موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 3:05 دقيقة • July 8th, 2025
خذ صفيحة متعددة الآبار تحتوي على طبقة أحادية للخلية الظهارية الملتصقة المعرضة للالتصاق بالبكتيريا.
أضف أعدادا متفاوتة من Pseudomonas aeruginosa الموسومة بالبروتين الفلوري ، وهي بكتيريا مسببة للأمراض ، لتحقيق نسبة البكتيريا إلى الخلايا الظهارية المرغوبة.
جهاز طرد مركزي لتقريب البكتيريا من الخلايا الظهارية ، مما يسهل التفاعلات.
تلعب الألياف البروتينية من النوع الرابع ، وهي ألياف بروتينية على البكتيريا ، دورا محوريا من خلال الارتباط بجليكوليبيدات معينة على الخلايا الظهارية ، مما يتوسط في التصاق البكتيريا بالخلايا المضيفة.
بعد الحضانة ، يغسل بمخزن مؤقت لإزالة البكتيريا غير الملتصقة. إصلاح الخلايا للحفاظ على بنية الخلية.
أضف DAPI ، وهي صبغة فلورية ترتبط بقوة بمناطق الحمض النووي الغنية ب AT ، مما يؤدي إلى تلطيخ النواة. قم بتغطية الخلايا بمحلول عازل لمنع جفاف الخلايا.
احصل على صور للبكتيريا المسماة GFP المرتبطة بالخلايا الظهارية ذات النواة الملطخة ب DAPI. تعداد البكتيريا الملتصقة على خلية ظهارية واحدة.
تتيح زيادة البكتيريا الملتصقة لكل خلية مضيفة بطريقة تعتمد على الجرعة القياس الكمي للتفاعلات بين المضيف والمسببات للمرض.
لفحص الالتصاق البكتيري، اغسل الطبقات الأحادية للخلية A549 المزروعة مسبقا ثلاث مرات عن طريق إضافة 100 ميكرولتر من PBS الدافئ إلى كل بئر، وقم بسحب الماصة برفق لأعلى ولأسفل.
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية