从小鼠脊髓根中分离雪旺细胞

取一个神经根，切成小块。

转移到含有消化酶的管中并孵育。

该酶消化细胞外基质。

加入含有血清的培养基以停止消化。

反复移液内容物，然后离心并弃去上清液。

重悬沉淀。

悬浮液通过过滤器以去除未消化的组织。将收集的细胞在板中孵育。

成纤维细胞和雪旺细胞或SC附着在板上并分裂。

移除未连接的细胞。用磷酸盐缓冲液洗涤附着的细胞。

添加消化酶以松弛消化敏感的 SC。用培养基停止消化。

通过添加介质完全分离 SC。

细胞转移到管中并离心。弃去上清液并将细胞重悬于 SC 特异性培养基中。

细胞转移到未包被的板中并孵育。

任何剩余的成纤维细胞都会粘附，使 SC 处于悬浮状态。

悬浮液转移到基质涂层板上。

育雪旺细胞附着和分裂。

用剪刀将神经切成 3 至 5 毫米的碎片。加入1毫升0.25%胰蛋白酶，并将神经片段转移到5毫升离心管中。在 37 摄氏度下孵育 18 至 20 分钟。接下来，为了停止消化，加入3至4毫升含有10%胎牛血清的DMEM。轻轻地上下移液混合物，约10次。以 800 倍 g 离心 5 分钟。

离心后，弃去上清液，将沉淀重悬于2至3毫升补充有10%FBS的DMEM中。通过400目过滤器过滤细胞悬液，然后使用悬浮液接种60毫米培养皿。在5%二氧化碳存在下，将培养皿在37摄氏度下孵育4至5天。

当培养物达到90%汇合度时，使用1X PBS洗涤细胞一次。然后，为了消化雪旺细胞，每60毫米培养皿在37摄氏度下加入1毫升0.25%胰蛋白酶。在室温下 8 至 10 秒后，通过加入 3 毫升补充有 10% FBS 的 DMEM 停止消化。要分离雪旺细胞，请用移液器轻轻吹拭细胞。

用显微镜验证细胞是否分离。然后，收集含有雪旺细胞的培养基，并以 800 x g 离心 5 分钟。弃去上清液，并将沉淀物重悬于3毫升培养基中。使用悬浮液接种未编码的60毫米培养皿，并将培养皿在37摄氏度下孵育30至45分钟。将含有雪旺细胞的培养基转移到聚-L-赖氨酸包被的培养基培养皿中，并将培养皿在37摄氏度下孵育2天。