Summary
सही टेप या Drosophila ऊतकों में प्रोटीन का पता लगाने की क्षमता अपने बहुतायत और विकास की प्रक्रिया से संबंधित स्थानीयकरण के अध्ययन के लिए महत्वपूर्ण है । यहां ुपाल पंख टुकड़े करने के लिए एक सीधी प्रक्रिया का वर्णन है । इन पंखों को कई तकनीकों में नमूनों के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है (immunohistochemistry, पीसीआर परख आदि) ।
Abstract
विंग विकास में Drosophila melanogaster ऊतक के स्तर पर morphogenesis के अध्ययन के लिए एक आदर्श मॉडल है । इन उपांग भ्रूण के विकास के दौरान गठित विंग काल्पनिक डिस्क नाम कोशिकाओं के एक समूह से विकसित करना । लार्वा चरणों में काल्पनिक डिस्क बढ़ने, कोशिकाओं की अपनी संख्या में वृद्धि और monolayered उपकला संरचनाओं के गठन. ुपाल मामले के अंदर, काल्पनिक डिस्क बाहर कली और bilayers में एक लाइन है कि पंख के भविष्य मार्जिन बन जाता है साथ गुना । इस प्रक्रिया के दौरान, अनुदैर्ध्य primodia नसों विंग के भावी पृष्ठीय और ventral सतहों पर नस कोशिकाओं शुरू । ुपाल चरण के दौरान प्रत्येक सतह के नस कोशिकाओं की पट्टियों तंग ट्यूब उत्पन्न करने के लिए संवाद; एक ही समय में, पार नसों उनके गठन शुरू करते हैं ।
उपयुक्त आणविक मार्करों की मदद से, यह अपने विकास के दौरान पंख रचना प्रमुख तत्वों की पहचान करने के लिए संभव है. इस कारण से, इस संरचना में सही टेप या प्रोटीन का पता लगाने की क्षमता उनके बहुतायत और स्थानीयकरण विंग के विकास की प्रक्रिया से संबंधित अध्ययन के लिए महत्वपूर्ण है ।
प्रक्रिया यहां वर्णित ुपाल पंख जोड़ तोड़ पर केंद्रित है, कैसे ुपाल चरण के दौरान पंख टुकड़े पर विस्तृत निर्देश प्रदान करते हैं । ुपाल ऊतक के विच्छेदन तीसरे instar लार्वा में अपने समकक्षों की तुलना में अधिक प्रदर्शन करने के लिए मुश्किल है । यही कारण है कि इस दृष्टिकोण विकसित किया गया था, तेजी से और कुशल उच्च गुणवत्ता के नमूने प्राप्त करने के लिए । कैसे immunostain और माउंट इन पंखों के नमूनों का विवरण, प्रोटीन या कोशिका घटकों के दृश्य की अनुमति देने के लिए, प्रोटोकॉल में प्रदान की जाती हैं । थोड़ी विशेषज्ञता के साथ यह समय की एक छोटी राशि में 8-10 उच्च गुणवत्ता ुपाल पंख इकट्ठा करने के लिए संभव है ।
Introduction
विंग काल्पनिक डिस्क से Drosophila पंख विकसित कर रहे हैं । इन विंग डिस्क के मौलिक भ्रूण उपकला से invaginate कि 20-30 काल्पनिक कोशिकाओं के छोटे समूहों के रूप में भ्रूण विकास के दौरान एक तरफ रख रहे हैं. जबकि लार्वा तीसरे instar चरण के लिए बढ़ रहा है, बँटवारा अपनी संख्या (लगभग ५०००० कोशिकाओं) की स्थापना और विंग डिस्क1,2,3बनाने में विशिष्ट विशेषता समय पर काल्पनिक कोशिकाओं में होता है, 4. पैदा कोशिकाओं के रूप में, वे एक ट्यूबलर उपकला फैशन, एक आत्म तह कॉम्पैक्ट सर्पिल में जिसके परिणामस्वरूप. कोषस्थ के दौरान, डिस्क उपकला दूरबीनों बाहर दो स्तरित पंख बनाने के लिए और अनुदैर्ध्य नसों उनके बीच अंतराल के रूप में शुरू करते हैं, जो विंग विकासात्मक5,6के दौरान दो बार होता है.
