موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 6:37 دقيقة • May 29th, 2025
قم بتأمين فأر مخدر بنافذة قحمية فوق قشرته الحركية على جهاز المشي.
يعبر الفأر عن مراسل بروتين كيناز في الخلايا العصبية القشرية.
ضع جهاز المشي تحت هدف FLIM ثنائي الفوتون.
أضف قطرة ماء بين الهدف ونافذة الجمجمة.
اسمح للفأر بالاستيقاظ والتأقلم مع جهاز المشي.
باستخدام إضاءة المجال الساطع، حدد موقع منطقة التصوير. أغلق حاوية المجهر لحجب الضوء الخارجي.
اضبط معلمات التصوير ، وابدأ دوران جهاز المشي للحث على الحركة ، وابدأ التصوير.
تعملالحركة القسرية على تنشيط PKA ، الذي يقوم بفسفرة المراسل ، مما يجعل الفلوروفورات المانحة والمتقبلة أقرب إلى ذلك.
يوجه المجهر ليزر الأشعة تحت الحمراء ، مما يثير المتبرع لنقل الطاقة إلى المستقبل ، مما يقلل من عمر مضان المتبرع.
عندما تتوقف الحركة ، يعود PKA والمراسل إلى حالاتهما غير النشطة ، مما يقلل من نقل الطاقة ويزيد من عمر مضان المتبرع.
قم بتحليل الصور لمقارنة مستويات PKA القشرية أثناء الراحة والحركة.
بعد أسبوعين على الأقل من تركيب نافذة الجمجمة ، اضبط الطول الموجي ليزر الإثارة ثنائي الفوتون على 960 نانومتر وتأكد من عدم الاستجابة لقرصة إصبع القدم في الفأر التجريبي المخدر. ضع الماوس المخدر على جهاز المشي الآلي وقم بتركيب لوحة رأس الماوس على حامل لوحة الرأس لإعداد جهاز المشي. قم بتنظيف سطح غطاء نافذة الجمجمة بنسبة 70٪ من الإيثانول وضع جهاز المشي الآلي تحت هدف 2pFLIM.
ضع ق
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية