处理昆虫腿荧光显微镜:一种保存神经肌肉结构成像的方法

0 views • 4:09 min • April 30th, 2023

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- 首先,将麻醉的昆虫浸入 70% 乙醇溶液中,以减少角质层的疏水性。然后,用含有去污剂的磷酸盐缓冲盐水清洗和透化组织至少 30 分钟,以便在固定过程中让组织渗透。

接下来,从胸部取出头部和腹部。使用镊子轻轻按压髋胸交界处,然后分离腿部。小心地将腿部放入冰冷的 4% 多聚甲醛溶液中过夜,使其渗透到组织中。多聚甲醛通过交联蛋白质固定组织。

然后,去除固定液,用含有去污剂的磷酸盐缓冲盐水洗涤组织数次。封片前,将支腿置于纯或略微稀释的封片缓冲液中至少一天,以便缓冲液有足够的时间进入组织。

最后,将支腿安装在一滴安装介质中。在显微镜载玻片和盖玻片之间使用垫片以防止标本损坏,并用指甲油固定支架。

在以下示例中,我们将看到黑腹腿的解剖、固定和安装。

- 首先在玻璃多孔板中填充适当数量的孔,加入 70% 乙醇。用刷子向每个孔中加入 15 到 20 只任何年龄或性别的二氧化碳麻醉果蝇,然后将果蝇轻轻地浸入乙醇中,直到它们完全浸没。

不超过 1 分钟后,用 0.3% 非离子表面活性剂洗涤剂溶液在磷酸盐缓冲盐水中冲洗果蝇 3 次,每次洗涤至少 10 分钟。最后一次洗涤后,用镊子去除每只苍蝇的头部和腹部,而不损伤胸段或腿部,并使用一对细镊子的尖端轻轻但坚定地对髋胸交界处施加压力,以将一条腿从胸段上分离。

将支腿放入新的多孔板的一个孔中,在冰上含有新鲜制备的 4% 多聚甲醛,在 4 摄氏度下孵育过夜。

- 重要的是要将支腿轻轻推入固定缓冲液中,不要让它们漂浮,以获得固定良好的支腿。

- 第二天,用新鲜的 0.3% 非离子表面活性剂洗涤剂溶液清洗腿部 5 次,每次洗涤 20 分钟。最后一次洗涤后,用封固剂更换清洁剂,并将支腿放在封固剂中至少 24 小时。

第二天,在玻璃显微镜载玻片的涂层端旁边添加大约 20 微升 70% 甘油,并用 22 x 22 毫米的盖玻片盖住甘油。接下来,在盖玻片右侧加入约 10 微升的封固剂线,并在 10 微升线的右侧涂抹第二条 30 微升的封固剂线。

使用细镊子,将一条腿从多孔板的一滴培养基中以外侧向上或向下方向转移到 10 微升封固剂条带上。重复上述步骤,直到安装并对齐 6 到 8 个支腿,然后将第二个盖玻片放在支腿上,使第二个盖玻片略微放在第一个盖玻片上。然后,在盖玻片的每个角落使用指甲油将其固定到位。

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Last updated: 4 July 2026