Summary
כאן, אנו מציגים את פרוטוקול לחקור את ההעדפה להתגלמות של הזחלים בוגרים של Ectropis grisescens בתגובה בקרקע גורמים (למשל, סוג המצע ותוכן לחות) באמצעות בחירה bioassays. אנו מציגים גם פרוטוקול של bioassays לא-הבחירה כדי לקבוע את הגורמים המשפיעים על ההתנהגויות להתגלמות, שאירים של א grisescens.
Abstract
חרקים רבים חיים מעל פני הקרקע וגם הזחלים מבוגרים, כמו pupate מתחת לאדמה. לעומת השלבים מעל הקרקע של מחזורי החיים שלהם, פחות תשומת לב כבר שולם על איך הסביבה גורמים משפיעים על חרקים אלה כאשר הם pupate בתוך האדמה אחראי המדידות תה, וורן Ectropis grisescens (פרפראים: Geometridae), זה מטרד חמור של תה צמחים, גרם הפסדים כלכליים ענק בדרום סין. הפרוטוקולים המתוארים כאן המטרה היא לחקור, דרך bioassays אפשרויות בחירה מרובות, אם בוגר האחרון-לחלל הזחלים grisescens אי אפשר להפלות אדמה משתנים כגון התוכן לחות וסוג המצע ולקבוע, מבחירה-לא bioassays, את ההשפעה של סוג המצע ותוכן לחות על התנהגויות להתגלמות וההצלחה הופעתה של א grisescens. התוצאות לשפר את ההבנה של האקולוגיה להתגלמות של אי grisescens , עשוי להביא תובנות טקטיקות ניהול קרקע דיכוי אוכלוסיות grisescens אי . בנוסף, ניתן לשנות bioassays אלה ללמוד השפעותיהם של גורמים שונים על ההתנהגויות להתגלמות ו שאירים של מזיקים מאבריה-אדמה.
Introduction
לעומת השלבים זחל ומבוגרים של חרקים, השלב הגולמי פגיע מאוד בשל היכולת נייד מוגבל של הגלמים, אשר יכול להימלט במהירות מצבים מסוכנים. מאבריה מתחת לאדמה היא אסטרטגיה נפוצים בשימוש על ידי קבוצות מגוונות של חרקים (למשל, בפקודות Diptera1,2,3,4, הזבוביים5, דבוראים6, Thysanoptera7, פרפראים8,9,10,11,12) כדי להגן עליהם מפני טורפים מעל הקרקע, מפגעים סביבתיים. רבים מהם הם חמורים לחקלאות ויערנות מזיקים1,2,3,4,5,6,7,8 ,9,10,11,12. הזחלים בוגרים של חרקים אלה מאבריה קרקע בדרך כלל להשאיר הפונדקאים שלהם, נופל על הקרקע, לנדוד כדי למצוא אתר מתאים, מתחפרים באדמה, לבנות תא הגולמי מאבריה8,10.
אחראי המדידות תה, וורן Ectropis grisescens (פרפראים: Geometridae), אחד המזיקים defoliator המשמעותי ביותר של התה לשתול קמליה ל'13. למרות מין זה תוארה לראשונה בשנת 1894, זה בטעות זוהה Ectropis obliqua פראוט (פרפראים: Geometridae) בעבר עשורים14,15. הבדלי מורפולוגיה, ביולוגיה ותפוצה גיאוגרפית בין שני המינים אחים תוארו כמה האחרונות מחקרים14,15,16. לדוגמה, ג'אנג. et al. 15 דיווח כי ה המלוכסן התרחשה בעיקר על גבולות המחוזות שלוש (Anhui ג'יאנגסו, ג'ה-ג'יאנג) של סין, ואילו grisescens א יש התפלגות רחבה הרבה יותר בהשוואה אלכסוני אי. לכן, הפסדים כלכליים שנגרמו על ידי אי grisescens הם במידה רבה, ומייחסים הידע של המזיק הזה צריך להיות מתוקן בהרחבה וחידשה16,17,18,19 . שלנו מחקרים קודמים הראו כי אי grisescens מעדיפים pupate בתוך אדמת אך יכול גם pupate כאשר הקרקע אינו זמין (תנאי לא-להתגלמות-המצע)11,12.
מאמר זה מספק הליך צעד אחר צעד (1) לקבוע ההעדפה להתגלמות של אי grisescens בתגובה גורמים כגון סוג המצע, לחות תוכן באמצעות אפשרויות בחירה מרובות bioassays, ו- (2) לקבוע את ההשפעה של גורמים והאביוטיים על התנהגויות להתגלמות ועל ההצלחה הופעתה של אי grisescens על-ידי שימוש לא-הבחירה bioassays. כל אלה bioassays נערכים בתנאי מעבדה ומבוקרות היטב. כמו כן, אלה bioassays מותאמים כדי להעריך את ההשפעה של גורמים אחרים על ההתנהגויות להתגלמות, שאירים של חרקים מאבריה קרקע מגוונים.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. לחות-הבחירה Bioassays כדי לקבוע העדפה להתגלמות של אי grisescens
-
קבלת הזחלים בוגרים האחרון-לחלל של אי grisescens
- חותכים נצרי טריים (30-40 ס מ אורך) של תה צמחים (קמליה ל'). הכנס 25-30 יורה לתוך בקבוקון משולש 250 מ. למלא את הבקבוק עם מים מהברז. להכניס 3-4 מבחנות (עם נצרי תה) קערה פלסטית (סייד: 51 ס מ קוטר; למטה בצד: 40 ס מ קוטר; גובה: 16 ס"מ).
- שחרר 1,000-2,000 הזחלים (שנייה החמישי instar) של המושבה מעבדה של א grisescens על גבי העלים נצרי תה בכל אגן. לשמור על אלה הזחלים על תנאי מעבדה מבוקרת [photoperiod של 14 h אור ואחריו h 10 של אפל (14:10 L:D), 60-90% לחות יחסית (RH), ו- 24-28 ° C]. בקפידה להעביר הזחלים על גבי עלים טריים ביד כל d 1-2. כל יום להסיר צואה ופסולת מלמטה בעיטור.
- בחר בוגרת הזחלים האחרון-לחלל ליפול מן העלים של נצרי התה, לשוטט באופן פעיל על החלק התחתון של האגן. להשיג לפחות 240 הזחלים בוגרים כדי להבטיח כי מספיק הזחלים זמינים עבור bioassays.
הערה: בחר רק הזחלים נודד באופן פעיל על הניסויים. אל תבחר הזחלים שנשארות על העלים, כי אלו אינם מוכנים pupate. כמו כן, אל תבחר prepupae עם פעילויות נייד מוגבל כי הם לא פעיל יחפש תנאים נאותים לאחר ששוחרר לתוך bioassay ארנאס.
-
הכנת הרקע
- לאסוף ולזהות 4 סוגים של סובסטרט (למשל, חול, חול חמרה 1, חולי חמרה 2, ואת הסחף בנהרות חמרה) באמצעות שיטה הידרומטר20. לחטא את האדמה ואת החול תנור 80 ° C מייבש > בתלת-ממד ולאחר מכן יבשה לחלוטין את האדמה והחול ב 50 מעלות צלזיוס למשך מספר שבועות עד משקל יבש של הדגימות המצע לא משנה יותר לאורך זמן.
- פרוק את האדמה יבשה עם עץ בקווקז, מרגמות. לנפות את החול והאדמה מוארק דרך מסננת 3 מ מ ולאחסן אותם בשקיות פלסטיק sealable.
- לחשב את תכולת לחות שונה לכל סובסטרט (טיט חול, סנדי 1, חולי חמרה 2 או הסחף בנהרות חמרה) כמו עוקב אחר2:
- להוסיף את הכמות הנדרשת של מים מזוקקים בשקיות פלסטיק sealable המכילה את אדמה יבשה או חול כדי להכין 5%-, 20%-, 35%-, 50%-, 65%- ו 80%-לחות המצע. מערבבים ביסודיות במים מזוקקים, בקרקע או חול.
-
Bioassay ארנה הכנה
- באותה מידה חלוקת המכולות פוליפרופילן (סייד: 20.0 ס"מ אורך x 13.5 ס"מ רוחב, למטה בצד: 17.0 ס"מ אורך x 10.0 ס"מ רוחב, גובה: 6.5 ס מ) לתוך 6 תאים עם סדינים עמיד למים פוליוויניל כלוריד (PVC) (גובה: 3.5 ס"מ). לתקן את יריעות PVC, לאטום סדקים באמצעות דבק חם.
הערה: לאטום לחלוטין כל קראק כדי למנוע חלחול המים לקרקע והמסת. - עבור כל בדיקה, למלא את 6 תאים באמצעות אותו סוג של המצע עם לחות שונות לתוכן (5%-, 20%-, 35%-, 50%-, 65%- ו 80%-לחות) (איור 1 א').
הערה: השתמש רק 1 סוג המצע של לחות שונות לתוכן בכל בדיקה. באופן אקראי להקצות את הסדר של התאים המכילים את המצע עם התוכן לחות 6. - הדבק 4-6 חתיכות של עלי תה טריים באמצעות פיסות קטנות של נייר דבק כדי לכסות את השטח הפנימי של הכיסוי של המכולות פוליפרופילן (איור 1b).
- באותה מידה חלוקת המכולות פוליפרופילן (סייד: 20.0 ס"מ אורך x 13.5 ס"מ רוחב, למטה בצד: 17.0 ס"מ אורך x 10.0 ס"מ רוחב, גובה: 6.5 ס מ) לתוך 6 תאים עם סדינים עמיד למים פוליוויניל כלוריד (PVC) (גובה: 3.5 ס"מ). לתקן את יריעות PVC, לאטום סדקים באמצעות דבק חם.
איור 1: דוגמאות של bioassay ארנאס לצורך בדיקות הבחירה. () עמיד גליונות פוליוויניל כלוריד (PVC) משמשים לחלק באופן שווה את מיכל פוליפרופילן 6 תאים. PVC גליונות קבועים עם דבק חם, כל סדקים חתומות בקפידה. בדוגמה זו, חמרה חולית 2 עם לחות שונות לתוכן (5%, 20%, 35%, 50%, 65% ו- 80% לחות) משמשים כדי למלא את הצ'יימברס בפקודות מוקצות באופן אקראי. (b) תה טריים עלים מודבקות על הצד הפנימי של הכיסוי איפה בוגרת הזחלים Ectropis grisescens ישוחררו. (ג) PVC גליונות משמשים לחלק באופן שווה את מיכל פוליפרופילן 4 חדרים, אשר מתמלאים עם 4 סוגי מצעים (טיט חול, סנדי 1, חולי חמרה 2, ואת הסחף בנהרות חמרה) ב- 50% לחות. איור זה שונה מוואנג. et al. 11. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
-
הגדרת bioassay ורישום נתונים
- שחרור 30 בוגרים האחרון-לחלל הזחלים (שהושג בשלב 1.1.3) על גבי העלים תה טריים מודבק על המכסה של המיכל פוליפרופילן. בזהירות להפוך את המכסה, לכסות היטב את מיכל פוליפרופילן.
- חזור על כל מבחן 8 x. לשמור על ארנאס bioassay באווירה קאמרית סביבתיים בשעה 14:10 (L:D) photoperiod 26 ° C.
- יום 5, לספור את מספר גלמים על פני הקרקע בכל אחד. בנוסף, לפרק את bioassays, לספור את מספר הגלמים בתוך המצע.
הערה: לספור רק את הגלמים בשידור חי על או בתוך המצע. בדוק את הכדאיות גלמים על ידי התבוננות תנועות הבטן לאחר שנגע הגלמים באמצעות מלקחיים.
-
ניתוח נתונים
- עבור כל בדיקה, לחשב את אחוז גלמים הנמצאים בכל לשכת כל שכפול. להעביר את הנתונים באחוזים היחס-היומן באמצעות פעולת השירות שסופק על-ידי Kucera ו Malmgren21.
- להשוות את אחוז גלמי (נתונים שהותמרו) בכל אחד באמצעות שונות של ניתוח בכיוון אחד (ANOVA). לקבוע את רמות מובהקות α = 0.05 עבור כל בדיקה.
2. המצע-הבחירה Bioassays כדי לקבוע את ההעדפה להתגלמות של אי grisescens
- חזור על שלב 1.1 להשיג הזחלים האחרון-לחלל בוגרת, צעד 1.2 כדי להכין את המצע כשהתוכן לחות שונים. הפעם, רק 20%, 50% ו- 80%-לחות המצע נחוצים.
-
הכנת ארנאס bioassay
- בדומה לשלב 1.3.1, לחלק באופן שווה את מיכל פוליפרופילן 4 חדרים באמצעות יריעות PVC. לתקן את יריעות PVC, לאטום סדקים באמצעות דבק חם.
- עבור כל בדיקה, למלא את החדרים עם 4 סוגי מצעים (טיט חול, סנדי 1, חולי חמרה 2, ואת הסחף בנהרות חמרה) בעלי אותו תוכן לחות (20%, 50% או 80% לחות) עם אקראי שהוקצו הזמנות (איור 1 c). חזור על שלב 1.3.3 להכין את המכסים.
- חזור על שלב 1.4 כדי להגדיר את bioassays, לרשום את הנתונים ואת שלב 1.5 לנתח את הנתונים.
3. לא-הבחירה Bioassays כדי לקבוע את ההתנהגות מתחפרים בקרקע ואת ההצלחה הופעתה של grisescens אי
- חזור על שלב 1.1 כדי להשיג את הזחלים האחרון-לחלל בוגרת, צעד 1.2 להכין מצעים 4 (טיט חול, סנדי 1, חולי חמרה 2, ואת הסחף בנהרות חמרה) ב 3 לחות תוכן (20%, 50% ו- 80% לחות).
-
הגדרת bioassay
- הוסף את המצע לתוך מיכל פלסטיק (סייד: 11.5 ס מ קוטר; למטה בצד: 8.5 ס מ קוטר; גובה: 6.5 ס מ) עד לעומק של 3 ס מ. בסך הכל, ודא כי יהיו 12 טיפולים (שילובים של 4 סוגי המצע ואת התוכן לחות 3). לחזור על הטיפול כל 7 x.
- לשחרר 15 בוגרת הזחלים האחרון-לחלל על גבי המצע של ארנה bioassay בכל. חותם את המכולות על ידי כיסוי בחוזקה את המכסים. לשמר את bioassays באווירה קאמרית סביבתיים בשעה 14:10 (L:D) photoperiod 26 ° C.
הערה: יהיו אין צורך להדביק עלי תה טריים על עפעפיו כאמור bioassays הבחירה.
-
הקלטה נתונים וניתוחים
- יום 3, לספור את מספר הגלמים וזחלים מת כלשהו על פני המצע של כל שכפול. חישוב האחוזים של אנשים grisescens אי המתיישבת בתוך המצע כדלקמן:
- לרשום את מספר מבוגרים מתעוררים כל יום עד אין יותר מבוגר הגיח 15 ד לחשב את ההצלחה הופעתה כדלקמן:
- להשוות את אחוזי ההצלחה הופעתה בין הטיפולים באמצעות חד-כיווני אנובה ויחידים נזיד. לקבוע את רמות מובהקות α = 0.05.
- יום 3, לספור את מספר הגלמים וזחלים מת כלשהו על פני המצע של כל שכפול. חישוב האחוזים של אנשים grisescens אי המתיישבת בתוך המצע כדלקמן:
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Bioassays לחות-הבחירה הראה כי באופן משמעותי יותר אנשים grisescens אי pupated על או בתוך 5% ו- 35% לחות חול לעומת 80%-רטיבות חול (איור 2 א). עם זאת, באופן משמעותי אנשים נוספים העדיפו pupate על או בתוך האדמה (חמרה חולית 1 ו- 2, סחופת חמרה), שהיה על תוכן לחות ביניים (דמויות 2b - 2d).
איור 2: נובעת bioassays לחות-הבחירה. מראות אלה האחוזים של הגלמים בשידור חי נמצאו בכל אחד המכיל תוכן לחות שונה (5%, 20%, 35%, 50%, 65% ו- 80%-לחות) של חול (), (b) חמרה חמרה חולית 1, סנדי (ג) 2 או חמרה סחופת (d). הנתונים מוצגים כמו זאת אומרת ± SE. האותיות שונים מצביעים על הבדלים משמעותיים (P < 0.05). איור זה שונה מוואנג. et al. 11. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
המצע-הבחירה bioassays הראה כי החול היה משמעותי יותר המועדף על ידי יחידים grisescens א לעומת חולי חמרה (1 ו 2) בתנאי לחות-20% (איור 3 א). היה הבדל משמעותי באחוזים של הגלמים נמצאו התאים המכילים את סובסטרטים 4 ב- 50%-לחות תוכן (איור 3b). באופן משמעותי יותר אנשים pupated על או בתוך החול מאשר על או על מצעים אחרים בתנאי לחות 80% (איור 3 c).
