基于浮力激活细胞分选的T细胞分离技术

为了使用基于浮力的细胞分选技术（BACS）分离T细胞——免疫系统中至关重要的白细胞，请取外周血单个核细胞（PBMC）悬液。PBMC包含目标T细胞以及非目标细胞，如B细胞、单核细胞、自然杀伤细胞和树突状细胞。

加入含有足量生物素标记的抗-CD3抗体的缓冲液，并孵育所需时间。该抗体可结合细胞表面的CD3复合物——一种多聚体蛋白复合物，是T细胞的标志性特征。

加入经功能化的微泡——即表面包被链霉亲和素的小型球形颗粒，用于阳性筛选抗体结合的T细胞。每个微泡的核心为中空球体，使其成为低密度颗粒，可在水溶液中上浮。

在振荡条件下孵育混合物，使微泡与样品充分混合。孵育过程中，微泡上的链霉亲和素与T细胞结合抗体上的生物素结合，从而将细胞固定在微泡上。

离心试管。非靶细胞会从混合物中分离，形成沉淀聚集在底部。

靶向T细胞结合的微泡会漂浮在表面，从而实现基于浮力的T细胞分离。该分离技术可限制对靶细胞的应力影响。使用细口移液管小心移除沉淀及下层液体，避免扰动微泡层。

将分离的、与微泡结合的T细胞重悬于适当的培养基中，以进行后续处理。

首先，将3 × 10⁸个 commercially-obtained PBMCs 与2.5毫升分离缓冲液及生物素标记的抗CD3抗体混合。用移液器轻轻混匀各组分，在室温下孵育10分钟。

根据生产商说明书，按0.5至1的比例向细胞中加入链霉亲和素微泡，并使用商用滚轴混合仪在室温下以20 RPM转速混合10至15分钟。在室温下以400 × g 离心5分钟。

离心后，被正向筛选的细胞将与链霉亲和素微泡一起位于悬液的上层，而未被筛选的其余细胞则会形成管底的细胞沉淀。

使用9英寸玻璃移液管，将管尖插入气泡层下方直至管底。用电子移液器吸取细胞沉淀及上清液，并将其转移至新管中。

将原始离心管中剩余的泡沫状细胞层重悬于1毫升完全T细胞培养基中。室温下以400 × g 离心5分钟，收集上清液用于纯度和回收率的间接测定。