Overview
C. elegans البيض زرع السلوك يمكن أن توفر معلومات هامة في التنمية, الإنجابية, والدراسات التشريحية. يقدم هذا الفيديو الخطوات الهامة لفحص وضع البيض ويظهر تجربة عينة يتم فيها اختبار الدواء للتأكد من سمية الإنجاب.
Protocol
لي وكانغ ، وقياس تأثير المواد الكيميائية على نمو وتكاثر elegans Caenorhabditis، J. Vis. Exp. (2017).
1.C. elegans البيض وضع المقايسة
- احتضان البيض المتزامن مع العمر على لوحة NGM التي تحتوي على DMSO أو etoposide لمدة 64 ساعة (قبل الولادة الأولى) حتى مرحلة الشباب البالغين في 20 درجة مئوية.
ملاحظة: من الاختياري استخدام الديدان من تجارب قياس النمو. فمن المريح أن تفعل قياس النمو والبيض وضع المقايسة معا. - نقل 5 ديدان بالغة إلى لوحات NGM الجديدة بدون مواد كيميائية (الحالة 1 ، العلاج الكيميائي في غضون فترة زمنية معينة ، من البيض إلى مرحلة الشباب البالغين) أو لوحة NGM الجديدة التي تحتوي على نفس المعالجة الكيميائية (الحالة 2 ، التعرض المستمر للمواد الكيميائية خلال الفترة التجريبية الإجمالية) ، ومن ثم احتضانها لمدة 24 ساعة.
ملاحظة: من المستحسن إجراء نسخ متماثلة باستخدام لوحات NGM 3-5 لكل علاج؛ ويمكن استخدام هذه النسخ المتماثلة للتحليل الإحصائي. - نقل إلى لوحة NGM الجديدة كما هو موضح أعلاه وعدد البيض كل يوم. عد الديدان التي زحفت، ماتت، وفقست داخليا.
- كرر هذه الخطوات حتى تضع الديدان لا مزيد من البيض، وعادة في 5 أيام.
- حساب عدد البيض وضعت لكل دودة من كل لوحة، ومجموع هذه القيم كل يوم لمدة 5 أيام لتحديد العدد الإجمالي للبيض وضعت.
ملاحظة: استبعاد عدد الديدان التي زحفت خارج وفقست داخليا من الحساب.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Caenorhabditis elegans N2 | Caenorhabditis Genetics Center (CGC) | Wild type | |
| Dimethyl sulfoxide | Sigma, USA | D2650 | |
| Escherichia coli OP50 | Caenorhabditis Genetics Center (CGC) | ||
| Etoposide | Sigma, USA | E1383 | |
| 35 × 10 mm Petri dish | SPL Life Sciences, South Korea | 10035 | |
| Stereo microscope | Nikon, Japan | SMZ800N |