איור 3: תוצאות bioassays המצע-הבחירה. מראות אלה האחוזים של הגלמים בשידור חי נמצאו בכל אחד המכיל חול, חמרה חולית 1, חמרה חולית 2, או סחופת loam בשעה () 20%-, (b) 50%-, או (ג) תוכן 80%-לחות. הנתונים מוצגים כמו זאת אומרת ± SE. האותיות שונים מצביעים על הבדלים משמעותיים (P < 0.05). איור זה שונה מוואנג. et al. 11. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
התוכן לחות שונים של חול לא השפיע על באופן משמעותי את האחוז של יחידים נזיד והצלחה הופעתה של grisescens א (איור 4a , 4b). משמעותית פחות grisescens אי המתיישבת בתוך יבש (20% לחות) או אדמה לחה (80% לחות) עבור מאבריה (איור 4a). בנוסף, משמעותית פחות מבוגרים הגיח מתוך 20%-לחות חמרה חמרה חולית 2, סחופת יותר היה pupated 50% - או 80%-רטיבות חול חמרה 2, חמרה סחופת (איור 4b).
איור 4: נובעת bioassays לא-הבחירה. אלה מראות () האחוזים של נזיד ויחידים (b) ההצלחה הופעתה של Ectropis grisescens בתגובה סוגי מצע שונים (טיט חול, סנדי 1, חולי חמרה 2, ואת הסחף בנהרות חמרה) ואת התוכן לחות (20%, 50% ו- 80%). הנתונים מוצגים כמו זאת אומרת ± SE. האותיות שונים מצביעים על הבדלים משמעותיים (P < 0.05). איור זה שונה מוואנג. et al. 11. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
העדפות להתגלמות להגיב על קרקע שונים המשתנים נחקרו מספר מזיקים6,9,22,23. לדוגמה, כדי ללמוד את ההעדפה של הזחלים בוגרים של Bactrocera tryoni (Froggatt) (Diptera: Tephritidae) בין תנאי לחות קרקע שונים, Hulthen, קלארק22 להגדיר בעיצוב מרובע הלטינית 3 x 3 המכיל 9 מיכלים מלאים אדמה-0%, 75% או 100% קיבולת השדה, וזחלים 25 בוגרת שוחררו על פני לכל מכולה. . Alyokhin et al. 23 להציב מכולות 100 (מלא אדמה) מסגרת עץ, עם המכולות מרכז 36 (יבש או רטוב) מסודרים דפוס "שחמט", ו- 350-450 הזחלים לחלל השלישית מאוחר של Bactrocera הקיקיון (הנדל) (Diptera: Tephritidae) שוחררו במרכז המכולות 36. מחקרים אלה מתאימים הזחלים tryoni דרב , הקיקיון דרב כי רובם נמצאו בתוך האדמה bioassay ארנאס22,23. עם זאת, היו אלה ארנאס אינו מכוסה. כתוצאה מכך, נודדים הזחלים עם קיבולת לנוע חזק עשוי לטייל בינעירוני ולברוח מן ארנאס. . הנה, סיפקנו שיטה פשוטה ללמוד את ההעדפה של חרקים מאבריה קרקע ללא קשר שלהם גדלים ויכולות ניידים. לעומת מחקרים קודמים, bioassays אלה הם קל להגדיר. בנוסף, רמות מרובות (לדוגמה, > 4) של האדמה משתנה ניתן יהיה ללמוד בזירות קטן יחסית.
ראוי לציין כי הנתונים המתקבלים הבדיקות הבחירה המתוארים כאן לא יכול להיות ישירות נותחה באמצעות ANOVA כי הנתונים באחוזים אינם עצמאיים (הסכום של האחוז של הגלמים בכל אחד תמיד שווה ל 1, ולכן הגידול של האחוז של הגלמים בתא 1 יגרום הירידה של האחוז של אלה שנותרו). כאן, ביצענו את יחס-יומן השינוי כי זה הליך פשוט "מסיר ביעילות שאריות של CSC (סכום קבוע-אילוץ) של כל הנתונים ההלחנה, בעת ובעונה אחת שומרת על מבנה נכון המשותפת שלהם"21. במחקר הנוכחי, שאירים של הגלמים אי grisescens הייתה גבוהה, רק הקלטנו את האחוז של הגלמים בשידור חי בכל אחד. עם זאת, חלק מאבריה אדמה מזיקים כגון אורן processionary העש, Thaumetopoea pityocampa (דניס & Schiffermüller) (פרפראים: Thaumetopoeidae), בדרך כלל מוצג תמותה במהלך מאבריה24. במקרה הזה, זה יהיה המתאים. לספור הגלמים גם חי וגם מת.
