التي تؤدي الغرض ذاته. وبإمكاننا أيضاً ضبط كميات الكالسيوم التي تدخل إلى النهاية العصبية، مما يتيح لنا دراسة عملية الإخراج الخلوي، وإطلاق الناقل العصبي، بالإضافة إلى عملية استعادة الغشاء التي تلي هذا الحدث.هذا هو الأنبوب الذي يحتوي على محلول التسجيل داخل الخلوي. نقوم بتحضيره مسبقاً ثم نجمده، وعادةً ما يمكننا استخدامه لعدة أسابيع إلى شهر قبل الحاجة إلى تحضير محلول جديد. ومرة أخرى، فكرنا مباشرة قبل إجراء التسجيلات، حيث ستجد دائماً قدراً معيناً من جزيئات الغبار أو أنواعاً أخرى من الشوائب التي ستنفذ إلى الأنبوب.يمكنك القيام بأحد أمرين؛ إما إخراج المحلول وترشيحه، أو طرده مركزياً لمدة دقيقة أو دقيقتين ثم سحب المحلول، مع ترك جزء سفلي يحتوي على الحطام والمواد الأخرى. لذا، أفضل القيام بالطرد المركزي، وسأفعل ذلك الآن.هذا هو الأنبوب الذي يحتوي على المحلول داخل الخلوي. لقد تم إذابته. سنقوم بطرده مركزياً لمدة تتراوح بين دقيقتين إلى ثلاث دقائق في جهاز طرد مركزي صغير جداً، ومن شأن ذلك أن يكون كافياً لإزالة أي جزيئات غبار كبيرة من المحلول.والآن، أقوم بسحب الطبقة العلوية، وهي المحلول الذي قمنا بطرده مركزياً للتو، مع الحرص على عدم تحريكه، ونقله إلى أنبوب نظيف، حيث أسحب حوالي 90% منه. وأحاول مجدداً تجنب سحب الكمية الصغيرة المتبقية في النهاية، لذا سأتوقف عند هذه النقطة تقريباً.أضع هذا على الثلج فوراً ليبقى بارداً جداً خلال التجربة، وهذا أمر بالغ الأهمية. هذه إحدى الماصات التي نستخدمها.نستخدم هذه الماصة للتسجيلات داخل الخلوية. وهي مصنوعة من زجاج السيليكا ذي الجدران السميكة، بقطر خارجي يبلغ 2 millimeters وقطر داخلي يبلغ 1.16 millimeters. أولاً، نقوم بملء الماصة من الخلف.لذلك نقوم بتطبيق عملية الشفط، حيث نضع الماصة في محلول التسجيل ونطبق الشفط لمحاولة ملء طرف الماصة الدقيق جداً، والذي لن يمتلئ بأي طريقة أخرى. وبمجرد القيام بذلك، نأخذ أنبوباً شعرياً ونملأ بقية القطب الكهربائي ببساطة عن طريق إمساك مؤخرة الماصة. هذه تقنية فسيولوجية قياسية تعتمد حرفياً على تحريكها بنقرة سريعة.قد تخاطر بكسر طرف الماصة، ولكن إذا لم تفعل ذلك، فغالباً ما ستظهر فقاعات هوائية. حسناً، سنقوم الآن بوضعها على حامل الماصة، المتصل بمرحلة الرأس في مضخم تسجيل الجهد الموضعي (patch clamp amplifier). يوجد هناك سلك من كلوريد الفضة.