使用浮力激活细胞分选进行基于浮选的 T 细胞分离

要使用浮力激活细胞分选 （BACS） 分离 T 细胞（免疫系统必需的白细胞），取外周血单核细胞 （PBMC） 的悬浮液。PBMC 包含靶 T 细胞和非靶细胞，如 B 细胞、单核细胞、自然杀伤细胞和树突状细胞。

加入含有足量生物素化抗 CD3 抗体的缓冲液并孵育所需的时间。该抗体与CD3复合物（细胞表面的多聚体蛋白复合物）结合，这是T细胞的决定性特征。

添加功能化微泡（涂有链霉亲和素的小球形颗粒），以阳性选择抗体结合的 T 细胞。每个微泡的核心是一个空心球体，使它们成为能够漂浮在水溶液中的低密度颗粒。

搅拌下孵育混合物，使微泡和样品充分混合。在孵育过程中，微泡上的链霉亲和素与 T 细胞结合抗体上的生物素结合，将细胞固定在微泡上。

心管。非目标细胞在底部以沉淀的形式从混合物中分离出来。

目标 T 细胞结合的微泡漂浮在表面，从而导致基于浮力的 T 细胞分离。这种分离技术限制了靶细胞上的应力。使用细移液器，在不干扰微泡层的情况下去除沉淀和潜液。

分离的微泡结合的 T 细胞重悬于适当的培养基中以进行进一步处理。

首先，将 3 x 10⁸ 个商业获得的 PBMC 与生物素化抗 CD3 抗体一起在 2.5 毫升分离缓冲液中孵育。通过移液轻轻混合组分，并在室温下孵育 10 分钟。

根据制造商的说明，以0.5比1的比例将链霉亲和素微泡添加到细胞中，并在室温下使用商业端对端旋转器以20 RPM混合10至15分钟。在室温下以 400 x g 离心 5 分钟。

离心后，阳性选择的细胞将位于带有链霉亲和素微泡的悬浮液顶部，其余未选择的细胞将位于管底部的细胞沉淀中。

使用 9 英寸玻璃移液器，将吸头插入气泡细胞层下方的试管底部。用电动移液器吸出细胞沉淀和潜清液，并将它们转移到新管中。

将留在原始管中的气泡细胞层重悬于 1 毫升完整的 T 细胞培养基中。将亚清液在室温下以400×g离心5分钟，并用于间接测量纯度和回收率。