नसों की व्यवस्था हमेशा एक समान पैटर्न है; आसानी से नसों के गठन के भीतर हर परिवर्तन की पहचान करने की क्षमता उत्परिवर्तनों अत्यंत दिखाई देता है (जैसे लापता या अतिरिक्त नसों, नस पदों में परिवर्तन, आदि.) । दिलचस्प है, phenotype रूपांतरों आमतौर पर संकेत मार्ग है कि पंख के विकास के लिए प्रासंगिक है के ज्ञात या उपंयास घटकों में उत्परिवर्तन के सबूत हैं । स्थिति का निर्धारण करने और शिरा और शिरा क्षेत्रों को बनाए रखने में एक भूमिका निभाता है कि रास्ते में से एक हाथी (एचएच) मार्ग6,7,8है ।
एक मॉडल प्रणाली के रूप में ुपाल विंग के महत्व को देखते हुए, यह अच्छी गुणवत्ता के नमूने के साथ काम करने के लिए प्राप्त करने के लिए महत्वपूर्ण हो जाएगा । अतीत में, वैज्ञानिकों कि टुकड़े Drosophila पंख के लिए प्रोटोकॉल प्रकाशित किया है एक उचित मार्गदर्शन करने के लिए व्यावहारिक नमूने प्राप्त नहीं दिया है । एक शोधकर्ता के मार्गदर्शन के बिना एक स्पष्ट रूप से प्रक्रिया की कल्पना नहीं कर सकते । इन वैकल्पिक विदारक दृष्टिकोणों में pupa दो में विभाजित है, आसपास के ऊतकों से पंख को अलग करना और मलबे को हटाने के लिए बार से धोया जाता है । दृष्टिकोण के इस तरह के संदूषण के पंख मुक्त लेकिन पिछले अनुभव की वजह से प्रक्रिया धीमी है और वहां नाजुक पंख9की संरचना समझौता का एक उच्च मौका है छोड़ने का दावा है ।
प्रक्रिया यहां वर्णित की मांग के लिए एक तेज और कुशल को ुपाल विंग विशिष्ट प्रोटीन या immunodetection प्रोटोकॉल या पोलीमरेज़ श्रृंखला प्रतिक्रिया (पीसीआर) परख का उपयोग टेप का पता लगाने के लिए उपयुक्त नमूनों को प्राप्त करने के लिए विधि को खोजने के द्वारा विकसित किया गया था । यह उदाहरण देकर स्पष्ट करने के लिए, अभिव्यक्ति और स्थानीयकरण (Ptc या एचएच मार्ग की विहित रिसेप्टर) का ुपाल विंग नमूनों में पाया जाता है, एक प्रोटोकॉल है कि प्रासंगिक विवरण को सफलतापूर्वक पूरा करने के लिए शामिल है प्रदान प्रक्रिया.
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Protocol
Day 1
1. संग्रह और संवर्धन कोषस्थों ।
- puparium गठन के बाद 0 एच निकालें (APF) या prepupae कल्चरल शीशियों से एक गीली तूलिका का उपयोग कर और उंहें नई शीशियों में जगह लगभग विकास की अवधि को पूरा करने के लिए (२.१ और २.२ देखें) ।
नोट: मक्खियों की एक स्वस्थ जनसंख्या मानक संवर्धन प्रोटोकॉल का उपयोग कर बनाए रखा जाना चाहिए । तीन या चार दिनों में अंडे जो रखी है के बाद, वयस्कों शीशियों से हटाया जा सकता है व्यक्तियों के एक इष्टतम विकास की अनुमति है । तीसरा instar लार्वा कोषस्थ आरंभ होने तक वे लगातार तापमान पर कायम रहते हैं । लार्वा/ुपाल संक्रमण 0 ज APF माना prepupa के गठन के द्वारा चिह्नित है । prepupa एक आयताकार, पूर्वकाल spiracles फैलाने के साथ गोल आकार है कि एक ऑटोमोबाइल सफेद लार्वा है ।
Day 2
2. स्थानांतरण, विच्छेदन और निर्धारण ।
- स्थानांतरण कोषस्थों (विकास के समय से पहले 2 एच एक तूलिका के साथ पूरा हो गया है), डबल पक्षीय टेप के साथ माइक्रोस्कोप स्लाइड करने के लिए इसका पालन किया । कोषस्थों स्थिति ऊपर पृष्ठीय पक्षों के साथ एक पंक्ति बनाने के लिए और cephalic एक ही दिशा का सामना करना पड़ समाप्त होता है ।