يتلامس سلك كلوريد الفضة مع المحلول داخل الخلوي، مما يسمح لنا بقياس النشاط الكهربائي في النهاية قبل التشابكية. لذا، فإن ما نقوم به هو البحث عن الشريحة التي تحتوي على عدد كبير من CAEs، حيث إننا نسعى للحصول على كثافة عالية من CAEs.لذا، نحن نبحث عن النواة الإنسية للجسم شبه المنحرف، والتي يُرمز لها بـ MNTB، وهي المنطقة التي يوجد بها العائق النهائي، أو ما يُعرف بـ calyx app. وبناءً على ذلك، نبدأ بمسح الشريحة؛ فعلى سبيل المثال، يوجد هنا calyx يقع في عمق معين بعيداً عن السطح ولا يوجد الكثير للالتصاق به، لذا نواصل المسح عبر الشريحة.هذا هو الكأس (calyx) الذي نستهدفه هنا. لقد وضعت علامتين على الشاشة، حيث سيوجه الماصّ (pipette). ويمكنكم رؤية قطعة الكأس التي سأستهدفها عند نزول الماصّ.سأقوم بتطبيق ضغط إيجابي لدفعه للأعلى عكس الكأس، ومن ثم سأقوم بتخفيف هذا الضغط الإيجابي. عندها سيدفع الكأس الماصة للأعلى، وفي تلك اللحظة سأقوم بتطبيق شفط خفيف جداً وأحاول شفط ودفع الغشاء أو جعل الغشاء يلتصق بطرف الماصة. حسناً، تم تخفيف الضغط الإيجابي.والآن سأقوم بتطبيق الشفط. لذا، سنقوم هنا بتطبيق نبضة بقيمة 5 mV، أو في الواقع نبضة بقيمة 4 mV. حسناً، هذا كل شيء. حسناً.الآن سنقوم بخفض جهد الغشاء إلى 80-، لإلغاء الطفرة العابرة السريعة. سننتقل الآن إلى وضع الخلية الكاملة. سأقوم بتطبيق شفط خفيف ومحاولة الانتقال إلى وضع الخلية الكاملة.تشير هذه العوابر الشحنية إلى أن الماصة والخلية أصبحتا الآن متصلتين، وأنه قد حصل على تسجيل شامل. هذه لقطة رائعة أخرى. لذا، كان اللون الأحمر الفاتح هناك يمثل أثر السعة، ويمكنك أن ترى وجود قفزة مفاجئة ثم انخفض بعدها.حسنًا، لقد عرضتُ لكم للتو التقنيات الأساسية للحصول على تسجيلات من النهاية الطرفية قبل المشبكية للكأس (calyx upheld presynaptic terminal). كما أوضحتُ لكم كيفية تحضير المقاطع التي تحتوي على النواة الإنسية للجسم شبه المنحرف (medial nucleus of the trapezoid body)، وهو الموقع الذي ستجدون فيه الكؤوس (calyxes) التي تم تثبيتها.وقد أوضحتُ لكِ التقنيات المستخدمة لفحص المقاطع. ستقومين بمراجعة كل مقطع من المقاطع للبحث عن المقطع الذي يحتوي على أكبر عدد من خلايا caly الموجودة على السطح. بعد ذلك، ستبحثين عن أكبر غشاء خلية caly يمكنكِ إيجاده، ثم تقومين بإجراء تسجيل باستخدام تقنية patch clamp عليه.وقد عرضتُ لكم أيضاً تقنيات تسجيل تثبيت الرقعة (patch clamp recording)، وهي تقنيات قياسية لتسجيل تثبيت الرقعة.

