Ensaio de colocação de ovos: um método para quantificar o comportamento de colocação de ovos de C. elegans

Overview

C. elegans comportamento de colocação de ovos pode fornecer informações importantes em estudos de desenvolvimento, reprodutivos e anatômicos.  Este vídeo introduz os passos importantes de um ensaio de colocação de ovos e mostra um experimento amostral no qual uma droga é testada para toxicidade reprodutiva.

Protocol

Lee e Kang, Medindo o Efeito dos Produtos Químicos no Crescimento e Reprodução de Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2017).

1.C. elegans Egg Laying Assay

1. Incubar os ovos sincronizados por idade na placa NGM contendo DMSO ou etoposide por 64 h (antes do primeiro nascimento) até o estágio adulto jovem a 20 °C.
   NOTA: É opcional usar os vermes dos experimentos de medição de crescimento. É conveniente fazer a medição de crescimento e o ensaio de colocação de ovos juntos.
2. Transfira 5 vermes adultos para as novas placas de GNM sem produtos químicos (condição 1, tratamento químico dentro de um determinado período de tempo, de ovos para estágio adulto jovem) ou nova placa de NGM contendo o mesmo pré-tratamento químico (condição 2, exposição contínua de produtos químicos durante o período experimental geral) e, em seguida, incuba-los por 24 h.
   NOTA: Recomenda-se fazer réplicas utilizando placas de 3-5 NGM para cada tratamento; essas réplicas podem ser utilizadas para análise estatística.
3. Transfira para a nova placa NGM como descrito acima e conte o número de ovos todos os dias. Conte os vermes que se arrastaram, morreram e foram eclodidos internamente.
4. Repita estes passos até que os vermes não coloquem mais ovos, geralmente em 5 dias.
5. Calcule o número de ovos colocados por verme de cada prato, e ressarca esses valores todos os dias durante 5 dias para determinar o número total de ovos colocados.
   NOTA: Exclua o número de vermes que se arrastou e eclodiu internamente a partir do cálculo.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Caenorhabditis elegans N2	Caenorhabditis Genetics Center (CGC)		Wild type
Dimethyl sulfoxide	Sigma, USA	D2650
Escherichia coli OP50	Caenorhabditis Genetics Center (CGC)
Etoposide	Sigma, USA	E1383
35 × 10 mm Petri dish	SPL Life Sciences, South Korea	10035
Stereo microscope	Nikon, Japan	SMZ800N