آخر العمود اشتقاق عن طريق رد الفعل أعمدة تدفق عالية الأداء اللوني السائل

الهدف العام من هذه الطريقة هو تحسين كفاءة وحساسية اشتقاق عمود الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء ، أو طريقة PCD ، من خلال استخدام عمود تدفق التفاعل. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجالات مثل العلوم الصيدلانية والطبية الحيوية والبيئية ، حيث يتم تحليل المركبات ذات الاستجابة المنخفضة لكاشفات HPLC. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي عدم الحاجة إلى ملفات تفاعل.

نظرا لأن خلط النفايات السائلة للعمود والمشتق يحدث بشكل أكثر كفاءة من الطرق التقليدية. تم استخدام هذه الطريقة لتقديم نظرة ثاقبة لمضادات الأكسدة والأحماض الأمينية والفينولات. يمكن أيضا تطبيقه على مركبات الفئة الأخرى ، مثل الثيول والمعادن والمضادات الحيوية والسموم.

على الرغم من أن العينة بأكملها غير مشتقة ، نظرا لانخفاض اتساع النطاق ، فإن تركيز المادة التحليلية داخل تيار تدفق النفايات السائلة أعلى مما هو عليه في تحليل اشتقاق العمود اللاحق التقليدي. لبدء هذا الإجراء ، قم بإعداد أداة HPLC بمياه بنسبة 100٪ على الخط A و 100٪ ميثانول على الخط B كمرحلة متحركة ، وتطهير المضخات وفقا لمتطلبات الشركة المصنعة. قم بإعداد المكونات الآلية HPLC ومضخة الاشتقاق الإضافية.

بعد ذلك ، اضبط كاشف الأشعة فوق البنفسجية / فوق البنفسجية للتحليل بطول موجي يبلغ 520 نانومتر. قم بتوصيل مدخل عمود تدفق التفاعل ، أو التردد اللاسلكي ، بأداة HPLC. قم بتوصيل منفذ محيطي للمخرج بكاشف الأشعة فوق البنفسجية / فوق البنفسجية باستخدام أنبوب بطول 15 سم بقطر داخلي 0.13 ملم.

بعد ذلك ، قم بتوصيل خط مضخة DPPH بمنفذ محيطي على مخرج عمود التردد اللاسلكي. قم بحظر المنفذ الطرفي غير المستخدم على مخرج عمود التردد اللاسلكي باستخدام سدادة عمودية. قم بتوصيل أنبوب بطول 15 سم بقطر داخلي 0.13 ملم بالمنفذ المركزي للمخرج لعمود التردد اللاسلكي.

اجعل معدل تدفق مضخة HPLC ملليمتر واحد في الدقيقة بنسبة 100٪ ميثانول. ثم قم بموازنة العمود مع 100٪ من الميثانول لمدة 10 دقائق. في هذه المرحلة ، قم بإعداد محلول 0.1 ملليغرام لكل مليلتر من DPPH والميثانول.

قم بتقطيع القارورة التي تحتوي على كاشف DPPH لمدة 10 دقائق. قم بتطهير مضخة DPPH باستخدام كاشف DPPH المحضر وفقا لمتطلبات الشركة المصنعة. بعد ذلك ، خذ وعاءين جافين ونظيفين وقم بتسمية أحدهما على أنه مركزي "والآخر على أنه محيطي" قم بوزن السفينتين بدقة.

اجمع النفايات السائلة الخارجة من الميناء المركزي إلى السفينة المسماة مركزية "لمدة دقيقة واحدة. بعد إعادة وزن وعاء الميناء المركزي ، احسب وزن التدفق من المنفذ المركزي. كرر الخطوات السابقة للنفايات السائلة الخارجة من الأشعة فوق البنفسجية / VIS المتصلة بالمنفذ الطرفي لعمود التردد اللاسلكي.

احسب وزن سفينة الميناء الطرفية. بعد ذلك ، احسب النسبة المئوية للتدفق القادم من المنافذ المركزية والطرفية. كرر الخطوات السابقة حتى تصبح نسبة التدفق صحيحة ، ثم اضبط معدل تدفق مضخة DPPH على 0.5 مل في الدقيقة.

بمجرد انتهاء التشغيل ، أوقف تدفق مضخة كاشف الاشتقاق. قم بإزالة خط مضخة كاشف DPPH من المنفذ المحيطي وسدادة المنفذ. قم بموازنة العمود مع المرحلة المتنقلة التي سيتم تخزينه فيها ، مما يسمح للطور المتنقل بالمرور عبر العمود بمعدل ملليمتر واحد في الدقيقة لمدة 10 دقائق.

ثم أوقف تدفق مضخة طور الفقاعة على أداة HPLC. أخيرا ، استبدل كاشف DPPH بالميثانول وقم بتطهير المضخة الإضافية. يتم عرض اثنين من الكروماتوغرامات لعينة قهوة ريستريتو ، مشتقة من جذر DPPH باستخدام كل من أجهزة PCD التقليدية و RF-PCD ، هنا.

المحسوبة للقياس الكمي والكشف لكل من الأحماض الأمينية التي تم تحليلها في كل من أوضاع RF-PCD وأوضاع PCD التقليدية مذكورة هنا. يظهر هنا رسم كروماتوغرامي للأحماض الأمينية الأربعة التي تم تحليلها باستخدام طريقة PCD التقليدية ، وطريقة RF-PCD ، والتيار غير المشتق من طريقة RF-PCD. يتم هنا عرض مقارنة بين الإشارات التي تم الحصول عليها للقمم بسبب الجلايسين والليوسين باستخدام كل من طرق PCD التقليدية و RF-PCD.

هنا مقارنة بين عرض ذروة ذروة التربتوفان عند التحليل باستخدام طريقة PCD التقليدية ، وطريقة RF-PCD ، والتيار غير المشتق من طريقة RF-PCD. عينة اختبار مكونة من 21 مكونا تحتوي على بعض المكونات التي تظهر استجابة لمخطط الاشتقاق وبعضها لم يتم فصلها واشتقاقها واكتشافها. تم فصل نفس الخليط أيضا واكتشافه غير مشتق للمقارنة.

هنا مقارنة بين شكل ذروة para-Cresol ، وكلاهما مشتق باستخدام عمود RF-PCD وغير مشتق ، هنا. بمجرد إتقانها ، يمكن إعداد هذه التقنية في نفس الوقت الذي يتم فيه تحليل اشتقاق العمود اللاحق التقليدي. عند تنفيذ هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر أن تكون قريبا من نسب التدفق الموصوفة قدر الإمكان.

باتباع هذا الإجراء ، يمكن استخدام كواشف اشتقاق العمود اللاحق الأخرى ، مثل OPA أو النينهيدرين أو الهالوجينات من أجل تحليل المركبات الأخرى. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن تكون لديك فكرة جيدة عن كيفية إعداد عمود تدفق التفاعل وضبطه.