Bioassays הבחירה לא היה בשימוש נרחב כדי לחקור את השפעת משתני אדמה על הצלחה הופעתה של אדמת-להתגלמות מזיקים. סוגי המצע ואת התוכן לחות היו הגורמים לעתים קרובות ביותר למד אלה מחקרים2,3,4,5,9,10,11 , 12. grisescens אי אפשר גם pupate בתוך או על מצעים. כתוצאה מכך, הקלטנו את האחוז של יחידים נזיד. תוצאה זו תהיה חשובה לעזור להבין את דפוסי להתגלמות של אי grisescens.
הבחירה והן של bioassays לא-הבחירה יכול להיות שונה כדי לחקור את ההשפעה של גורמים קרקע אחרים (כגון צפיפות הקרקע, משטח הקומפקטיות, תוכן עניינים אורגניים, וכו ') על העדפה ואת הביצועים של חרקים מאבריה קרקע שונים. עבודה אחרונים, שינינו אלה bioassays ללמוד (1) אם הקרקע מטופלים עם חומרי הדברה כימיים, או הסוכן/מוצרים חדשים להדוף מאבריה grisescens א (גם חי וגם מת הגלמים נספרו), (2) את ההשפעה של טיפולים כאלה על התגלמות התנהגויות (למשל, האחוז של יחידים נזיד) והצלחה הופעתה של grisescens א.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
המחברים אין לחשוף.
Acknowledgments
אנו מודים יוז'ן וון, ונבדק ליאנג, ג'יאן Shengzhe ו- Li Yanjun (המכללה יערנות, אדריכלות נוף, דרום סין לחקלאות האוניברסיטה) על עזרתם חרק לגידול, הגדרת ניסיוני. עבודה זו מומן על ידי את נבחרת מדעי הטבע קרן של סין (מענק מס 31600516), קרן מדעי הטבע גואנג-דונג (מענק מס 2016A030310445), לבין מדע טכנולוגיה תכנון הפרוייקט של בפרובינצית גואנג-דונג (מענק מס 2015A020208010) .
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Triangular flask | Bomex Chemical (Shanghai) Co., LTD | 99 | 250 mL |
| Plastic basin | Chahua, Fuzhou, China | 100 | upper side: 51 cm in diameter; bottom side: 40 cm in diameter; height: 16 cm |
| Zip lock bags | Glad, Guangzhou, China | 126/133 | |
| Polypropylene containers | Youyou Plastic Factory, Taian, China | 139/155/160/161/190 | upper side: 20.0 cm [L] × 13.5 cm [W], bottom side: 17.0 cm [L] × 10.0 cm [W], height: 6.5 cm |
| Waterproof polyviny chloride sheet | Yidimei, Shanghai, China | 141 | |
| Tape | V-tech, Guangzhou, China | VT-710 | |
| Oven drier | Kexi, Shanghai, China | KXH-202-3A | |
| Environmental chamber | Life Apparatus, Ningbo, China | PSX-280H |
References
- Dimou, I., Koutsikopoulos, C., Economopoulos, A. P., Lykakis, J. Depth of pupation of the wild olive fruit fly, Bactrocera (Dacus) oleae (Gmel.) (Dipt., Tephritidae), as affected by soil abiotic factors. Journal of Applied Entomology. 127 (1), 12-17 (2003).
- Chen, M., Shelton, A. M. Impact of soil type, moisture, and depth on swede midge (Diptera: Cecidomyiidae) pupation and emergence. Environmental Entomology. 36 (6), 1349-1355 (2007).
- Holmes, L. A., Vanlaerhoven, S. L., Tomberlin, J. K. Substrate effects on pupation and adult emergence of Hermetia illucens (Diptera: Stratiomyidae). Environmental Entomology. 42 (2), 370-374 (2013).
- Renkema, J. M., Cutler, G. C., Lynch, D. H., MacKenzie, K., Walde, S. J. Mulch type and moisture level affect pupation depth of Rhagoletis mendax Curran (Diptera: Tephritidae) in the laboratory. Journal of Pest Science. 84 (3), 281 (2011).
- Ellis, J. D. Jr, Hepburn, R., Luckman, B., Elzen, P. J. Effects of soil type, moisture, and density on pupation success of Aethina tumida (Coleoptera: Nitidulidae). Environmental Entomology. 33 (4), 794-798 (2004).
