用于定量病毒基因组的斑点印迹检测

要使用斑点印迹法定量病毒 DNA，请从分离的病毒 DNA 悬液开始。用碱性溶液处理，使双链 DNA 变性成单链，用于后续杂交。

斑点印迹仪与预润湿的尼龙膜组装在一起。将变性病毒 DNA 和线性化的标准质粒 DNA 溶液上样到孔中。施加适当的真空，促进有效的带负电荷的病毒单链 DNA 转移，并通过静电相互作用结合到带正电荷的膜表面，形成点状图案。

运行后，用柠檬酸钠缓冲液洗涤膜，有助于提高检测灵敏度。干燥后，将膜暴露在紫外线下，将印迹的 DNA 交联到膜上。

在杂交缓冲液中加入热变性、非异源 DNA 片段和病毒基因组特异性放射性磷标记的 DNA 探针悬液到膜上。孵育，促进杂交。

DNA 片段充当封闭剂，与剩余的膜区域结合，最大限度地减少非特异性探针结合。放射性探针与病毒单链 DNA 上的互补序列杂交。

用洗涤缓冲液洗涤以去除未杂交的探针。使用荧光粉图像扫描系统，量化与膜上的病毒基因组杂交的放射性探针发出的放射性信号，以获得斑点印迹信号。

从标准曲线中，膜上每个点的信号强度可用于计算样品中病毒 DNA 的量。