- लगातार तापमान के लिए माइक्रोस्कोप स्लाइड लौटें और कोषस्थों उचित विकासात्मक समय (यानी 24-30 h APF) को पूरा करने के लिए अनुमति दें ।
नोट: डबल पक्षीय टेप के साथ माइक्रोस्कोप स्लाइड ुपाल मामले को दूर करने के लिए एक क्षणभंगुर विच्छेदन मंच होगा (नीचे देखें) । माइक्रोस्कोप स्लाइड (शीशी के बाहर) पर समय चूक ुपाल यह संदंश के साथ आसानी से टूट बनाने के मामले को सुखाने में मदद करता है । - संदंश का उपयोग कर ुपाल मामले से operculum निकालें ।
- संदंश के साथ मामला तोड़ (जैसा कि वीडियो में दिखाया गया है) pupa के पक्ष के साथ एक लाइन बनाने के caudal अंत तक । उचित रोशनी के साथ यह संभव है pupa के आंतरिक आकार का पता लगाने के सिर्फ ुपाल विंग के काज के ऊपर एक जगह स्पष्ट कर रही है । इस अंतरिक्ष pupa को नुकसान पहुंचाए बिना खोलने के प्रदर्शन के लिए एक गाइड के रूप में कार्य करता है ।
- मामले के भागों को हटा दें, उन्हें खोला सीमा से उठा और उन्हें विपरीत दिशा में ले जाने के लिए जहां डबल पक्षीय टेप उन्हें पकड़ जाएगा. विच्छेदन के अंत में कोषस्थों लगभग "नग्न" हो जाएगा, मामले का केवल एक छोटा सा टुकड़ा पीछे टिप को कवर किया जाएगा ।
नोट: मामले की एक छोटी राशि के ऊपरी caudal अंत पर छोड़ने के उद्देश्य से मामले से एक चिकनी रिहाई के लिए डबल पक्षीय टेप के साथ स्लाइड पर सुनिश्चित है । इस कार्रवाई के पीछे तर्क है क्योंकि अगर तुम बहुत मामले तुम बहुत pupa हानिकारक जोखिम के बहुत दूर हटा दें । दूसरी ओर अगर आप बहुत कम निकालते हैं तो pupa आसानी से केस से मुक्त नहीं आ पाएंगे । - नीचे पुश (संदंश के साथ) मामले के शेष । इस आंदोलन pupa के पूर्वकाल अंत बढ़ाने के लिए, दोनों सिर और छाती एक तरजीही स्थिति में रहने के लिए पालन करने के लिए और बाद में कदम में स्थानांतरित करने की अनुमति होगी ।
- डबल पक्षीय टेप के साथ एक नई स्लाइड ले लो और यह pupa या कोषस्थों पंक्ति पर पलटना । हम कोषस्थों के टूटना को रोकने के लिए stereomicroscope की सहायता से आंदोलनों को देख कर इस दृष्टिकोण का प्रदर्शन करने की सलाह देते हैं ।
- टेप करने के लिए छड़ी कोषस्थों बनाने के लिए थोड़ा प्रेस और धीरे मामलों के बाकी हिस्सों से कोषस्थों को दूर करने के क्रम में स्लाइड फिसलना. माइक्रोस्कोप स्लाइड पलटना: कोषस्थों अपने सिर के स्तर पर पृष्ठीय पक्ष पर अटक जाएगा/छाती क्षेत्र ।
- 4% paraformaldehyde के साथ सभी नग्न कोषस्थों कवर और 10 मिनट रुको । हमारे अनुभव में, निर्धारण के साथ समय की इस चूक के लिए यह फर्म, कम चिपचिपा और आसानी से संभाल बनाने छल्ली की निरंतरता बदलने में मदद करता है ।
नोट: ribonucleic एसिड (आरएनए) निष्कर्षण करने के लिए, RNase मुक्त पानी के साथ बनाया फॉस्फेट बफर खारा (पंजाब) के लिए स्थानापन्न paraformaldehyde और ुपाल पंख एक कटौती बनाने (कैंची की सहायता से) प्रत्येक संलग्न के काज बिंदु के पास हटाने. संदंश का उपयोग करके, ुपाल विंग को guanidinium thiocyanate और phenol रिएजेंट के 1 मिलीलीटर के साथ एक microcentrifuge ट्यूब पर स्थानांतरित करें । 50-80 पंखों की कुल इकट्ठा करने के बाद, शाही सेना निष्कर्षण10,11के प्रदर्शन तक-८० डिग्री सेल्सियस पर microcentrifuge ट्यूब की दुकान । - विंग या इसके पास के काज क्षेत्र में एक छोटा सा चीरा बनाओ । विंग उपकला तक पहुंचने के लिए निर्धारण की अनुमति दें । विंग पर एक पिपेट (p200) फ्लश निर्धारण का उपयोग करना । फ्लश करते समय दूषित निर्धारण को नए के साथ बदलें । निस्तब्धता के बाद, 5 मिनट के लिए निर्धारण में पंख रखें ।