- Pietrantuono, A. L., Enriquez, A. S., Fernández-Arhex, V., Bruzzone, O. A. Substrates preference for pupation on sawfly Notofenusa surosa (Hymenoptera: Tenthredinidae). Journal of Insect Behavior. 28 (3), 257-267 (2015).
- Buitenhuis, R., Shipp, J. L. Influence of plant species and plant growth stage on Frankliniella occidentalis pupation behaviour in greenhouse ornamentals. Journal of Applied Entomology. 132 (1), 86-88 (2008).
- Zheng, X. L., Cong, X. P., Wang, X. P., Lei, C. L. Pupation behaviour, depth, and site of Spodoptera exigua. Bulletin of Insectology. 64 (2), 209-214 (2011).
- Wen, Y., et al. Effect of substrate type and moisture on pupation and emergence of Heortia vitessoides (Lepidoptera: Crambidae): choice and no-choice studies. Journal of Insect Behavior. 29 (4), 473-489 (2016).
- Wen, Y., et al. Soil moisture effects on pupation behavior, physiology, and morphology of Heortia vitessoides (Lepidoptera: Crambidae). Journal of Entomological Science. 52 (3), 229-238 (2017).
- Wang, H., et al. Pupation behaviors and emergence successes of Ectropis grisescens (Lepidoptera: Geometridae) in response to different substrate types and moisture contents. Environmental Entomology. 46 (6), 1365-1373 (2017).
- Wang, H., et al. No-substrate and low-moisture conditions during pupating adversely affect Ectropis grisescens (Lepidoptera: Geometridae) adults. Journal of Asia-Pacific Entomology. 21 (2), 657-662 (2018).
- Ge, C. M., Yin, K. S., Tang, M. J., Xiao, Q. Biological characteristics of Ectropis grisescens Warren. Acta Agriculturae Zhejiangensis. 28 (3), 464-468 (2016).
- Xi, Y., Yin, K. S., Tang, M. J., Xiao, Q. Geographic populations of the tea geometrid, Ectropis obliqua (Lepidoptera: Geometridae) in Zhejiang, eastern China have differentiated into different species. Acta Entomologica Sinica. 57, 1117-1122 (2014).
- Zhang, G. H., et al. Detecting deep divergence in seventeen populations of tea geometrid (Ectropis obliqua Prout) in China by COI mtDNA and cross-breeding. PloS One. 9 (6), e99373 (2014).
- Ma, T., et al. Analysis of tea geometrid (Ectropis grisescens) pheromone gland extracts using GC-EAD and GC× GC/TOFMS. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 64 (16), 3161-3166 (2016).
- Zhang, G. H., et al. Asymmetrical reproductive interference between two sibling species of tea looper: Ectropis grisescens and Ectropis obliqua. Bulletin of Entomological Research. , (2016).
- Luo, Z. X., Li, Z. Q., Cai, X. M., Bian, L., Chen, Z. M. Evidence of premating isolation between two sibling moths: Ectropis grisescens and Ectropis obliqua (Lepidoptera: Geometridae). Journal of Economic Entomology. 110 (6), 2364-2370 (2017).
- Li, Z. Q., et al. Chemosensory gene families in Ectropis grisescens and candidates for detection of Type-II sex pheromones. Frontiers in Physiology. 8, article no: 953 (2017).
- Chen, L. Q. Research on structure of soil particle by hydrometer method. Environmental Science Survey. 29 (4), 97-99 (2010).
- Kucera, M., Malmgren, B. A. Logratio transformation of compositional data: a resolution of the constant sum constraint. Marine Micropaleontology. 34 (1-2), 117-120 (1998).
- Hulthen, A. D., Clarke, A. R. The influence of soil type and moisture on pupal survival of Bactrocera tryoni (Froggatt) (Diptera: Tephritidae). Australian Journal of Entomology. 45 (1), 16-19 (2006).
- Alyokhin, A. V., Mille, C., Messing, R. H., Duan, J. J. Selection of pupation habitats by oriental fruit fly larvae in the laboratory. Journal of Insect Behavior. 14 (1), 57-67 (2001).
- Torres-Muros, L., Hódar, J. A., Zamora, R. Effect of habitat type and soil moisture on pupal stage of a Mediterranean forest pest (Thaumetopoea pityocampa). Agricultural and Forest Entomology. 19 (2), 130-138 (2017).
