Summary
Vi præsenterer her, en protokol for at undersøge pupation præferencen af modne larver af Ectropis grisescens svar på jord faktorer (fx, substrat type og fugt indhold) bruger valg bioassays. Vi præsenterer også en protokol af nej-valg bioassays til at bestemme de faktorer, der påvirker pupation adfærd og efterladte af E. grisescens.
Abstract
Mange insekter lever over jorden som larver og voksne og som forpupper under jorden. I forhold til de overjordiske stadier af deres livscyklus, er mindre opmærksomhed blevet betalt på hvordan miljømæssige faktorer påvirker disse insekter når de forpupper i jorden. Te looper, Ectropis grisescens Warren (Lepidoptera: arkæologiske), er et alvorligt skadedyr af te planter og har forårsaget enorme økonomiske tab i det sydlige Kina. De protokoller er beskrevet her til formål at undersøge, gennem multiple-choice bioassays, om ældre sidste instar E. grisescens larver kan diskriminere jorden variabler som substrat type og fugt indhold, og bestemme, gennem nej-valg bioassays, virkningen af substrat type og fugt indhold på pupation adfærd og fremkomsten succes E. grisescens. Resultaterne ville øge forståelsen af E. grisescens pupation økologi og kan bringe indsigt i jordbundsforvaltning taktik for at undertrykke E. grisescens populationer. Derudover kan disse bioassays ændres for at studere påvirkningerne af forskellige faktorer på pupation adfærd og efterladte af jord-pupating skadedyr.
Introduction
I forhold til larve og voksen stadier af insekter, er den puppe stadie yderst sårbare på grund af den begrænsede mobile evne af pupper, som hurtigt ikke kan flygte fra farlige situationer. Pupating under jorden er en fælles strategi, der anvendes af forskellige grupper af insekter (f.eks.i ordrer Diptera1,2,3,4, Coleoptera5, Hymenoptera6, Thysanoptera7, og Lepidoptera8,9,10,11,12) for at beskytte dem mod overjordiske rovdyr og miljømæssige risici. Mange af dem er svære landbrugs- og skovbrugssektorerne skadedyr1,2,3,4,5,6,7,8 ,9,10,11,12. De modne larver af disse jord-pupating insekter som regel forlader deres værter, falder på jorden, vandre for at finde en passende site, graver sig ned i jorden og konstruere en puppe kammer for pupating8,10.
Te looper, Ectropis grisescens Warren (Lepidoptera: arkæologiske), er en af de mest betydningsfulde defoliator skadedyr af te plante, Camellia sinensis L.13. Selv om denne art blev første gang beskrevet i 1894, det har været fejlagtigt identificeret som Ectropis obliqua Prout (Lepidoptera: arkæologiske) i seneste årtier14,15. Forskelle i morfologi, biologi og geografiske fordeling mellem de to søskende arter har været beskrevet i nogle nylige studier14,15,16. For eksempel, Zhang et al. 15 rapporteret at E. skrå hovedsagelig fandt sted på grænsen af tre provinser (Anhui, Jiangsu og Zhejiang) i Kina, mens E. grisescens har en meget bredere distribution i forhold til E. skrå. Derfor, økonomiske tab som følge af E. grisescens er i høj grad overset, og viden om denne skadeorganisme skal revideres grundigt og fornyet16,17,18,19 . Vores tidligere undersøgelser viste, at E. grisescens foretrækker at forpupper inden for jord, men kunne også forpupper når jorden ikke er tilgængelige (no-pupation-substrat betingelser)11,12.
Dette dokument indeholder en trinvis procedure for at (1) bestemme pupation præference af E. grisescens svar på faktorer som substrat type og fugt indhold ved hjælp af multiple choice bioassays, og (2) bestemme virkningen af abiotiske faktorer på pupation adfærd og fremkomsten succes af E. grisescens ved hjælp af nej-valg bioassays. Alle disse bioassays er udført under velkontrollerede laboratorieforhold. Også, disse bioassays er tilpasset for at vurdere indflydelsen af andre faktorer på pupation adfærd og efterladte af forskellige jord-pupating insekter.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. fugt-valg Bioassays at bestemme Pupation præference af E. grisescens
-
At opnå modne sidste instar larver af E. grisescens
- Skåret frisk skud (30-40 cm i længden) af te planter (Camellia sinensis L.). Indsæt 25-30 skud i en 250 mL trekantede kolbe. Fyld kolben med vand fra hanen. Sætte 3-4 flasker (med te skud) i en plast bassin (oversiden: 51 cm i diameter; nederst side: 40 cm i diameter, højde: 16 cm).
- Frigive 1.000-2.000 larver (anden til femte instar) af laboratoriet koloni af E. grisescens på bladene af tea skud i hvert bassin. Opretholde disse larver på kontrollerede laboratorieforhold [en lysperiode på 14 h af lys efterfulgt af 10 h mørke (14:10 L:D), 60-90% relativ luftfugtighed (RH) og 24-28 ° C]. Omhyggeligt overføre larver på friske blade i hånden hver 1-2 d. Hver dag Fjern afføring og snavs fra bunden af bassiner.
- Vælg modne sidste instar larver, der falder fra bladene af tea skud og aktivt vandrer på bunden af bassinet. Få mindst 240 modne larver for at sikre, at nok larver er tilgængelige for bioassays.
Bemærk: Kun vælge aktivt vandrer larverne til eksperimenter. Vælg ikke larver, at et ophold på bladene, fordi disse ikke er klar til forpupper. Også, du ikke Vælg prepupae med begrænset mobile aktiviteter, fordi de ikke vil aktivt søge efter de rette betingelser efter frigives i bioassay arenaer.
-
Substrat forberedelse
- Indsamle og identificere 4 typer af underlag (f.eks.sand, sandet lerjord 1, sandet ler 2, og sande loam) bruger araeometri metode20. Sterilisere jorden og sand på ovn 80 ° C tørretumbler for > 3 d, og derefter helt tør jord og sand ved 50 ° C i flere uger indtil tørvægt af substrat prøverne ikke ændrer længere over tid.
- Jorden den tørre jord med træ pestles og morterer. Strø sand og jordet jorden gennem en 3 mm sigte og gemme dem i genlukkelig plastposer.
- Beregne forskellige fugt indholdet af hver substrat (sand, sandet lerjord 1, sandet ler 2, eller sande loam) som følger2:
- Tilføje den nødvendige mængde destilleret vand i de genlukkelig plastposer indeholdende tør jord eller sand til at forberede 5%-, 20%-, 35%, 50% - 65%- og 80%-fugt substrat. Blandes grundigt i destilleret vand og jord eller sand.
-
Bioassay arena forberedelse
- Lige dele af polypropylen containere (oversiden: 20,0 cm i længde x 13,5 cm i bredden, nederste side: 17,0 cm i længde x 10,0 cm i bredde, højde: 6,5 cm) i 6 kamre med vandtæt polyvinylchlorid (PVC) plader (højde: 3,5 cm). Fix PVC-plader og forsegle revner ved hjælp af hot lim.
Bemærk: Seal helt nogen knæk hen til forhindre vand gennemtrængning. - For hver test, udfylde de 6 kamre ved hjælp af den samme type af substratet med forskellige fugt indhold (5%-, 20%-, 35%-, 50% - 65%- og 80%-fugt) (figur 1a).
Bemærk: Brug kun 1 type af substrat af forskellige fugt indhold i hver test. Tilfældigt tildele rækkefølgen af kamre, der indeholder substrat med 6 fugt indhold. - Indsæt 4-6 stykker af frisk te blade ved hjælp af små stykker tape til at dække den indvendige overflade af låg af polypropylen containere (figur 1b).
- Lige dele af polypropylen containere (oversiden: 20,0 cm i længde x 13,5 cm i bredden, nederste side: 17,0 cm i længde x 10,0 cm i bredde, højde: 6,5 cm) i 6 kamre med vandtæt polyvinylchlorid (PVC) plader (højde: 3,5 cm). Fix PVC-plader og forsegle revner ved hjælp af hot lim.
Figur 1: eksempler på bioassay arenaer for valg tests. (en) vandtæt polyvinylchlorid (PVC) plader anvendes til lige så opdele polypropylen containere i 6 kamre. PVC-plader er rettet med varmt lim, og eventuelle revner er omhyggeligt forseglet. I dette eksempel anvendes sandet lerjord 2 med forskellige fugt indhold (5%, 20%, 35%, 50%, 65% og 80% fugt) til at udfylde kamre i de vilkårligt tildelt ordrer. (b) friske te blade er indsat på den indvendige side af låg hvor det modne Ectropis grisescens larver vil blive frigivet. (c) PVC plader anvendes til lige så opdele polypropylen containere i 4 kamre, som er fyldt med 4 typer af substrater (sand, sandet lerjord 1, sandet ler 2, og sande loam) ved 50% fugt. Dette tal er blevet ændret fra Wang et al. 11. venligst klik her for at se en større version af dette tal.
-
Bioassay indstilling og dataregistrering
- Frigive 30 modne sidste instar larver (fremstillet i trin 1.1.3) på de friske teblade klistret på låget af polypropylen beholderen. Omhyggeligt vælter øjenlåg og tæt dække objektbeholderen polypropylen.
- Gentag hver test 8 x. Vedligeholde bioassay arenaer i miljømæssige kammer omgivelser på en 14:10 (L:D) lysperiode og 26 ° C.
- På dag 5, tælle antallet af pupper på overfladen af jorden i hver afdeling. Også, demontere bioassays og tælle antallet af pupper i underlaget.
Bemærk: Kun tælle de levende pupper på eller inden for underlaget. Kontrollere pupper levedygtighed ved at observere abdominal bevægelser efter rørende pupper med pincet.
-
Dataanalyse
- For hver test, beregne procentdelen af pupper fundet i kamrene i hver replikeres. Dataoverførslen procentdel til log-forholdet ved hjælp af metoden leveres af Kucera og Malmgren21.
- Sammenlign procentdelen af pupper (transformerede data) i hver afdeling ved hjælp af en envejs variansanalyse (ANOVA). Angive betydningen niveauer på α = 0,05 for hver test.
2. underlaget-valg Bioassays til at bestemme Pupation præference af E. grisescens
- Gentag trin 1.1 at få modne sidste instar larver, og trin 1.2 for at forberede substrat med forskellige fugt indhold. Denne gang, kun 20%, 50% og 80%-fugt substrat er nødvendige.
-
Forberedelse af bioassay arenaer
- Svarende til trin 1.3.1, lige så opdele polypropylen containere i 4 kamre ved hjælp af PVC-plader. Fix PVC-plader og forsegle revner ved hjælp af hot lim.
- For hver prøve skal fylde afdelingerne med de 4 typer af substrater (sand, sandet lerjord 1, sandet ler 2, og sande loam), der har den samme vandindhold (20%, 50% eller 80% fugt) med tilfældigt tildelt ordrer (figur 1 c). Gentag trin 1.3.3 at forberede låg.
- Gentag trin 1.4 at indstille bioassays og registrere data og trin 1,5 for at analysere dataene.
3. nej-valg Bioassays at bestemme jord-gravende adfærd og fremkomsten succes af E. grisescens
- Gentag trin 1.1 at opnå de modne sidste instar larver, og trin 1.2 for at forberede de 4 substrater (sand, sandet lerjord 1, sandet ler 2, og sande loam) på 3 fugt indhold (20%, 50% og 80% fugt).
-
Bioassay indstilling
- Tilføj substrat i en plastikbeholder (oversiden: 11,5 cm i diameter; nederst side: 8,5 cm i diameter, højde: 6,5 cm) til en dybde på 3 cm. I alt, sikre at der bliver 12 behandlinger (kombinationer af 4 substrat typer og 3 fugt indhold). Gentag hver behandling 7 x.
- Frigive 15 modne sidste instar larver på underlag af hver bioassay arena. Forsegle beholdere ved at dække stramt låg. Vedligeholde bioassays i miljømæssige kammer omgivelser på en 14:10 (L:D) lysperiode og 26 ° C.
Bemærk: Der bliver ingen grund til at indsætte friske te blade på låg som nævnt i valg bioassays.
-
Dataregistrering og analyser
- På dag 3, tælle antallet af pupper og eventuelle døde larver på overfladen af hver replikat substrat. Beregne procentdelen af E. grisescens individer, der borede til underlaget som følger:
- Registrere antallet af nye voksne hver dag, indtil ikke mere voksen kom frem for 15 d. beregne fremkomsten succes som følger:
- Sammenlign procentdelen, borede enkeltpersoner og fremkomsten succes blandt de behandlinger ved hjælp af en-vejs ANOVA. Angive betydningen niveauer på α = 0,05.
- På dag 3, tælle antallet af pupper og eventuelle døde larver på overfladen af hver replikat substrat. Beregne procentdelen af E. grisescens individer, der borede til underlaget som følger:
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Fugt-valg bioassays viste, at markant flere E. grisescens individer pupated på eller inden for 5% og 35% fugt sand sammenlignet med 80%-fugt sand (figur 2a). Dog væsentligt foretrak flere enkeltpersoner at forpupper på eller i jorden (sandet lerjord 1 og 2 og silt ler), der havde en mellemliggende vandindhold (tal 2b - 2d).
Figur 2: resultater fra fugt-valg bioassays. Disse paneler viser procentdele af levende pupper fundet i hvert kammer, som indeholder forskellige fugt indhold (5%, 20%, 35%, 50%, 65% og 80%-fugt) (en) sand, (b) sandet lerjord 1, (c) sandet lerjord 2 eller (d) silt ler. Dataene præsenteres som gennemsnit ± SE. De forskellige bogstaver angiver betydelige forskelle (P < 0,05). Dette tal er blevet ændret fra Wang et al. 11. venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Substrat-valg bioassays viste, at sand var betydeligt mere foretrukket af E. grisescens personer i forhold til sandet lerjord (1 og 2) på 20%-fugt betingelse (figur 3a). Der var ingen signifikant forskel i procenter af pupper i de kamre, der indeholder 4 substraterne på et 50% vandindhold (figur 3b). Betydeligt pupated flere individer på eller i sand end på eller inden for de andre substrater under 80%-fugt tilstand (figur 3 c).
Figur 3: resultater fra substrat-valg bioassays. Disse paneler viser procentdele af levende pupper fundet i hver afdeling, der indeholder sand, sandet lerjord 1, sandet lerjord 2, eller silt loam på (en) en 20%-, (b) en 50%- eller (c) en 80% vandindhold. Dataene præsenteres som gennemsnit ± SE. De forskellige bogstaver angiver betydelige forskelle (P < 0,05). Dette tal er blevet ændret fra Wang et al. 11. venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Forskellige fugt indhold af sand påvirkede ikke væsentligt procentdelen af borede enkeltpersoner og fremkomsten succes af E. grisescens (fig. 4a og 4b). Væsentligt færre E. grisescens borede i tør (20% fugt) eller våd (80% fugt) jord for pupating (figur 4a). Også betydeligt færre voksne fremgik af 20%-fugt sandet lerjord 2 og silt lerjord end dem, der havde pupated i 50% - eller 80%-fugt sandet lerjord 2 og silt ler (figur 4b).
Figur 4: resultater fra nej-valg bioassays. Disse paneler viser (en) procentsatserne for borede enkeltpersoner og (b) fremkomsten succes Ectropis grisescens svar på forskellige underlag typer (sand, sandet lerjord 1, sandet ler 2, og sande loam) og fugt indhold (20%, 50%, og 80%). Dataene præsenteres som gennemsnit ± SE. De forskellige bogstaver angiver betydelige forskelle (P < 0,05). Dette tal er blevet ændret fra Wang et al. 11. venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Pupation præferencer reagerer på forskellige jorden variabler er blevet undersøgt i et par skadedyr6,9,22,23. For eksempel, at studere præferencen af modne larver af Bactrocera tryoni (Froggatt) (Diptera: Tephritidae) blandt forskellige jordbundsforhold fugt, Hulthen og Clarke22 sat en 3 x 3 Latin-square design indeholdende 9 containere fyldt med jord på 0%, 75% eller 100% felt kapacitet og 25 modne larver blev frigivet på overfladen af hver container. Alyokhin et al. 23 placeret 100 containere (fyldt med jord) i en træramme, med 36 center containere (enten tør eller våd) arrangeret i en "skakbræt" mønster, og 350-450 sent tredje-instar larver af Bactrocera dorsalis (Hendel) (Diptera: Tephritidae) blev udgivet på midten af de 36 containere. Disse undersøgelser er egnet til B. tryoni og B. dorsalis larver, fordi de fleste af dem blev inddrevet inden for jord i bioassay arenaer22,23. Men disse arenaer ikke var dækket. Som et resultat, kan vandrer larverne med en stærk bevægelse kapacitet rejse en lang afstand og flygte fra arenaerne. Her, givet vi en enkel metode til at studere præferencen af jord-pupating insekter uanset deres størrelse og mobile evner. Sammenlignet med tidligere undersøgelser, er disse bioassays nem at sætte op. Også, flere niveauer (f.eks., > 4) af jord variabel kan studeres i relativt små arenaer.
Det er værd at bemærke, at oplysninger indhentet fra valg prøverne her ikke kan være direkte analyseret ved hjælp af ANOVA fordi procentdel data ikke er uafhængige (summen af procentdelen af pupper i hver afdeling altid er lig med 1, og derfor stigningen af procentdelen af pupper i 1 salen vil medføre fald i procent i de resterende). Her, vi udførte log-ratio transformation, fordi det er en enkel procedure, der "fjerner effektivt CSC (konstant-summen begrænsning) fra enhver kompositoriske data og samtidig bevarer deres sande Kovarians struktur"21. I den foreliggende undersøgelse, efterladte af E. grisescens pupper var høj, og vi kun indspillet procentdelen af levende pupper i hvert kammer. Men nogle jord-pupating skadedyr såsom fyrretræ Thaumatopoea moth, Thaumetopoea pityocampa (Denis & Schiffermüller) (Lepidoptera: Thaumetopoeidae), normalt udviser en høj dødelighed under pupating24. I så fald ville det være passende at tælle både levende og døde pupper.
Nej-valg bioassays har været meget anvendt til at undersøge effekten af jorden variabler på fremkomsten succes af jord-pupation skadedyr. Substrat typer og fugt indhold var de hyppigst undersøgte faktorer i disse undersøgelser2,3,4,5,9,10,11 , 12. E. grisescens kan enten forpupper inden for eller på underlag. Som et resultat, indspillede vi procentdelen af borede individer. Dette resultat ville være vigtigt at hjælpe med at forstå pupation mønstrene af E. grisescens.
Både valg og nej-valg bioassays kan ændres for at undersøge virkningen af andre jord faktorer (såsom jord tæthed, overflade kompakthed, indhold af økologiske spørgsmål, etc.) oven på den præference og udførelsen af forskellige jord-pupating insekter. I en nylig arbejde, vi har ændret disse bioassays at studere (1) om jorden behandlet med kemiske pesticid eller biocontrol agent frastøde pupating E. grisescens (både levende og døde pupper blev talt), og (2) virkning af sådanne behandlinger på pupation adfærd (fx, procentdelen af borede personer) og fremkomsten succes af E. grisescens.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ikke noget at oplyse.
Acknowledgments
Vi takker Yuzhen Wen, forsendelse Liang, Shengzhe Jian og Yanjun Li (College for skovbrug og landskabsarkitektur, South China Agricultural University) for deres hjælp i insekt opdræt og eksperimenterende set-up. Dette arbejde blev finansieret af National Natural Science Foundation of China (Grant nr. 31600516), Guangdong Natural Science Foundation (Grant No. 2016A030310445), videnskab og teknologi planlægger projektet af Guangdong-provinsen (Grant No. 2015A020208010) .
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Triangular flask | Bomex Chemical (Shanghai) Co., LTD | 99 | 250 mL |
| Plastic basin | Chahua, Fuzhou, China | 100 | upper side: 51 cm in diameter; bottom side: 40 cm in diameter; height: 16 cm |
| Zip lock bags | Glad, Guangzhou, China | 126/133 | |
| Polypropylene containers | Youyou Plastic Factory, Taian, China | 139/155/160/161/190 | upper side: 20.0 cm [L] × 13.5 cm [W], bottom side: 17.0 cm [L] × 10.0 cm [W], height: 6.5 cm |
| Waterproof polyviny chloride sheet | Yidimei, Shanghai, China | 141 | |
| Tape | V-tech, Guangzhou, China | VT-710 | |
| Oven drier | Kexi, Shanghai, China | KXH-202-3A | |
| Environmental chamber | Life Apparatus, Ningbo, China | PSX-280H |
References
- Dimou, I., Koutsikopoulos, C., Economopoulos, A. P., Lykakis, J. Depth of pupation of the wild olive fruit fly, Bactrocera (Dacus) oleae (Gmel.) (Dipt., Tephritidae), as affected by soil abiotic factors. Journal of Applied Entomology. 127 (1), 12-17 (2003).
- Chen, M., Shelton, A. M. Impact of soil type, moisture, and depth on swede midge (Diptera: Cecidomyiidae) pupation and emergence. Environmental Entomology. 36 (6), 1349-1355 (2007).
- Holmes, L. A., Vanlaerhoven, S. L., Tomberlin, J. K. Substrate effects on pupation and adult emergence of Hermetia illucens (Diptera: Stratiomyidae). Environmental Entomology. 42 (2), 370-374 (2013).
- Renkema, J. M., Cutler, G. C., Lynch, D. H., MacKenzie, K., Walde, S. J. Mulch type and moisture level affect pupation depth of Rhagoletis mendax Curran (Diptera: Tephritidae) in the laboratory. Journal of Pest Science. 84 (3), 281 (2011).
