Yumurtlama Tahlil: C. eleganların Yumurtlama Davranışını Ölçmek İçin Bir Yöntem

Overview

C. elegans yumurtlama davranışı gelişimsel, üreme ve anatomik çalışmalarda önemli bilgiler sağlayabilir.  Bu video, bir yumurtlama testinin önemli adımlarını tanıtıyor ve bir ilacın üreme toksisitesi için test edildiği örnek bir deneyi gösteriyor.

Protocol

Lee ve Kang, Kimyasalların Caenorhabditis eleganlarınınBüyümesi ve Üremesi Üzerindeki Etkisini Ölçmek, J. Vis. Exp. (2017).

1.C Elegans Yumurtlama Tahlil

1. DMSO veya etoposide içeren NGM plakasındaki yaş senkronize yumurtaları 20 °C'de genç yetişkin aşamasına kadar 64 saat (ilk doğumdan önce) kuluçkaya yatırın.
   NOT: Büyüme ölçüm deneylerinden solucanların kullanılması isteğe bağlıdır. Büyüme ölçümü ve yumurtlama testini birlikte yapmak uygundur.
2. 5 yetişkin solucanı kimyasal içermeyen yeni NGM plakalarına (durum 1, yumurtalardan genç yetişkin aşamasına kadar belirli bir süre içinde kimyasal işlem) veya aynı kimyasal ön işlem içeren yeni NGM plakasına (durum 2, kimyasalların genel deneysel dönemde sürekli maruz kalması) aktarın ve ardından 24 saat boyunca kuluçkaya yatırın.
   NOT: Her tedavi için 3-5 NGM plaka kullanarak çoğaltmalar yapılması önerilir; bu çoğaltmalar istatistiksel analiz için kullanılabilir.
3. Yukarıda açıklandığı gibi yeni NGM plakasına aktarın ve her gün yumurta sayısını sayın. Sürünen, ölen ve iç yumurtadan çıkan solucanları sayın.
4. Solucanlar genellikle 5 gün içinde daha fazla yumurta bırakmayana kadar bu adımları tekrarlayın.
5. Her plakadan solucan başına bırakılan yumurta sayısını hesaplayın ve toplam yumurtlanan yumurta sayısını belirlemek için bu değerleri 5 gün boyunca her gün toplayın.
   NOT: Sürünen ve dahili olarak taranan solucan sayısını hesaplamanın dışında tutun.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Caenorhabditis elegans N2	Caenorhabditis Genetics Center (CGC)		Wild type
Dimethyl sulfoxide	Sigma, USA	D2650
Escherichia coli OP50	Caenorhabditis Genetics Center (CGC)
Etoposide	Sigma, USA	E1383
35 × 10 mm Petri dish	SPL Life Sciences, South Korea	10035
Stereo microscope	Nikon, Japan	SMZ800N