吗啉介导的基因编辑：一种在单细胞洞穴鱼卵中使用翻译阻断吗啉寡核苷酸的基因敲低技术

吗啉代是短的、单链的重新设计的寡核苷酸，与天然核苷酸相比，它们的磷酸骨架和糖结构不同。这些特性增强了吗啉代在生理 pH 值下的稳定性。尽管存在这些变化，但吗啉代含有标准核碱基，这有助于设计与要敲低的所需靶基因的特异性 mRNA 序列互补的寡核苷酸。

要进行吗啉代驱动的基因编辑，首先取放置在琼脂糖注射板孔内的单细胞洞穴鱼卵。观察半透明和圆形的鸡蛋，以找到蛋黄囊 - 鸡蛋内部充满液体的结构。

取预装有设计吗啉的溶液的显微注射针。将溶液直接注射到蛋黄中，确保吗啉进入细胞质。在细胞内，靶基因形成 mRNA，mRNA 被转运到细胞质中。

在细胞质内，注射的吗啉代在内源性起始位点与其互补的靶标 mRNA 转录物杂交并延伸到细胞质之外。这个过程阻断了核糖体的较大亚基与新生翻译起始复合物的结合，该复合物由小核糖体亚基与一些特定蛋白质复合而成。

随后，翻译起始复合物的进展受到空间阻碍，从而阻止 mRNA 翻译成蛋白质。最后，由于吗啉代的翻译阻断，靶蛋白浓度降低。