0 次观看 • 2:55 分钟 • July 8th, 2025
取一个含自然杀伤细胞（NK细胞）和癌细胞的多孔板。对照孔仅含有癌细胞。
离心以促进细胞接触。
孵育。自然杀伤细胞（NK细胞）上的激活受体与癌细胞表面配体结合，触发NK细胞释放含有细胞毒性分子的颗粒。
这些分子可在癌细胞膜上形成孔隙，诱导细胞凋亡，释放胞内内容物，包括乳酸脱氢酶（LDH）。
在对照孔中加入去垢剂，以裂解癌细胞，实现乳酸脱氢酶（LDH）的最大释放。
离心并转移部分含乳酸脱氢酶（LDH）的上清液至检测板中。
加入检测试剂并孵育。
LDH 将乳酸转化为丙酮酸，并还原 NAD+。二氢硫辛酸脱氢酶利用 NADH 还原四氮唑盐，生成红色的甲臜产物。
加入酸性溶液以终止酶促反应。
使用微孔板读板仪测量各孔中甲臜的吸光度。
甲臜的显色强度与检测孔中裂解的癌细胞数量成正比， 表明自然杀伤细胞对癌细胞的细胞毒性作用。
首先，取一个经培养处理的圆底96孔板，并按照文本方案中的表1所示进行设置。将检测板在250 × g 条件下离心4分钟，以确保效应细胞与靶细胞充分接触。接着，将该板置于含5%二氧化碳、37°C的湿化培养箱中孵育5小时。
在收集上清液前45分钟，向靶细胞最大LDH释放孔中加入10微升10倍浓度的裂解液，并将培养板放回加湿孵育环境。孵育结束后，以250 × g离心培养板 g 孵育4分钟。然后，使用多通道移液器将每个孔中的50微升等分试样转移至新的96孔平底检测板中。
向检测板的每个孔中加入 50 µL 检测试剂。用铝箔覆盖检测板以避光，并在室温下孵育 30 分钟。之后，向每个孔中加入 50 µL 终止液。务必在加入终止液后 1 小时内读取检测板，并记录 490 nm 处的吸光度。