नोट: हालांकि इस पैंतरेबाज़ी दूर दूषित ऊतक के बहुमत स्पष्ट करने में मदद करता है, कुछ hemocytes और वसा बूंदों विंग के पृष्ठीय और ventral उपकला परतों के बीच में फंस रह सकते हैं ( चित्र 1aदेखें) । - छल्ली सीमाओं से संदंश के साथ आंसू (के रूप में वीडियो में दिखाया गया है) छेद का विस्तार और छल्ली थैली से पंख उपकला की रिहाई को सक्षम करने से । एक बार विंग ऊतक जारी किया है, यह paraformaldehyde समाधान में छोड़ निर्धारण के 30 मिनट पूरा करने के लिए ।
- PBST (ट्राइटन X-१०० ०.०५%) के साथ भरा एक 4-पडे प्लास्टिक डिश के लिए तय पंख स्थानांतरण । 4 डिग्री सेल्सियस पर रात भर स्टोर ।
Day 3
3. प्राथमिक एंटीबॉडी मशीन ।
- Permeabilize ऊतक PBST में ुपाल पंख की मशीन (ट्राइटन X-१०० ०.२%) 15 मिनट के लिए एक कमाल की तरल मध्यम आंदोलन की सुविधा के लिए एक मंच का उपयोग कर ।
नोट: नमूनों बढ़ते जब तक, कदम एक कमाल मंच का उपयोग किया जाना चाहिए । - 1 ज के लिए PBSTA (BSA 3%, ट्राइटन X-१०० ०.१%) का उपयोग करके नमूनों को ब्लॉक करें ।
- एक ही बफर का प्रयोग करने के लिए प्राथमिक एंटीबॉडी (माउस विरोधी Ptc, 1:100) पतला और 4 डिग्री सेल्सियस पर रात भर ुपाल पंख गर्मी ।
Day 4
4. माध्यमिक एंटीबॉडी की मशीन ।
- धो नमूने 4 एक्स 10 मिन PBST के साथ प्रत्येक (ट्राइटन x-१०० ०.०५%)
- माध्यमिक एंटीबॉडी के साथ मशीन (जैसे, विरोधी माउस संयुग्मित fluorochrome करने के लिए) PBSTA में उचित एकाग्रता के लिए पतला (BSA 3%, ट्राइटन X-१०० ०.१%) अंधेरे में कमरे के तापमान पर, के लिए 2 एच ।
नोट: यदि यह उचित है, का उपयोग 4 ', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) और/या phalloidin ऊतक counterstain । द्वितीयक एंटीबॉडी के साथ इन जांचों को खाते में fluorochromes के उत्सर्जन तरंग दैर्ध्य को रोकने के संकेतों को ओवरलैप करने के लिए जोड़ें । - धो नमूने 4 एक्स 10 मिन PBST के साथ प्रत्येक (ट्राइटन x-१०० ०.०५%)
5. बढ़ते
- माइक्रोस्कोप स्लाइड पर पारदर्शी नेल पॉलिश के 4 डॉट्स रखकर एक नमूना स्लाइड तैयार करें जैसे कि वे एक वर्ग के कोने थे ।
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Representative Results
प्रोटोकॉल ुपाल विंग नमूने है कि पंख के परिचित आकृति विज्ञान को बनाए रखने प्राप्त करने के लिए एक सरल तरीका प्रदान करता है । इन तैयारियों से यह संभव है कि 2 के रूप में पेश किया जा सकता है कि छवियों के ढेर प्राप्त करने के लिए डी या 3-डी, विंग के भेदभाव के दौरान वितरण और/या प्रोटीन के संवर्धन की जांच करने के लिए. एक समान प्रोटोकॉल (२.९ में नोट देखें) के लिए बड़े ुपाल विंग नमूना इकट्ठा करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता (50-80 ुपाल पंख शामिल) पूरक deoxyribonucleic एसिड (सीडीएनए) संश्लेषित करने के लिए आवश्यक, पीसीआर प्रतिक्रियाओं में इस्तेमाल किया टेम्पलेट.
