رنين البلازمون السطحي لدراسة التفاعلات الجزيئية الحيوية باستخدام شريحة مستشعر

لإجراء رنين البلازمون السطحي ، أو SPR ، لدراسة التفاعلات الجزيئية الحيوية ، ابدأ بشريحة مستشعر موضوعة فوق كاشف SPR في خلية تدفق. تحتوي شريحة الاستشعار المطلية بالمعدن هذه على طبقة من مادة الهيدروجيل المترسبة على سطح الرقاقة ، مما يجعلها أكثر ملاءمة لتثبيت البروتين.

تراكب الرقاقة بالببتيدات الفيروسية ، التي تتفاعل مع الهيدروجيل وتشل حركة على السطح. يغسل بمحلول تبريد قلوي يمنع تفاعلات البروتين غير المحددة.

الضوء المستقطب المباشر على الشريحة. عند زاوية الرنين ، تمتص الإلكترونات المعدنية هذا الضوء وتتردد صداها ، مما يقلل من شدة الضوء المنعكس عند الزاوية المنعكسة المقابلة.

يجمع الكاشف الضوئي هذا الضوء المنعكس ، ويحول المعالج هذه الإشارة إلى خط الأساس ، مما يولد مستشعر - رسم بياني يمثل استجابة المستشعر ضد الوقت.

تدفق محلول من العامل المضاد للفيروسات إلى خلية التدفق. أثناء التدفق ، تتفاعل العوامل المضادة للفيروسات مع الببتيدات الفيروسية المجمدة على الشريحة. يغير هذا الارتباط معامل الانكسار ، الذي يغير زاوية وشدة الضوء المنعكس ، مما يؤدي في النهاية إلى استجابة المستشعر.

أضف عازلة غسيل ذات قوة أيونية عالية تعطل التفاعل بين الجزيئين ، مما يؤدي إلى تفككهما وتقليل استجابة المستشعر.

تحليل شكل المخطط الاستشعاري ، وتقييم ارتباط وتفكك الجزيئين الحامين في التفاعلات الجزيئية الحيوية.

بالنسبة لنظام SPR ثنائي القناة ، استخدم HBS-EP + كمخزن مؤقت للتشغيل ، وحمض الهيدروكلوريك جلايسين 10 مللي مولار من درجة الحموضة 1.5 إلى 1.6 كمخزن مؤقت للتجديد ، وقم بتشغيل جهاز إزالة الغازات ، وجهاز أخذ العينات التلقائي ، والمضخة. ثم اغسل النظام بأكمله بالماء المقطر المزدوج لمدة 1 ساعة.

بعد ذلك ، قم بإسقاط زيت الغاطس على الكاشف ، وقم بتركيب شريحة مستشعر زجاجية مطلية بغشاء ذهبي رقيق ، وعلى الجانب العلوي تعمل باستخدام هيدروجيل كربوكسي ميثيل ديكستران مباشرة على الكاشف أسفل خلية التدفق ثلاثية المنافذ. بعد ذلك، قم بإصلاح الإعداد عن طريق سحب المناولة لأسفل.

لشل حركة الروابط البروتينية لرقائق المستشعر ، افتح جدول تشغيل بالنقر فوق النموذج في شريط القائمة ، وقم بتشغيل محرر الجدول في برنامج SPRAutoLink المتكامل. ثم اختر وانقر فوق BASIC_Immobilization من قائمة جداول التشغيل المتاحة، واتبع خطوات الإجراء التجريبي على شاشة الكمبيوتر.

بعد ذلك ، انقر فوق محرر مجموعة العينات في قسم النموذج لملء قائمة الكواشف لرففين موضوعين في جهاز أخذ العينات التلقائي لمزيد من التحليلات. انقر فوق Autosampler Sampler Direct Control كأداة في شريط القائمة لإحضار الرفوف إلى الأمام أو العودة إلى المنزل ، واختر 4 درجات مئوية كدرجة حرارة التشغيل.

ابدأ تشغيل المضخة لنقع الماء المقطر المزدوج بالنقر فوق الأدوات و "التحكم المباشر في المضخة" ، وسجل البيانات بالنقر فوق "SPR Instrument Direct Control" ، وفي كل مرة ، ابدأ في النافذة التي تظهر حديثا. بعد إضافة كواشف التوصيل في قوارير سعة 300 ميكرولتر ، ضعها في رفوف أخذ العينات التلقائية وابدأ جدول التشغيل بالنقر فوق تشغيل.

للتفاعل البسيط بين البروتين والبروتين بعد إعادة تعبئة المضخة بمعدل 25,000 ميكرولتر في الدقيقة ، قم بإجراء تعديل خط الأساس لمدة 30 ثانية. اسمح بتعديل خط الأساس اللاحق بالماء المقطر المزدوج لمدة 1.5 دقيقة قبل إخماد سطح الرقاقة المنشط باستخدام 1 مولي هيدروكلوريد إيثانول ألامين ، درجة الحموضة 8.5. بعد ذلك ، قم بتبديل الأنابيب من جهاز أخذ العينات السائل إلى مزيل الغاز من الماء المقطر المزدوج إلى الزجاجة باستخدام HBS-EP +.

انقر فوق نموذج ، وقم بالتمرير لأسفل ، وقم بالتغيير إلى "المعالجة اللاحقة" بالنقر فوق وضع التشغيل هذا. ثم انقر فوق إضافة لتحديد منحنيات الربط التي تم إنشاؤها بمرور الوقت في نموذج مخطط البيانات لكل خلية تدفق ، وقم بتصدير التراكب كملف تنظيف. بعد ذلك ، انقر فوق ملف لفتح خيارات حفظ الملفات والحصول على منحنيات الاستجابة عن طريق محاذاة المنحنيات اليمنى واليسرى وطرح إشارات القناة المرجعية الثانية من تلك الخاصة بقناة الترابط.