تطوير نموذج ثلاثي الأبعاد قائم على الحرير والكولاجين للأنسجة العصبية المستقطبة

ضع سقالات حريرية مسامية على شكل دونات ، مطلية ب poly-D-lysine ، في طبق متعدد الآبار.

أضف وسائط الثقافة لترطيب السقالات ، مما يسهل ارتباط الخلايا.

استنشاق الوسائط الزائدة. بذر السقالات بتعليق خلية عصبية واحتضانها.

يوفر السطح المطلي ومسام السقالة مساحة سطح كبيرة لربط الخلايا عالية الكثافة وتسهيل انتشار المغذيات والنفايات بكفاءة.

قم بإزالة الخلايا غير المرفقة وأضف الكولاجين ، وهو بروتين مصفوفة خارج الخلية.

احتضان لبلمرة الكولاجين. تقوم هذه العملية بتضمين الخلايا داخل مصفوفة ثلاثية الأبعاد تشبه الهلام على السقالة المسامية.

إضافة الوسائط. الثقافة ، واستبدال نصف وسائط الاستزراع بانتظام لتجديد العناصر الغذائية دون إزعاج الخلايا.

داخل الثقافة ، تظل أجسام الخلايا العصبية مثبتة على سقالة الحرير بينما تنمو المحاور من خلال مصفوفة الكولاجين ، وتشكل شبكات محورية ثلاثية الأبعاد.

ينتج عن جسم الخلية المجزأ هذا والتوطين المحوري تكوين نموذج نسيج عصبي مستقطب ثلاثي الأبعاد يشبه الدماغ.

داخل غطاء مزرعة الخلية ، ضع زوجا من الملقط المعقم ، ووسائط زراعة الخلايا ، والسقالات المعقمة قم بإزالة طبق 96 بئرا من غلافه وضعه بالداخل. لبذر السقالات ، أولا ، ضع سقالة معقمة واحدة لكل بئر في اللوحة المكونة من 96 بئرا. أضف وسط زراعة الخلايا لغمر السقالات ، واحتضن عند 37 درجة مئوية في حاضنة زراعة الأنسجة لتوازنها لمدة 30 دقيقة على الأقل.

بعد الحضانة ، استنشق الوسط الزائد من السقالات. ثم أضف 2 في 10 إلى 6 خلايا عصبية قشرية للفئران في 100 ميكرولتر من الوسط العصبي القاعدي لكل سقالة. أعد اللوحة إلى الحاضنة واتركها طوال الليل للسماح للخلايا بالالتصاق بالسقالة. في صباح اليوم التالي ، قم بشفط الخلايا غير المرفقة بعناية ، واستبدلها ب 200 ميكرولتر من وسط زراعة الخلايا الطازجة. احتضان عند 37 درجة مئوية لفترة وجيزة.

بعد ذلك ، استنشق الوسط من الآبار. باستخدام ملقط معقم ، انقل السقالات المحتوية على الخلايا إلى آبار فارغة من الصفيحة المكونة من 96 بئرا. ثم أضف إلى كل سقالة 100 ميكرولتر من محلول الكولاجين المثلج المخفف حديثا 3 ملليغرام لكل مليلتر من ذيل الفئران.

أعد الخلايا إلى حاضنة 37 درجة مئوية للسماح ببلمرة الكولاجين لمدة 30 دقيقة. قم بإزالة اللوحة من الحاضنة ، وأضف 100 ميكرولتر من وسط زراعة الخلايا الدافئ مسبقا لكل بئر. أعد اللوحة إلى الحاضنة للفترة المطلوبة من نمو الخلية ، واستبدل نصف الوسط من كل بئر بوسط جديد كل يوم لمدة تصل إلى أسبوع واحد.