قياس النشاط العصبي في شريحة دماغ الفأر بعد الحضانة لفترات طويلة

قم بتأمين شريحة دماغ الفأر في غرفة التسجيل ، مملوءة ب aCSF المؤكسج بعد الحضانة لفترات طويلة.

يتم تحميل الخلايا الموجودة في الشريحة بمؤشر الكالسيوم ، مما يسهل قياسات الكالسيوم داخل الخلايا.

خذ ماصة تسجيل تتكون من قطب كهربائي في محلول إلكتروليت.

تحديد الخلية العصبية المستهدفة. ضع ماصة التسجيل بضغط إيجابي على غشاء الخلية، مما يؤدي إلى تكوين غمازة.

ضع ضغطا سلبيا لإنشاء ختم محكم.

علاوة على ذلك ، قم بتطبيق نبضات الضغط السلبي ، وتمزق الغشاء وإنشاء تكوين خلية كاملة.

يثمر السائل الدماغي النخاعي بتركيز عال من البوتاسيوم ، مما يزيل استقطاب غشاء الخلايا العصبية.

يفتح إزالة الاستقطاب قنوات الصوديوم ، مما يؤدي إلى جهد فعل ، والذي بدوره ينشط قنوات الكالسيوم ذات الجهد الكهربائي ويسمح بتدفق الكالسيوم.

ترتبط أيونات الكالسيوم بالمؤشر ، مما يعزز التألق ، والذي يمكن تصوره تحت الإضاءة المناسبة.

تشير الزيادة في التألق داخل الخلايا ، الناجم عن تدفق الكالسيوم بعد تطبيق البوتاسيوم ، إلى قابلية الخلايا العصبية للبقاء بعد الحضانة لفترات طويلة.

للتسجيل ، ضع الأنسجة في غرفة تسجيل مغمورة تحت المجهر ، وقم بتثبيتها باستخدام aCSF المؤكسج بمعدل تدفق من 4 إلى 5 ملليلتر في الدقيقة. امسك المنديل باستخدام قيثارة مصنوعة خصيصا. بعد ذلك، قم بإعداد بعض ماصات التسجيل باستخدام مجتذب ماصة دقيقة لتحقيق مقاومة نهائية من 5 إلى 6 ميجا أوم.

املأ الماصة ب 3 إلى 4 ميكرولتر من المحلول الداخلي ، ثم ضع المحلول على الثلج. بعد ذلك ، تصور الخلايا باستخدام كاميرا CCD تحت IR-DIC. ضع الماصة على غشاء الخلية باستخدام معالج دقيق. حافظ على الضغط الإيجابي من خلال منفذ الشفط على حامل الماصة. بمجرد وضع الماصة على الخلية، قم بالضغط السلبي اللطيف على الماصة للحصول على إحكام تسرب جيجا أوم.

ثم قم بتمزيق غشاء الخلية بضغط سلبي قصير. بعد ذلك ، ابدأ تسجيل تيار الخلية الكاملة أو تسجيل مشبك الجهد. للحصول على طول موجي واحد للإثارة للتدفق 4 ، قم بتصفية ضوء الإثارة من خلال مرشح ممر نطاق من 460 إلى 490 نانومتر والضوء المنبعث من خلال مرشح ممر نطاق من 515 إلى 550 نانومتر.