طريقة قائمة على التألق المناعي لقياس إجهاد النسخ المتماثل في الخلايا السرطانية

0 views • 3:37 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ابدأ بالخلايا السرطانية التي تحمل IdU ، وهو بديل اصطناعي لنيوكليوتيد الثايميدين ، مدمج بالفعل في حمضها النووي. عندما تواجه هذه الخلايا إجهاد النسخ المتماثل ، يتوقف تخليق الحمض النووي الخاص بها ، ويكشف عن IdU داخل مناطق الحمض النووي المكشوفة أحادية الشريطة.

قم بإصلاح الخلايا وإضافة جزيئات المنظفات لجعل غشاء الخلية قابلا للنفاذ.

أضف BSA لمنع مواقع ربط الأجسام المضادة غير المستهدفة.

أدخل الأجسام المضادة ل IdU التي تتفاعل مع الحمض النووي أحادي الشريطة المسمى IdU.

أضف الأجسام المضادة الثانوية الخضراء المسماة بالفلوروفور والتي تستهدف الأجسام المضادة المضادة ل IdU. قم بإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة.

ضع الغطاء على شريحة تحتوي على وسط تثبيت بصبغة فلورية — تلطخ النوى.

تحت المجهر الفلوري ، راقب النوى الزرقاء.

تمثل بؤر التألق الخضراء أجساما مضادة مرتبطة بالحمض النووي أحادي الشريطة.

احسب عدد البؤر لتحديد مستوى إجهاد النسخ المتماثل.

أضف 1 مليلتر من تعليق الخلية على أغطية بولي إل ليسين الموضوعة في آبار صفيحة 24 بئرا ، وقم بزراعة الخلايا في وسط الثقافة في ظل الظروف القياسية. بعد مضاعفة مجموعة واحدة ، استنشق الوسائط الموجودة من اللوحة ونبض الخلايا ب 10 ميكرومولار IdU لمضاعفة السكان اللاحقة.

لحصاد الخلايا ، استبدل الوسط بمثلج بارد 0.5٪ PBSTx على الجليد لمدة 5 دقائق. لتثبيت الخلايا ، قم بشفط PBSTx ، واحتضان الخلايا لمدة 15 دقيقة مع 3٪ بارافورمالدهيد في درجة حرارة الغرفة. بعد 3 إلى 4 غسلات باستخدام PBS ، احتفظ بالخلايا الثابتة عند 4 درجات مئوية حتى الاستخدام الآخر.

بعد التثبيت ، قم باختراق الخلايا باستخدام 0.5٪ PBSTx على الجليد لمدة 5 دقائق ، مع التأكد من تغطية الغطاء بالكامل. بعد غسل الخلايا من 3 إلى 4 مرات باستخدام 1 مليلتر من 0.2٪ PBST في درجة حرارة الغرفة ، قم بشفط PBST ، وحظر العينات ، باستخدام 5٪ BSA المصنوع في PBS لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.

للتلوين المناعي ، قم بإعداد غرفة رطبة عن طريق وضع منشفة ورقية مبللة على Tupperware مسطحة القاع. قم بتغطية غطاء اللوحة المكون من 24 بئرا بالبارافيلم. ضعه في الغرفة المرطبة ، وضع الغطاء على غطاء اللوحة. أضف 60 ميكرولترا من الجسم المضاد للفأر الأساسي المخفف المضاد ل BrdU ، في الجزء العلوي من الغطاء.

بدلا من ذلك ، لتقليل الجفاف في الجسم المضاد واستخدام حجم أقل ، ضع قطرة من الجسم المضاد المخفف على البارافيلم واقلب الغطاء عليه. ثم احتضن لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية. بعد الحضانة ، استنشق الجسم المضاد الأساسي.

أعد الغطاء إلى طبق 24 بئرا واغسلها بنسبة 0.2٪ PBST 4 مرات. أضف الجسم المضاد الثانوي المخفف على الغطاء ، كما هو موضح سابقا ، واحتضانه لمدة ساعة في الظلام في درجة حرارة الغرفة. قم بتسمية شريحة مجهر، وقم بتركيب الغطاء على الشرائح باستخدام وسيط تركيب DAPI. قم بتخزين الشرائح في الظلام في درجة حرارة الغرفة لمدة 24 ساعة إذا كان وسط التركيب بحاجة إلى المعالجة أو التصلب.

10:47

مجهر الفلورة γH2AX و 53BP1 لتحليل تكوين وإصلاح الحمض النووي المزدوج-حبلا فواصل

Related Videos

0 Views

04:07

تصور بروتينات إصلاح تلف الحمض النووي في عضويات سرطان المبيض المشتقة من المريض عن طريق فحوصات التألق المناعي

Related Videos

0 Views

13:09

عرض توضيحي لمقايسة ألياف الحمض النووي للتحقيق في تلف الحمض النووي وديناميكيات الإصلاح التي تسببها الجسيمات النانوية

Related Videos

0 Views

07:18

تصور تكرار الحمض النووي في DT40 النظام النموذجي الفقارية باستخدام تقنيات الحمض النووي الألياف

Related Videos

0 Views

17:14

التوقيت كروموسوم النسخ المتماثل جنبا إلى جنب مع نيون في الموقع التهجين

Related Videos

0 Views

04:34

مقايسة التألق المناعي لتوصيف وقياس حبيبات الإجهاد في الثدييات

Related Videos

0 Views

09:57

سير العمل عالية المحتوى، الكمي خلية فردية من نيون علامات من المجاهر البيانات العالمي، بدعم من برمجيات المصدر المفتوح

Related Videos

0 Views

09:39

الكمية المناعي الفحص لقياس التفاوت في مستويات البروتين في Centrosomes

Related Videos

0 Views

12:35

مقارنة بين ثلاث طرق مختلفة لتحديد انتشار الخلايا في خطوط خلايا سرطان الثدي

Related Videos

0 Views

11:37

تحليل المناعي من الإجهاد الحبيبية تشكيل بعد تحدي البكتيريا من خلايا الثدييات

Related Videos

0 Views

Last updated: 4 July 2026