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Seleção e isolamento de colônias de células-tronco pluripotentes induzidas a partir de fibroblastos adultos reprogramado
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JoVE 杂志 生物学
Selecting and Isolating Colonies of Human Induced Pluripotent Stem Cells Reprogrammed from Adult Fibroblasts

Seleção e isolamento de colônias de células-tronco pluripotentes induzidas a partir de fibroblastos adultos reprogramado

DOI:
10.3791/3416-v

•

13:23 min

•

February 20, 2012

•

, , , , ,
1Department of Molecular Carcinogenesis and Center for Cancer Epigenetics,University of Texas M.D. Anderson Cancer Center, 2Department of Cell Biology,Poznan University of Medical Sciences, 3Department of Molecular Biology,The Scripps Research Institute

Chapters

  • 00:05Title
  • 01:31Virus Production
  • 03:53Viral Transduction
  • 05:47Reprogramming
  • 07:24Isolation of Human iPS Cell Colonies
  • 11:14Representative Results: Examining Transduction Efficiency and Characterizing Reprogrammed Cells
  • 12:58Conclusion

Summary

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Nós apresentamos um protocolo para a reprogramação eficiente de células somáticas humanas em células-tronco pluripotentes induzidas (hiPSC) usando vetores retrovirais codificando OCT3 / 4, Sox2, KLF4 e c-myc (OSKM) e identificação de hiPSC corretamente reprogramado pela coloração ao vivo com tradi- 1-81 anticorpo.

Tags

SelectingIsolatingColoniesHuman Induced Pluripotent Stem CellsReprogrammingAdult FibroblastsRetroviral VectorsOct3/4Sox2Klf4C-mycSodium ButyrateEfficient Transduction ProtocolVirus-containing MediaLive ImmunostainingTra-1-81Pluripotent CellsManually PassagedMatrigel PlatesFeeder-free ConditionsHES-like MorphologyExpansionCell LinesPluripotency MarkersTRA-1-60SSEA-4Oct3/4Sox2Nanog

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