चित्र 1 : हेज हॉग मार्ग जीन में Drosophila ुपाल पंख
(क) समझौता, हेज हॉग मार्ग के विहित रिसेप्टर, 24-30 ज APF पर visualized था माउस विरोधी का उपयोग कर Ptc. नाभिक DAPI के साथ counterstained थे जबकि actin रेशा एक हरे-फ्लोरोसेंट phalloidin का उपयोग कर रहे है visualized । Actin वितरण विंग नसों और patch ed व्यंजक के साथ उसके संबंध को स्थानीयकृत करने में मदद करता है । एक ही समय में, phalloidin दाग कुछ hemocytes और वसा की बूंदों (बड़े हलकों) के रूप में दूषित ऊतक की उपस्थिति का पता चलता है । 20x आवर्धन, पूर्वकाल ऊपर है । स्केल बार, १०० µm (ख) Amplicons करने के लिए actin (लेन 1, २८० बीपी) और पीटीसी (लेन 2, २३६ बीपी) एक समान विच्छेदन प्रोटोकॉल द्वारा उत्पंन दूत आरएनए (synthetized) विंग नमूना से सीडीएनए mRNA का उपयोग कर प्राप्त किया गया । मेगावाट, आणविक भार । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
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Discussion
इस वीडियो में वर्णित विच्छेदन की विधि कई प्रकार की तकनीकों के लिए विभिन्न विकास चरणों से Drosophila ुपाल पंखों के उच्च गुणवत्ता के नमूने तैयार करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है (उदा, इम्यूनोफ्लोरेसेंस, सीडीएनए संश्लेषण पीसीआर परख करने के लिए, इन विट्रो विंग विकास) । इस विधि के संदर्भ में वैज्ञानिक शामिल 24-30 एच APF का इस्तेमाल किया है । लेकिन छोटे या पुराने pupa के विच्छेदन में आवश्यक कदम के भीतर कोई बाधा नहीं होनी चाहिए । परिवर्तन छोटे चरण pupa को समायोजित करने के लिए किया जा करने के लिए हो सकता है ।
प्रोटोकॉल एक ही समय में एक pupa या कई कोषस्थों टुकड़े करने के लिए किया जा सकता है । इस प्रक्रिया में तेजी लाने में मदद करता है, यह आसान पंखों की एक बड़ी संख्या तक पहुंचने के लिए कर रहे है विदारक । इस मामले में एक ही समय में 4-5 कोषस्थों की एक पंक्ति को हटाने का विकल्प है । आप कोषस्थों को एक साथ निकाल सकते हैं या यदि यह संभव नहीं है, तो व्यक्तिगत रूप से उसी स्लाइड पर निकालना जारी रखें (वीडियो की अनुभाग III देखें: "एकाधिक कोषस्थों विच्छेदन"). खोला मामले से नग्न pupa हटाने के लिए, यह महत्वपूर्ण है कि पीछे टिप काफी छोटा है । यह पूरी तरह से मामले को दूर करने के लिए संभव है; हालांकि यह हस्तांतरण तेजी से करना होगा, पूरे मामले को हटाने के चुनौतीपूर्ण है और वहां pupa को नुकसान पहुंचाने का एक बड़ा खतरा है ।
अनुभव का हुक्म चलता है कि एक महत्वपूर्ण पैंतरेबाज़ी पर विचार करने के लिए छोड़ (पिछले 2 घंटे के विकास के समय को पूरा करने के लिए निर्धारित) pupa मशीन के अंदर माइक्रोस्कोप स्लाइड से जुड़ी है लेकिन शीशी के बाहर । समय की इस चूक को तोड़ने के लिए यह आसान बनाने के मामले शुष्क करने में मदद करता है । immunohistochemistry के लिए विच्छेदन के दौरान एक और महत्वपूर्ण कदम, बंद छल्ली कि पंख उपकला कवर छील है, जिससे पूरे पंख सतह को एंटीबॉडी का उपयोग प्रदान करते हैं । यह कदम कई मिनट के लिए फिक्सिंग (काज बिंदु पर चीरा बनाने के बाद), क्योंकि निर्धारण ऊतकों स्थिर और छल्ली निरंतरता परिवर्तन, यह आसान छील करने के लिए बनाने के बाद किया जाना चाहिए ।
