قياس نشاط البروتيازوم في مقصورات مختلفة تحت الخلايا في دماغ الفئران

ابدأ بالأجزاء النووية والمشبكية تحت الخلوية التي تم جمعها من اللوزة الجانبية لأدمغة كل من الفئران المشروطة بالخوف.

يحتوي

كل جزء تحت الخلوي على تركيزات متفاوتة من البروتيازومات 20S ، وهو اللب التحفيزي لمركب البروتيازوم المسؤول عن تحلل البروتينات الخلوية غير المرغوب فيها.

أضف عازلة فحص تحتوي على ATP وركيزة ببتيد فلوروجينيك إلى العينات واحتضنها.

في وجود ATP ، يشق البروتيازوم الببتيد الفلوروجينيك ، ويطلق جزيئات فلوروجينيك حرة.

باستخدام قارئ اللوحة ، قم بقياس شدة التألق على فترات منتظمة.

حدد كمية التألق من خلال مقارنته بالتركيزات القياسية المعروفة للجزيء الفلوري.

تتناسب شدة التألق مع نشاط البروتيازوم في العينة.

يشير

النشاط البروتيازمي المتزايد في الجزء النووي للفئران المكيفة بالخوف إلى تغييرات في التعبير الجيني المرتبط بالذاكرة ، بينما يشير انخفاض النشاط في الجزء المشبكي إلى تغيرات في تعبير البروتين المشبكي الضروري للحفاظ على الذاكرة على المدى الطويل.

لإعداد الفحص ، قم بتسخين قارئ اللوحة مسبقا إلى 37 درجة مئوية واستمر في الجري. اضبط الإثارة على 360 نانومتر والانبعاث على 460 نانومتر. إذا كانت لوحة البئر 96 المستخدمة واضحة ، فاضبط موضع البصريات على الأسفل. إذا تم استخدام لوحة داكنة سعة 96 بئرا ، فاضبط موضع البصريات على الأعلى. قم ببرمجة تشغيل حركي مع وقت 2 ساعة ، والمسح الضوئي كل 30 دقيقة