methods-for-patch-clamp-capacitance-recordings-from-the-calyx

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

ويهدف هذا كمقدمة لتصحيح تسجيل المشبك من البويضات القيطم المورق. وهو يغطي إزالة الغشاء المحي ، وتشكيل ختم gigaohm (gigaseal) ، وتحويل اختياري من التصحيح إلى طوبولوجيا خارج التدريجي.

التصحيح تسجيل المشبك من القنوات ايون معبرا عنه البويضات القيطم

ويسجل من القنوات الأيونية الحالية باستخدام تقنيات المشبك BK التصحيح. وأعرب في قنوات...

أعربت المشبك التصحيح وتقنيات الإرواء لدراسة في قنوات ايون القيطم البويضات

ونحن نقدم بروتوكول خطوة بخطوة لخلية كاملة التصحيح تسجيل المشبك من الكالسيوم النسخة المنشط الكالسيوم (CRAC) التيارات المحيطية في الدم وحيدات النوى الخلية المستمدة اللمفاويات التائية البشرية.

خلية كاملة تسجيل النسخة الكالسيوم المنشط الكالسيوم (CRAC) التيارات في الخلايا اللمفية تي الإنسان

نحن هنا وصف بروتوكول لإعداد آغار جزءا لا يتجزأ من شرائح الشبكية التي هي مناسبة للالكهربية وCA2 التصوير +. هذا الأسلوب يسمح احد لدراسة الشريط من نوع المشابك في شبكية العين باستخدام رقائق مباشرة التصحيح ، المشبك تسجيلات احد المحطات العصبية قبل المشبكي.

التصحيح ، المشبك قياسات السعة والكالسيوم 2 + التصوير في محطات عصب واحد في شرائح الشبكية

يصف هذا البروتوكول تقنية تسمى الفيزيولوجيا الكهربية لمشبك التصحيح للخلية الكاملة ، وهي طريقة لدراسة الخواص الكهربائية للخلايا العصبية Mauthner والخلايا الشبكية الشوكية الأخرى في أجنة الزرد.

الفيزيولوجيا الكهربية لمشبك التصحيح للخلية الكاملة: طريقة لدراسة الخصائص الكهربائية للخلايا العصبية

طورنا في الدماغ الشوكي الحبل إعداد سليمة لتسجيل ورصد النشاط الكهربائي عبر التصحيح تسجيل المشبك من الخلايا العصبية والخلايا ماوتنر الشبكي الأخرى في الأجنة الزرد. وبالتالي، نحن قادرون على تسجيل التيارات متشابك مثير والمثبطة، والنشاط قناة الجهد بوابات وإمكانات العمل من الخلايا العصبية الرئيسية في الجنين النامية.

تسجيلات المشبك التصحيح من الخلايا الجنينية الزرد ماوتنر

الموصوفة هنا هي إجراءات الحصول على فترات طويلة من التسجيل الحالي من قناة واحدة أيون مع تقنية التصحيح، المشبك الخلية المرفقة. يسمح هذا الأسلوب للمراقبة، في الوقت الحقيقي، ونمط التشكل قناة مفتوحة قريبة من التي تكمن وراء إشارة البيولوجية. هذه البيانات إعلام حول خصائص القناة في الأغشية البيولوجية دون عائق.

قناة واحدة الخلية المرفقة تسجيل التصحيح، المشبك

بعد إفراز الخلايا ، يتم استرداد غشاء البلازما المنصهر من خلال عملية تعرف باسم الالتقام الخلوي. تعمل هذه الآلية على إصلاح الحويصلات المشبكية الجديدة للجولة التالية من الإصدار. يتم التقاط الأحداث الداخلية الفردية وتحليلها من خلال استخدام تسجيلات السعة المرتبطة بالخلية في خلايا كرومافين الغدة الكظرية في الفأر.

طرق الخلية المرفقة قياسات السعة في ماوس الكظرية أليف الكروم خلية

يصف البروتوكول الحالي طريقة فعالة للاكتساب الديناميكي في الوقت الفعلي لتيارات قناة البوتاسيوم ذات الجهد الكهربائي (Kv) في خلايا عضلة القلب H9c2 باستخدام تقنية مشبك التصحيح للخلية الكاملة.

تسجيل تيار البوتاسيوم المعتمد على الجهد على خلايا عضلة القلب H9c2 عبر تقنية مشبك التصحيح للخلية الكاملة

هذا هو دليل على تعديل شكل micropipettes الزجاج. على وجه التحديد ، وذلك باستخدام الحرارة والضغط الجوي وتوسيع تفتق دون زيادة افتتاح الطرف ، مما يؤدي إلى انخفاض المقاومة ماصة. هذا أمر بالغ الأهمية للحصول على تسجيلات ضوضاء منخفضة من خلايا صغيرة لكنها مفيدة في العديد من التطبيقات.

الضغط تلميع الماصات لتسجيل باتش تحسين المشبك

تعلم تقنيات التسجيل بالتثبيت الكهربي قبل المشبكي من كاليكس هيلد في الفئران. يوضح هذا البروتوكول إعداد نسيج الدماغ بدقة للحفاظ على حيويته أثناء التجارب الفسيولوجية العصبية.

أساليب لتصحيح تسجيلات السعة المشبك من كاليكس

استكشف المزيد من الفيديوهات