موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 4:14 دقيقة • May 29th, 2025
خذ غرفة تصوير تحتوي على نسيج الضفيرة العضلية المعوية القولون المجمد للفأر ، والذي يضم الضفائر العقدية المكونة من شبكات من الخلايا العصبية المعوية والخلايا الدبقية.
يتم تصنيف هذه الخلايا بمؤشر الكالسيوم الذي يتألق عند ارتباط الكالسيوم.
بعد ذلك ، ضع الغرفة على مرحلة المجهر الفلوري. قم بتفريخ الغرفة بمخزن مؤقت مسخن مسبقا يحتوي على مثبطات لقمع تقلصات العضلات أثناء التصوير.
باستخدام المجهر ، حدد المناطق العقدية السليمة التي تظهر مضان موحد.
الحصول على صور الفلورسنت لقياس نشاط خط الأساس ، مما يوفر مرجعا لمستويات الكالسيوم داخل الخلايا.
قم بتفريم الأنسجة بناهض مستقبلات لتنشيط المستقبلات العصبية ، مما يؤدي إلى تدفق الكالسيوم داخل الخلايا وزيادة شدة التألق.
يحفز التنشيط العصبي بشكل غير مباشر الخلايا الدبقية المحيطة ، مما يؤدي إلى تدفق الكالسيوم وزيادة لاحقة في التألق.
التقط صورا فلورية بفاصل زمني لقياس التغيرات في شدة التألق ، والتي تشير إلى ديناميكيات الكالسيوم ونشاط الإشارات في كل من الخلايا العصبية والخلايا الدبقية بالنسبة لمستويات خط الأساس.
أثناء الحضانة ، قم بعمل عازلة كرب معدلة وفقا للتعليمات الواردة في الجزء المكتوب من البروتوكول ، وأضف 3 نيكارديبين ميكرومولار و 1 سكوبولامين ميكرومولار لتثبيط تقلصات العضلات أثناء الكالسيوم 2 بالإضافة إلى التصوير في تشريح الجبل بالكامل. ضع غرفة التسجيل تحت ا
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية