Summary
Her presenterer vi en protokoll for å undersøke pupation preferanse for eldre larver av Ectropis klippefly svar på jord faktorer (f.eks, substrat type og fuktighet innhold) med valget bioassay. Vi presenterer også protokollen no-valget bioassay å fastslå hvilke faktorer som påvirker pupation atferd og survivorship av E. klippefly.
Abstract
Mange insekter lever over bakken som larver og voksne og som forpuppe seg under bakken. Sammenlignet med over bakken stadiene i livssyklusen, er mindre oppmerksomhet betalt på hvordan de miljømessige faktorer påvirker disse insekter når de forpuppe seg i jord. Te looper, Ectropis klippefly Warren (sommerfugler: Geometridae), er en alvorlig plage te planter og har forårsaket store økonomiske tap i Sør-Kina. Protokollene som er beskrevet her tar sikte på å undersøke, gjennom multiple-choice bioassay, om eldre siste-skikkelsen E. klippefly Larvene kan diskriminere jord variabler som substrat type og fuktighet innhold og avgjøre, gjennom ikke-valg bioassay, virkningen av underlaget type og fuktighet innholdet på pupation atferd og fremveksten suksess E. klippefly. Resultatene vil øke forståelsen av pupation økologi av E. klippefly og kan bringe innsikt i jord-management taktikk for å undertrykke E. klippefly populasjoner. I tillegg kan disse bioassay endres for å studere påvirker av flere faktorer på pupation atferd og survivorship av jord-pupating skadedyr.
Introduction
Sammenlignet med larver og voksne stadier av insekter, er pupal scenen svært sårbare på grunn av den begrensede mobile evnen til pupae, som ikke kan raskt flykte fra farlige situasjoner. Pupating under bakken er en felles strategi som brukes av forskjellige grupper av insekter (f.eksi ordrene Diptera1,2,3,4, Coleoptera5, Hymenoptera6, Thysanoptera7, og sommerfugler,8,,9,,10,,11,,12) for å beskytte dem fra over bakken rovdyr og miljøfarer. Mange av dem er alvorlig jordbruk og skogbruk skadedyr1,2,3,4,5,6,7,8 ,9,10,11,12. Eldre Larvene av disse jord-pupating insekter vanligvis forlate sine verter, faller på bakken, vandre å finne et riktig sted, hule i jord og konstruere en pupal kammer for pupating8,10.
Te looper, Ectropis klippefly Warren (sommerfugler: Geometridae), er en av viktigste defoliator skadedyr av te anlegget, Camellia sinensis L.13. Selv om denne arten ble først beskrevet i 1894, det har blitt feilaktig identifisert som Ectropis obliqua Prout (sommerfugler: Geometridae) i siste tiår14,15. Forskjellene i morfologi, biologi og Geografisk fordeling mellom to søsken arter har blitt beskrevet i noen nyere studier14,15,16. For eksempel, Zhang et al. 15 rapportert at E. skrå hovedsakelig skjedde på grensene til tre provinser (Anhui, Jiangsu og Zhejiang) i Kina, mens E. klippefly har en mye bredere distribusjon sammenlignet E. skrå. Derfor de økonomiske tapene forårsaket av E. klippefly er i stor grad oversett, og kunnskap om denne pest må være grundig revidert og fornyet16,17,18,19 . Våre tidligere studier viste at E. klippefly foretrekker å forpuppe seg i jord, men kan også forpuppe seg når jorda ikke er tilgjengelig (ingen-pupation-underlaget betingelser)11,12.
Denne artikkelen inneholder en trinnvis fremgangsmåte for å (1) bestemme pupation fortrinnsretten E. klippefly svar faktorer for eksempel substrat og fuktighet innhold ved hjelp av multiple-choice bioassay, og (2) avgjøre effekten av abiotiske faktorer på pupation atferd og fremveksten suksessen til E. klippefly ved hjelp av no-valget bioassay. Alle disse bioassay utføres under godt kontrollerte laboratorieforhold. Disse bioassay er også tilpasset for å evaluere påvirkningen av andre faktorer på pupation atferd og survivorship av ulike jord-pupating insekter.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. fukt-valget bioassay å fastslå Pupation preferanse av E. klippefly
-
Få eldre siste-skikkelsen larver av E. klippefly
- Kuttet friske skudd (30-40 cm i lengde) av te planter (Camellia sinensis L.). 25-30 skudd inn en 250 mL trekantet kolbe. Fyll kolbe med vann fra springen. Sette 3-4 flasker (med te skudd) i en plast bassenget (oversiden: 51 cm diameter, undersiden: 40 cm i diameter, høyde: 16 cm).
- Slipp 1000-2000 larver (andre til femte skikkelsen) av laboratoriet kolonien E. klippefly på bladene te skudd i hver bassenget. Opprettholde disse Larvene på kontrollert laboratorieforhold [en fotoperiode av 14 h lys etterfulgt av 10t mørk (14:10 L:D), 60-90% relativ luftfuktighet (RH) og 24-28 ° C]. Nøye overføre Larvene til friske blader hånd hver 1-2-d. Hver dag fjerne feces og rusk fra bunnen av områder.
- Velg modne siste-skikkelsen larver som faller fra bladene te skudd og aktivt vandre på bunnen av bassenget. Få minst 240 modne Larvene slik at nok Larvene er tilgjengelig for bioassay.
Merk: Bare velge aktivt vandrende Larvene for eksperimenter. Ikke Velg larver som blir på bladene, fordi disse ikke er klar til å forpuppe seg. Også, ikke Velg prepupae med begrenset mobile aktiviteter fordi de aktivt ikke søker etter riktig slippes inn bioassay arenaene.
-
Substratet
- Samle og identifisere 4 typer substrat (f.ekssand, sandholdig leirjord 1, sandstrand leirjord 2 og silt leirjord) bruker hydrometer metoden20. Sterilisere jord og sanden på 80 ° C ovn tørketrommel for > 3 d, og deretter helt tørr jord og sanden på 50 ° C i flere uker før tørrvekt substrat prøvene ikke endrer lenger over tid.
- Bakken tørr jord med tre støtere og bombekastere. Sile sand og jordet jord gjennom en 3 mm sil og lagre dem i sealable plastposer.
- Beregne ulike fuktighet innholdet i hver substrat (sand, sandholdig leirjord 1, sandholdig leirjord 2 eller silt leirjord) som følger2:
- Legge til den nødvendige mengden av destillert vann i sealable plastposer som inneholder tørr jord eller sand å forberede 5%-20%-35%, 50%, 65% og 80% fuktighet substrat. Grundig blande destillert vann og jord eller sand.
-
Bioassay arena forberedelse
- Like deler polypropylen beholdere (oversiden: 20.0 cm i lengde x 13,5 cm bredde, undersiden: 17,0 cm i lengde x 10,0 cm i bredde, høyde: 6,5 cm) i 6 kamre med vanntett polyvinylklorid (PVC) ark (høyde: 3,5 cm). Fastsette PVC arkene og forsegle sprekker med varmt lim.
Merk: Sel helt alle sprekk å hindre vann gjennomtrengning. - For hver test, fylle 6 kamrene bruker samme type substrat med forskjellige fuktighet innhold (5%-20%-35%-50%, 65% og 80% fuktighet) (figur 1a).
Merk: Bruk bare 1 type substrat av ulike fuktighet innholdet i hver test. Tilfeldig tilordne rekkefølgen på kamre som inneholder underlaget med 6 fuktighet innholdet. - Lim inn 4-6 stykker av ferske te blader med små biter av tape for å dekke overflatebehandling av lokkene av polypropylen beholdere (figur 1b).
- Like deler polypropylen beholdere (oversiden: 20.0 cm i lengde x 13,5 cm bredde, undersiden: 17,0 cm i lengde x 10,0 cm i bredde, høyde: 6,5 cm) i 6 kamre med vanntett polyvinylklorid (PVC) ark (høyde: 3,5 cm). Fastsette PVC arkene og forsegle sprekker med varmt lim.
Figur 1: eksempler på bioassay arenaer for valg testene. (en) vanntett polyvinylklorid (PVC) brukes til å dele like polypropylen beholdere i 6 kamre. PVC plater er løst med varmt lim, og sprekker er nøye forseglet. I dette eksemplet brukes sandholdig leirjord 2 med forskjellige fuktighet innhold (5%, 20%, 35%, 50%, 65% og 80% fuktighet) å fylle kamrene i tilfeldig ordrene. (b) ferske te blader limes inn på innsiden av lokkene der den eldre Ectropis klippefly Larvene frigis. (c) PVC brukes til å dele like polypropylen beholdere i 4 chambers, som er fylt med 4 typer underlag (sand, sandholdig leirjord 1, sandholdig leirjord 2 og silt leirjord) på 50% fuktighet. Dette tallet har blitt endret fra Wang et al. 11. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
-
Bioassay innstilling og datainnspilling
- Slipp 30 modne siste-skikkelsen Larvene (innhentet i trinn 1.1.3) på ferske te bladene limt på lokket av polypropylen beholderen. Nøye velte lokket og tett dekke polypropylen beholderen.
- Gjenta hver test 8 x. Opprettholde bioassay arenaene i et miljømessig kammer 14:10 (L:D) fotoperiode og 26 ° C.
- På dag 5, antall pupae på overflaten av jord i hvert kammer. Også demontere bioassay og antall pupae i underlaget.
Merk: Bare telle de levende pupae på eller i underlaget. Sjekk pupae gjennomførbarheten ved å observere abdominal bevegelser etter berørende pupae ved hjelp av pinsett.
-
Data-analyser
- For hver test, beregning av pupae i for hver replikere. Overføre prosent til Logg-forholdet med metoden av Kucera og Malmgren21.
- Sammenlign prosentdelen av pupae (transformerte data) i hvert kammer med en enveis analyse av varians (ANOVA). Angi betydningen nivåene på α = 0,05 for hver test.
2. substrat-valget bioassay å fastslå Pupation fortrinnsretten E. klippefly
- Gjenta trinn 1.1 å få eldre siste-skikkelsen larver og trinn 1.2 å forberede underlaget med forskjellige fuktighet innhold. Denne gangen, bare 20%, 50% og 80% fuktighet underlaget er nødvendig.
-
Utarbeidelse av bioassay arenaene
- Lik trinn 1.3.1, like deler polypropylen beholdere i 4 kamre med PVC plater. Fastsette PVC arkene og forsegle sprekker med varmt lim.
- For hver test, fylle kamrene med 4 typer underlag (sand, sandholdig leirjord 1, sandholdig leirjord 2 og silt leirjord) som har samme fuktighetsinnhold (20%, 50% eller 80% fukt) med tilfeldig tildelt ordrer (figur 1 c). Gjenta trinn 1.3.3 å forberede lokkene.
- Gjenta trinn 1.4 å sette i bioassay og registrere data og steg 1.5 analysere dataene.
3. nei-valget bioassay å finne jord-Hi atferd og fremveksten suksess E. klippefly
- Gjenta trinn 1.1 å få eldre siste-skikkelsen larvene, og trinn 1.2 å forberede 4 substrater (sand, sandholdig leirjord 1, sandholdig leirjord 2 og silt leirjord) på 3 fuktighet innholdet (20%, 50% og 80% fukt).
-
Bioassay innstilling
- Legge til underlaget i en plastbeholder (oversiden: 11.5 cm diameter, undersiden: 8,5 cm diameter, høyde: 6,5 cm) til en dybde på 3 cm. Totalt, kan du sikre at det vil være 12 behandlinger (kombinasjoner av 4 substrat og 3 fuktighet innholdet). Gjenta hver behandling 7 x.
- Slipp 15 eldre siste-skikkelsen larver på underlaget for hver bioassay arena. Forsegle beholdere av tett dekker lokkene. Opprettholde bioassay i et miljømessig kammer 14:10 (L:D) fotoperiode og 26 ° C.
Merk: Det blir ikke nødvendig å lime ferske te blader på lokkene som nevnt i valg-bioassay.
-
Datainnspilling og analyser
- Dag 3, antall pupae og noen døde larver på overflaten av underlaget for hver replikere. Beregning av E. klippefly enkeltpersoner som gravde seg i underlaget som følger:
- Registrere antall nye voksne hver dag frem til mer voksen dukket opp 15 d. beregne fremveksten suksessen som følger:
- Sammenlign prosentdelen som gravde seg individer og fremveksten suksess blant behandlingene bruker veis VARIANSANALYSE. Angi betydningen nivåene på α = 0,05.
- Dag 3, antall pupae og noen døde larver på overflaten av underlaget for hver replikere. Beregning av E. klippefly enkeltpersoner som gravde seg i underlaget som følger:
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Fukt-valget bioassay viste at betydelig flere E. klippefly personer pupated på eller innenfor 5% og 35% fuktighet sand sammenlignet med 80% fuktighet sand (figur 2a). Imidlertid betydelig foretrakk flere personer å forpuppe seg på eller i jord (sandholdig leirjord 1 og 2 og silt leirjord) som hadde en mellomliggende fuktighetsinnhold (tall 2b - 2d).
Figur 2: resultater fra fuktighet valg bioassay. Disse skjermbildene viser prosentandelene av live pupae i hvert kammer som inneholder forskjellige fuktighet innholdet (5%, 20%, 35%, 50%, 65% og 80% fuktighet) (en) sand, (b) sandholdig leirjord 1, (c) sandy leirjord 2 eller (d) silt leirjord. Dataene presenteres som gjennomsnittlig ± SE. Forskjellige bokstavene indikerer betydelige forskjeller (P < 0,05). Dette tallet har blitt endret fra Wang et al. 11. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Substrat-valget bioassay viste at sand var betydelig mer foretrukket av E. klippefly personer sammenlignet med sandholdig leirjord (1 og 2) under forutsetning av 20%-fuktighet (figur 3a). Det var ingen signifikant forskjell i prosenter av pupae i kamrene inneholder 4 substrater på en 50%-fuktighetsinnhold (figur 3b). Betydelig pupated flere personer på eller i sanden enn på eller i andre substrater under forutsetning av 80% fuktighet (Figur 3 c).
Figur 3: resultater fra substrat-valget bioassay. Disse skjermbildene viser prosentandelene av live pupae i hvert kammer med sand, sandholdig leirjord 1, sandholdig leirjord 2, eller silt loam på (en) en 20%-, (b) en 50%-, eller (c) en 80% fuktighet. Dataene presenteres som gjennomsnittlig ± SE. Forskjellige bokstavene indikerer betydelige forskjeller (P < 0,05). Dette tallet har blitt endret fra Wang et al. 11. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Forskjellige fuktighet innholdet av sand påvirke ikke betydelig prosentandel av gravde seg individer og fremveksten suksess E. klippefly (figur 4a og 4b). Betydelig færre E. klippefly gravde seg i tørr (20% fukt) eller våt (80% fukt) jord for pupating (figur 4a). Også betydelig færre voksne dukket opp fra 20%-fuktighet sandholdig leirjord 2 og silt leirjord enn de som hadde pupated i 50% - eller 80%-fuktighet sandholdig leirjord 2 og silt leirjord (figur 4b).
Figur 4: resultater fra no-valget bioassay. Disse skjermbildene viser (en) prosentandelene av gravde seg enkeltpersoner og (b) fremveksten suksessen til Ectropis klippefly svar på ulike substrat typer (sand, sandholdig leirjord 1, sandholdig leirjord 2 og silt leirjord) og fuktighet innhold (20%, 50% og 80%). Dataene presenteres som gjennomsnittlig ± SE. Forskjellige bokstavene indikerer betydelige forskjeller (P < 0,05). Dette tallet har blitt endret fra Wang et al. 11. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Pupation innstillinger svarer til ulike jord variabler har blitt studert hos noen skadedyr6,9,22,23. For eksempel å studere preferanse for eldre larver av Bactrocera tryoni (Froggatt) (Diptera: fluer) blant annet jord fuktighet forholdene, Hulthen og Clarke22 satt en 3 x 3 Latin-torget design som inneholder 9 containere fylt med jord enten 0%, 75% eller 100% feltet kapasitet og 25 modne Larvene er gitt på overflaten i hver beholder. Alyokhin et al. 23 plassert 100 beholdere (fylt med jord) i en tre ramme, med 36 center beholdere (tørr eller våt) arrangert i en "sjakkbrett" mønster og 350-450 sent tredje-skikkelsen larver av Bactrocera dorsalis (Hendel) (Diptera: Båndfluer) ble utgitt på midten av 36 beholderne. Disse studiene er egnet for B. tryoni og B. dorsalis Larvene fordi de fleste av dem ble gjenopprettet i jord i bioassay arenaer22,23. Men var disse arenaer ikke dekket. Som et resultat, kan vandrende Larvene med en sterk bevegelse kapasitet reise en lang avstand og flykte fra arenaene. Her gitt vi en enkel metode for å studere preferanse for jord-pupating insekter uansett størrelsen og mobile evner. Sammenlignet med tidligere studier, er disse bioassay lett å konfigurere. Også kan flere nivåer (f.eks, > 4) av jord variabel studeres i relativt små arenaer.
Det er verdt å merke seg at dataene innhentet fra valg testene beskrevet her ikke kan direkte analyseres ved hjelp av ANOVA fordi prosent dataene ikke er uavhengig (summen av andelen pupae i hvert kammer alltid lik 1, og dermed økt andelen pupae i 1 kammer vil føre til reduksjon av prosenten i de gjenværende). Her vi utført Logg-ratio transformasjonen fordi det er en enkel prosedyre som "effektivt fjerner CSC (konstant-sum begrensning) fra kompositoriske data og samtidig beholder sin sanne kovariansen struktur"21. I studien, survivorship av E. klippefly pupae var høy og vi bare inn prosentandelen av live pupae i hvert kammer. Men noen jord-pupating skadedyr som furu processionary møll, Thaumetopoea pityocampa (Denis & Schiffermüller) (sommerfugler: Tannspinnere), vanligvis viser en høy dødelighet under pupating24. I så fall ville det være riktig å telle både levende og døde pupae.
No-valget bioassay har vært mye brukt å undersøke effekten av jord variabler på fremveksten suksessen til jord-pupation skadedyr. Det underlaget typer og fuktighet innholdet var mest studerte faktorene i disse studiene2,3,4,5,9,10,11 , 12. E. klippefly kan enten forpuppe seg i eller på substrater. Som et resultat registrerte vi andelen gravde seg individer. Dette resultatet ville være viktig å forstå pupation mønstre av E. klippefly.
Både valg og ingen-valget bioassay kan endres for å undersøke virkningen av andre jord faktorer (som jord tetthet, overflate kompakthet, innhold av organisk saker, etc.) på preferanse og ytelse av ulike jord-pupating insekter. I en nylig arbeid, vi endret disse bioassay å studere (1) om jord behandlet med en kjemiske plantevernmidler eller biocontrol agent frastøte pupating E. klippefly (både levende og døde pupae ble telt), og (2) effekt av slike behandlinger på pupation atferd (f.eks, prosentandelen av gravde seg enkeltpersoner) og fremveksten suksess E. klippefly.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne ikke avsløre.
Acknowledgments
Vi takker Yuzhen Wen, Shiping Liang, Shengzhe Jian og Yanjun Li (College skogbruk og landskapsarkitektur, Sør Kina Agricultural University) for deres hjelp i insekt oppdrett og eksperimentelle set-up. Dette arbeidet ble finansiert av National Natural Science Foundation av Kina (Grant nr. 31600516), Guangdong Natural Science Foundation (Grant No. 2016A030310445), og vitenskap og teknologi planlegging prosjektet av Guangdongprovinsen (Grant No. 2015A020208010) .
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Triangular flask | Bomex Chemical (Shanghai) Co., LTD | 99 | 250 mL |
| Plastic basin | Chahua, Fuzhou, China | 100 | upper side: 51 cm in diameter; bottom side: 40 cm in diameter; height: 16 cm |
| Zip lock bags | Glad, Guangzhou, China | 126/133 | |
| Polypropylene containers | Youyou Plastic Factory, Taian, China | 139/155/160/161/190 | upper side: 20.0 cm [L] × 13.5 cm [W], bottom side: 17.0 cm [L] × 10.0 cm [W], height: 6.5 cm |
| Waterproof polyviny chloride sheet | Yidimei, Shanghai, China | 141 | |
| Tape | V-tech, Guangzhou, China | VT-710 | |
| Oven drier | Kexi, Shanghai, China | KXH-202-3A | |
| Environmental chamber | Life Apparatus, Ningbo, China | PSX-280H |
References
- Dimou, I., Koutsikopoulos, C., Economopoulos, A. P., Lykakis, J. Depth of pupation of the wild olive fruit fly, Bactrocera (Dacus) oleae (Gmel.) (Dipt., Tephritidae), as affected by soil abiotic factors. Journal of Applied Entomology. 127 (1), 12-17 (2003).
- Chen, M., Shelton, A. M. Impact of soil type, moisture, and depth on swede midge (Diptera: Cecidomyiidae) pupation and emergence. Environmental Entomology. 36 (6), 1349-1355 (2007).
- Holmes, L. A., Vanlaerhoven, S. L., Tomberlin, J. K. Substrate effects on pupation and adult emergence of Hermetia illucens (Diptera: Stratiomyidae). Environmental Entomology. 42 (2), 370-374 (2013).
- Renkema, J. M., Cutler, G. C., Lynch, D. H., MacKenzie, K., Walde, S. J. Mulch type and moisture level affect pupation depth of Rhagoletis mendax Curran (Diptera: Tephritidae) in the laboratory. Journal of Pest Science. 84 (3), 281 (2011).
- Ellis, J. D. Jr, Hepburn, R., Luckman, B., Elzen, P. J. Effects of soil type, moisture, and density on pupation success of Aethina tumida (Coleoptera: Nitidulidae). Environmental Entomology. 33 (4), 794-798 (2004).
- Pietrantuono, A. L., Enriquez, A. S., Fernández-Arhex, V., Bruzzone, O. A. Substrates preference for pupation on sawfly Notofenusa surosa (Hymenoptera: Tenthredinidae). Journal of Insect Behavior. 28 (3), 257-267 (2015).
- Buitenhuis, R., Shipp, J. L. Influence of plant species and plant growth stage on Frankliniella occidentalis pupation behaviour in greenhouse ornamentals. Journal of Applied Entomology. 132 (1), 86-88 (2008).
- Zheng, X. L., Cong, X. P., Wang, X. P., Lei, C. L. Pupation behaviour, depth, and site of Spodoptera exigua. Bulletin of Insectology. 64 (2), 209-214 (2011).
- Wen, Y., et al. Effect of substrate type and moisture on pupation and emergence of Heortia vitessoides (Lepidoptera: Crambidae): choice and no-choice studies. Journal of Insect Behavior. 29 (4), 473-489 (2016).
- Wen, Y., et al. Soil moisture effects on pupation behavior, physiology, and morphology of Heortia vitessoides (Lepidoptera: Crambidae). Journal of Entomological Science. 52 (3), 229-238 (2017).
- Wang, H., et al. Pupation behaviors and emergence successes of Ectropis grisescens (Lepidoptera: Geometridae) in response to different substrate types and moisture contents. Environmental Entomology. 46 (6), 1365-1373 (2017).
- Wang, H., et al. No-substrate and low-moisture conditions during pupating adversely affect Ectropis grisescens (Lepidoptera: Geometridae) adults. Journal of Asia-Pacific Entomology. 21 (2), 657-662 (2018).
- Ge, C. M., Yin, K. S., Tang, M. J., Xiao, Q. Biological characteristics of Ectropis grisescens Warren. Acta Agriculturae Zhejiangensis. 28 (3), 464-468 (2016).
- Xi, Y., Yin, K. S., Tang, M. J., Xiao, Q. Geographic populations of the tea geometrid, Ectropis obliqua (Lepidoptera: Geometridae) in Zhejiang, eastern China have differentiated into different species. Acta Entomologica Sinica. 57, 1117-1122 (2014).
- Zhang, G. H., et al. Detecting deep divergence in seventeen populations of tea geometrid (Ectropis obliqua Prout) in China by COI mtDNA and cross-breeding. PloS One. 9 (6), e99373 (2014).
- Ma, T., et al. Analysis of tea geometrid (Ectropis grisescens) pheromone gland extracts using GC-EAD and GC× GC/TOFMS. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 64 (16), 3161-3166 (2016).
- Zhang, G. H., et al. Asymmetrical reproductive interference between two sibling species of tea looper: Ectropis grisescens and Ectropis obliqua. Bulletin of Entomological Research. , (2016).
- Luo, Z. X., Li, Z. Q., Cai, X. M., Bian, L., Chen, Z. M. Evidence of premating isolation between two sibling moths: Ectropis grisescens and Ectropis obliqua (Lepidoptera: Geometridae). Journal of Economic Entomology. 110 (6), 2364-2370 (2017).
- Li, Z. Q., et al. Chemosensory gene families in Ectropis grisescens and candidates for detection of Type-II sex pheromones. Frontiers in Physiology. 8, article no: 953 (2017).
- Chen, L. Q. Research on structure of soil particle by hydrometer method. Environmental Science Survey. 29 (4), 97-99 (2010).
- Kucera, M., Malmgren, B. A. Logratio transformation of compositional data: a resolution of the constant sum constraint. Marine Micropaleontology. 34 (1-2), 117-120 (1998).
- Hulthen, A. D., Clarke, A. R. The influence of soil type and moisture on pupal survival of Bactrocera tryoni (Froggatt) (Diptera: Tephritidae). Australian Journal of Entomology. 45 (1), 16-19 (2006).
- Alyokhin, A. V., Mille, C., Messing, R. H., Duan, J. J. Selection of pupation habitats by oriental fruit fly larvae in the laboratory. Journal of Insect Behavior. 14 (1), 57-67 (2001).
- Torres-Muros, L., Hódar, J. A., Zamora, R. Effect of habitat type and soil moisture on pupal stage of a Mediterranean forest pest (Thaumetopoea pityocampa). Agricultural and Forest Entomology. 19 (2), 130-138 (2017).
