Fly Climbing Assay: Une méthode pour tester la locomotion générale dans Drosophila melanogaster

Overview

Cette vidéo décrit une méthode simple pour quantifier la locomotion des mouches et montre l’analyse d’escalade effectuée.  L’essai d’escalade à la mouche est un test général de la fonction motrice qui repose sur une réponse géotaxis négative.

Protocol

Ce protocole est un extrait de Gevedon et coll., In Vivo Forward Genetic Screen to Identify Novel Neuroprotective Genes in Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2019).

1. Climbing Assay (Adapté de Ali et coll., J. Vis. Exp. (2011))

1. Valider l’essai d’escalade. Dans cette étude, testez l’essai d’escalade basé sur la méthodologie précédemment décrite par Ali et coll., en utilisant Elav^C155>UAS-Tau^R406W (présentant des taux de réussite d’escalade inférieurs) et Elav^C155>UAS-GFP (contrôle) et Elav^C155>UAS-mCherry (contrôle) mouches.
2. Retournez les mouches dans une chambre d’essai, une ligne à la fois (n’utilisez pas_{l’anesthésie co 2)} et laissez-leur récupérer pendant 5 min. Si le test est effectué à différents jours, effectuez l’analyse à la même heure de la journée. Dans cette étude, tous les analyses d’escalade ont été effectuées dans l’après-midi pour contrôler les effets circadiens sur la locomotion.
   NOTE (EN) Évitez d’exposer les mouches à la lumière directe du soleil lors des essais; cela nuuira à leur capacité de grimper.
3. Appuyez de force sur la chambre (côté marqué vers le bas) sur un tapis de souris placé sur une surface solide 3 fois afin que toutes les mouches commencent l’essai au fond. Observez la locomotion des mouches sur une période de 10 s.
4. Enregistrez le nombre de mouches qui atteignent ou passent la ligne de 5 cm dans ce temps, ainsi que le nombre total de mouches testées. Répétez le protocole, en attendant 1 min entre chaque essai, pour un minimum de 3 répétitions d’essai par ligne.
   NOTE (EN) Dans la présente étude, chaque flacon contenait entre 2 et 19 mouches pour le dépistage initial (mouches mâles) et entre 6 et 21 mouches pour l’analyse de l’insuffisance mutante des lignées femelles croisées.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
VWR® Drosophila Vial; Narrow	VWR	75813-160
VWR® General-Purpose Laboratory Labeling Tape	VWR	89097-912
Standard mouse pad
Stereoscope	Motic		Model SMZ-168
Drosophila Incubator	VWR	89510-750
R software package