从小鼠脊神经根中分离施万细胞

取一根神经根并将其切成小段。

转移至含有消化酶的试管中并孵育。

该酶消化细胞外基质。

加入含血清的培养基以终止消化。

反复吹打混匀，然后离心并弃去上清液。

重悬沉淀。

将悬液通过滤网过滤，以去除未消化的组织。将收集的细胞在培养板中孵育。

成纤维细胞和施万细胞或SCs会贴附在培养板上并进行分裂。

去除未贴壁的细胞。用磷酸盐缓冲液洗涤贴壁细胞。

加入消化酶以松解对消化敏感的 SCs。用培养基终止消化。

通过添加培养基完全解离 SCs。

将细胞转移至离心管中并离心。弃去上清液，用SC特异性培养基重悬细胞。

将细胞转移至未包被的培养板中并进行孵育。

残留的成纤维细胞将会贴壁，从而使施万细胞（SCs）保持悬浮状态。

将悬液转移至包被基质的培养板中。

孵育以促进施万细胞的贴壁与分裂。

用剪刀将神经切成3至5毫米的片段。加入1毫升0.25%胰蛋白酶，将神经片段转移至5毫升离心管中。在37摄氏度下孵育18至20分钟。随后，为终止消化，加入3至4毫升含10%胎牛血清的DMEM培养基。轻轻吹打混合液约10次。在800 × g 条件下离心5分钟。

离心后，弃去上清液，将沉淀物重悬于2至3毫升添加了10%胎牛血清（FBS）的DMEM培养基中。用400目滤网过滤细胞悬液，然后用该悬液接种一个60毫米的培养皿。将培养皿置于37摄氏度、5%二氧化碳环境中孵育4至5天。

当细胞培养至90%融合时，使用1× PBS洗涤细胞一次。随后，为消化雪旺细胞，每60毫米培养皿加入1毫升37摄氏度的0.25%胰蛋白酶。室温下作用8至10秒后，加入3毫升含10% FBS的DMEM终止消化。为使雪旺细胞脱落，用移液器轻轻吹打细胞。

通过显微镜确认细胞已脱落。然后收集含有许旺细胞的培养基，在800 × g 条件下离心5分钟。弃去上清液，将沉淀物重悬于3毫升培养基中。用该悬液接种未标记的60毫米培养皿，并在37摄氏度孵育30至45分钟。将含有许旺细胞的培养基转移至聚-L-赖氨酸包被的培养皿中，于37摄氏度孵育2天。