Overview
このビデオでは、飛行移動を定量化する簡単な方法を説明し、実行されるクライミングアッセイを示します。 フライクライミングアッセイは、負のジオタキシス応答に依存する運動機能の一般的なテストです。
Protocol
このプロトコルは、ショウジョウバエメラノガスター、J.Vis.Exp.(2019)における新しい神経保護遺伝子を同定するためのGevedonら.、In Vivoフォワード遺伝的スクリーンからの抜粋である。
1. クライミングアッセイ(アリら、J.ヴィスExpから適応。(2011))
- クライミングアッセイを検証します。本研究では、ElavC155>UAS-TauR406W(低いクライミング合格率を示す)とElavC155>UAS-GFP(コントロール)およびElav C155>UAS-mCherry(コントロール)ハエを使用して、Aliらが以前に説明した方法論に基づいてクライミングアッセイをテストします。
- ハエを試験室に一度に1行ずつ反転させ(CO2麻酔を使用しない)、5分間回復させます。異なる日にテストを行う場合は、その日の同じ時間にアッセイを行います。本研究では、すべての登山アッセイを午後に行い、移動に対する概日的影響を制御した。
注テスト時にハエを直射日光に当てないようにしてください。これは彼らの登る能力を妨げるでしょう。 - 固体表面に置かれたマウスパッドにチャンバー(横下にマーク)を強制的にタップし、すべてのハエが下部のアッセイを開始します。10 sの期間にわたって飛ぶ移動を観察します。
- この時間内に5cm線に到達または通過するハエの数と、テストされたハエの総数を記録します。各試行の間に 1 分待機するプロトコルを繰り返し、1 行あたり最低 3 回の試行を繰り返します。
注本研究では、最初のスクリーニングのために2〜19ハエ(オスハエ)および6〜21の間に含まれる各バイアルは、交差した雌の線の突然変異欠乏分析のためにハエである。
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Materials
Name | Company | Catalog Number | Comments |
VWR® Drosophila Vial; Narrow | VWR | 75813-160 | |
VWR® General-Purpose Laboratory Labeling Tape | VWR | 89097-912 | |
Standard mouse pad | |||
Stereoscope | Motic | Model SMZ-168 | |
Drosophila Incubator | VWR | 89510-750 | |
R software package |