- Ellis, J. D. Jr, Hepburn, R., Luckman, B., Elzen, P. J. Effects of soil type, moisture, and density on pupation success of Aethina tumida (Coleoptera: Nitidulidae). Environmental Entomology. 33 (4), 794-798 (2004).
- Pietrantuono, A. L., Enriquez, A. S., Fernández-Arhex, V., Bruzzone, O. A. Substrates preference for pupation on sawfly Notofenusa surosa (Hymenoptera: Tenthredinidae). Journal of Insect Behavior. 28 (3), 257-267 (2015).
- Buitenhuis, R., Shipp, J. L. Influence of plant species and plant growth stage on Frankliniella occidentalis pupation behaviour in greenhouse ornamentals. Journal of Applied Entomology. 132 (1), 86-88 (2008).
- Zheng, X. L., Cong, X. P., Wang, X. P., Lei, C. L. Pupation behaviour, depth, and site of Spodoptera exigua. Bulletin of Insectology. 64 (2), 209-214 (2011).
- Wen, Y., et al. Effect of substrate type and moisture on pupation and emergence of Heortia vitessoides (Lepidoptera: Crambidae): choice and no-choice studies. Journal of Insect Behavior. 29 (4), 473-489 (2016).
- Wen, Y., et al. Soil moisture effects on pupation behavior, physiology, and morphology of Heortia vitessoides (Lepidoptera: Crambidae). Journal of Entomological Science. 52 (3), 229-238 (2017).
- Wang, H., et al. Pupation behaviors and emergence successes of Ectropis grisescens (Lepidoptera: Geometridae) in response to different substrate types and moisture contents. Environmental Entomology. 46 (6), 1365-1373 (2017).
- Wang, H., et al. No-substrate and low-moisture conditions during pupating adversely affect Ectropis grisescens (Lepidoptera: Geometridae) adults. Journal of Asia-Pacific Entomology. 21 (2), 657-662 (2018).
- Ge, C. M., Yin, K. S., Tang, M. J., Xiao, Q. Biological characteristics of Ectropis grisescens Warren. Acta Agriculturae Zhejiangensis. 28 (3), 464-468 (2016).
- Xi, Y., Yin, K. S., Tang, M. J., Xiao, Q. Geographic populations of the tea geometrid, Ectropis obliqua (Lepidoptera: Geometridae) in Zhejiang, eastern China have differentiated into different species. Acta Entomologica Sinica. 57, 1117-1122 (2014).
- Zhang, G. H., et al. Detecting deep divergence in seventeen populations of tea geometrid (Ectropis obliqua Prout) in China by COI mtDNA and cross-breeding. PloS One. 9 (6), e99373 (2014).
- Ma, T., et al. Analysis of tea geometrid (Ectropis grisescens) pheromone gland extracts using GC-EAD and GC× GC/TOFMS. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 64 (16), 3161-3166 (2016).
- Zhang, G. H., et al. Asymmetrical reproductive interference between two sibling species of tea looper: Ectropis grisescens and Ectropis obliqua. Bulletin of Entomological Research. , (2016).
- Luo, Z. X., Li, Z. Q., Cai, X. M., Bian, L., Chen, Z. M. Evidence of premating isolation between two sibling moths: Ectropis grisescens and Ectropis obliqua (Lepidoptera: Geometridae). Journal of Economic Entomology. 110 (6), 2364-2370 (2017).
- Li, Z. Q., et al. Chemosensory gene families in Ectropis grisescens and candidates for detection of Type-II sex pheromones. Frontiers in Physiology. 8, article no: 953 (2017).
- Chen, L. Q. Research on structure of soil particle by hydrometer method. Environmental Science Survey. 29 (4), 97-99 (2010).
- Kucera, M., Malmgren, B. A. Logratio transformation of compositional data: a resolution of the constant sum constraint. Marine Micropaleontology. 34 (1-2), 117-120 (1998).
- Hulthen, A. D., Clarke, A. R. The influence of soil type and moisture on pupal survival of Bactrocera tryoni (Froggatt) (Diptera: Tephritidae). Australian Journal of Entomology. 45 (1), 16-19 (2006).
- Alyokhin, A. V., Mille, C., Messing, R. H., Duan, J. J. Selection of pupation habitats by oriental fruit fly larvae in the laboratory. Journal of Insect Behavior. 14 (1), 57-67 (2001).
- Torres-Muros, L., Hódar, J. A., Zamora, R. Effect of habitat type and soil moisture on pupal stage of a Mediterranean forest pest (Thaumetopoea pityocampa). Agricultural and Forest Entomology. 19 (2), 130-138 (2017).