सभी immunohistochemistry कदम प्रदर्शन करते हुए, पंख लगातार आंदोलन (कमाल मंच) में हैं कि सुनिश्चित करें । आंदोलन के इंटरचेंज और धोने और गर्मी के दौरान समाधान के प्रवेश में सुधार करने में मदद करता है । फिर भी, यह करने के लिए उन्हें धीरे से इस नाजुक संरचना की आकृति विज्ञान में अवांछित विकृतियों की घटना से बचने के लिए महत्वपूर्ण है (यानी, यह पर्याप्त है कि मंच के दोलनों थोड़ा तरल मध्यम से युक्त ले जाने नमूने) ।
इस प्रक्रिया ुपाल विंग विच्छेदन के लिए पहले से ही प्रकाशित तरीकों के लिए एक वैकल्पिक और पूरक दृष्टिकोण प्रदान करता है ।
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Disclosures
लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।
Acknowledgments
हम इस परियोजना के लिए दिए गए वित्तीय सहायता के लिए CSIC शुक्रिया अदा करना चाहूंगा, मारियाना Di Doménico को फोकल माइक्रोस्कोप के साथ उसे तकनीकी सहायता के लिए; अपनी पांडुलिपि सुधार के लिए जोस लियोनार्डो Báez; वीडियो के निर्माण के लिए अपने समर्पण के लिए Luciano कोरिया; वीडियो और इस अध्ययन में इस्तेमाल किया स्टॉक्स प्रदान करने के लिए ब्लूमिंगटन Drosophila शेयर केंद्र के लिए उसकी आवाज उधार लेने के लिए नतालिया Rosano के लिए । Apa1 मोनोक्लोनल विरोधी-Ptc इसाबेल ग्युरेरो द्वारा विकसित के विकासात्मक अध्ययन Hybridoma बैंक (DSHB) से niched के तत्वावधान में प्राप्त की और आयोवा विश्वविद्यालय, जैविक विज्ञान विभाग, आयोवा सिटी, आइए ५२२४२ द्वारा बनाए रखा गया था ।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Stereomicroscope with cool light illumination | Nikon | SMZ1000 | |
| Rocking platform | Biometra (WT 16) | 042-500 | |
| Microscope slides | StarFrost | 8037/1 | |
| Cover glasses (24 x 32 mm) | Deltalab | D102432 | |
| Forceps | F.S.T | 11252-00 | |
| Scissors | Lawton | 63-1400 | |
| Multi-well plastic dish | Thermo Scientific | 144444 | |
| p100 or p200 pipette | Finnpipette (Labsystems) | 9400130 | |
| 1X PBS (Dulbecco) | Gibco | 21600-010 | |
| 4% paraformaldehyde | Sigma | 158127 | |
| Triton X-100 | Sigma | T8787 | |
| BSA | Bio Basic INC. | 9048-46-8 | |
| Glycerol | Mallinckrodt | 5092 | |
| Tris | Amresco | 497 | |
| TRIzol Reagent | Ambion | 15596026 | |
| DEPC treated water | MO.BIO | 17011-200 | |
| Alexa Fluor 546 goat anti-mouse IgG (H+L), 2 mg/mL (working dilution 1/800) |
Invitrogen | A11030 | |
| Monoclonal anti-Ptc (Apa-1) 54 μg/mL (working dilution 1/100) |
Developmental Studies Hybridoma Bank (DSHB) | By Isabel Gerrero from DSHB under the auspices of the NICHD and maintained by The University of Iowa, Department of Biological Sciences, Iowa City, IA 52242. | |
| DAPI, 1 mg/mL (working dilution 1/5000) |
Invitrogen | 62248 | |
| Phalloidin conjugated to Alexa 488, 300 U/1.5 mL methanol (1/600 working dilution) |
Invitrogen | A12379 | |
| Canton S (fly stock) | Bloomington Drosophila Stock Center |
References
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