عزل الخلايا الدبقية الصغيرة من الآفات المزيلة للميالين في دماغ الفأر باستخدام فرز الخلايا المنشطة المغناطيسية

تشريح الآفات الميزيلة للميالين الملطخة من الجسم الثفني لدماغ الفأر.

تحتوي هذه الآفات على الخلايا الدبقية الصغيرة المقيمة في الدماغ التي تعبر عن الإنتجرين على سطح الخلية CD11b.

اجمع الأنسجة وأضف محلولا يحتوي على إنزيم محلل للبروتين و DNase.

يحلل الإنزيم المصفوفة خارج الخلية ، بينما يحلل DNase الحمض النووي الحر.

أضف عازلة باردة وقم بتصفية التعليق من خلال مصفاة لإزالة الكتل الخلوية.

جهاز الطرد المركزي ، وتخلص من المادة الطافية ، وأعد تعليق الخلايا المحببة في وسط تدرج كثافة.

تراكب مع عازلة وجهاز طرد مركزي لجمع الحطام المتبقي في الطبقات العليا ؛ تستقر الخلايا السليمة في الأسفل.

قم بإزالة الحطام وإعادة تعليق الخلايا في مخزن مؤقت.

أضف حبات مغناطيسية مضادة ل CD11b لتسمية الخلايا الدبقية الصغيرة.

قم بتحميل الخلايا على عمود يحتوي على كرات مغناطيسية حديدية موضوعة في المجال المغناطيسي للفاصل المغناطيسي.

تحت المجال المغناطيسي الخارجي ، يتم الاحتفاظ بالخلايا الدبقية الصغيرة المرتبطة بالخرزة في العمود بينما تتدفق الخلايا غير المنضمة من خلاله.

قم بإزالة العمود من المجال المغناطيسي. أضف عازلة لمسح الخلايا الدبقية الصغيرة.

ابدأ بالتشريح الدقيق للآفات الموسوة بصبغة محايدة حول الجسم الثفني تحت مجهر مجسم. قم بالطرد المركزي للأنسجة المقطعة عند 300 × جم لمدة 30 ثانية لجمع العينة في قاع الأنبوب. يسخن مزيج